Katalazlar
antioksidan metalloenzimler sınıfına dahil olup başlıca işlevleri hidrojen
peroksidin (H2O2) su ve moleküler oksijene
parçalanmasıdır. Temel fonksiyonlarının yanında düşük seviyede peroksidaz
ve(ya) oksidaz aktivitesi göstererek izoniazid (antitüberküloz ilacı) sentezi
gibi tıbbi öneme sahip bazı bileşiklerin sentezini destekledikleri
bilinmektedir. Yakın bir geçmişte Bacillus
pumilus tarafından üretilen 'Fe/hem' grubu içeren bir enzimin katalaz,
peroksidaz ve penisilin oksidaz aktiviteleri gösterdiği yayınlanmıştır. Bunun
üzerine bu enzimin hem diğer katalaz, peroksidaz ve katalaz-peroksidazlar ile
karşılaştırılması hem de ikincil peroksidaz/oksidaz özelliğinin ayrıntılı
olarak irdelenebilmesi için enzimi kodlayan katX2
geninin klonlanması ve Escherichia coli’de
üretimi gerçekleştirilmiştir. Restriksiyon enzimlerinden bağımsız
gerçekleştirilen klonlama tekniğinde ilk olarak B. pumilus Y7’den elde edilen katX2
geni kimerik primerler (5'katX2; 3'katX2) ile bir araya getirilerek megaprimer
oluşturulmuş ve sonrasında bu megaprimer ekspresyon vektörüne başarılı bir
şekilde aktarılmıştır. 510 amino asitten oluşan olgun proteini kodlayan katX2 genini taşıyan pET28aTEV vektörü E. coli BL21 (DE3 star) hücrelerine
transforme edilmiştir. Transformantlarda katalaz aktivitesi için en yüksek
değer (800 µmol ml-1 dak-1) 30ºC’de, IPTG (0,1 mM)
varlığında, 120 rpm çalkalama hızında 24 saat büyütüldüğü ekspresyon
koşullarında ulaşılmıştır.
Birincil Dil | Türkçe |
---|---|
Konular | Mühendislik |
Bölüm | Makaleler |
Yazarlar | |
Yayımlanma Tarihi | 28 Mayıs 2019 |
Gönderilme Tarihi | 25 Eylül 2018 |
Yayımlandığı Sayı | Yıl 2019 Cilt: 19 Sayı: 1 |