@article{article_111897, title={Protein-Protein İlişkilerini Belirlemede Yeni Bir Yöntem: “Proksimiti Ligasyon Assay” (Yakınsal Bağlanma Tespiti)}, journal={Deneysel Tıp Araştırma Enstitüsü Dergisi}, volume={1}, year={2011}, author={Erbilgin, Yücel and Hatırnaz Ng, Özden and Sayitoğlu, Müge and Söderberg, Ola and Özbek, Uğur}, abstract={<!--StartFragment--> <p class="MsoNormal" style="text-align: justify; mso-pagination: none; mso-layout-grid-align: none; text-autospace: none;"> <span lang="TR">Amaç: </span> <span style="font-size: 15.0pt; font-family: Times; mso-bidi-font-family: Times; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: EN-US;" lang="TR"> </span> <span style="mso-bidi-font-size: 15.0pt; mso-bidi-font-family: Times; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: EN-US;">Sinyal yolakları ve proteinlerin fonksiyonel olarak derinlemesine çalışılmasının gerekliliği nedeni ile, proteomiks çalışmalarında protein-protein etkileşimlerinin analizi her geçen gün daha da önemli hale gelmektedir. </span> <span style="mso-bidi-font-size: 16.0pt; mso-bidi-font-family: Times; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: EN-US;"> </span> <span lang="TR">Proksimiti ligasyon assay, hücre ve doku kesitlerinde hücre içi proteinlerin ve protein interaksiyonlarının keşfedilmesi amacı ile kullanılan yeni bir yöntemdir. </span> <span style="mso-bidi-font-size: 14.0pt; mso-bidi-font-family: AdvGulliv-R;" lang="TR">Bu çalışmada, PLA yöntemini kullanarak, WNT sinyal ileti yolağı proteinlerinden </span> <span style="font-family: Symbol; mso-ascii-font-family: "Times New Roman"; mso-hansi-font-family: "Times New Roman"; mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;" lang="TR"> <span style="mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;">b </span> </span> <span lang="TR">-katenin ve Axin2 proteinlerinin etkileşimlerini bir T-hücreli akut lenfoblastik lösemi (T-ALL) hücre hattı olan Jurkat hücrelerinde göstermeyi amaçladık. </span> </p> <p class="MsoNormal" style="margin-bottom: 6.0pt; text-align: justify; mso-layout-grid-align: none; text-autospace: none;"> <span style="mso-bidi-font-size: 14.0pt; mso-bidi-font-family: AdvGulliv-R;" lang="TR">  </span> </p> <p class="MsoNormal" style="margin-bottom: 6.0pt; text-align: justify; mso-layout-grid-align: none; text-autospace: none;"> <span style="mso-bidi-font-size: 14.0pt; mso-bidi-font-family: AdvGulliv-R;" lang="TR">Gereç ve Yöntem: Jurkat hücreleri RPMI’ lı besi yerinde yetiştirilip lamlara fikse edilir. Geçirgen hale getirilen hücreler blokaj aşamasından ardından birincil antikorlar ve PLA probları ile muamele edilirler. Hibridizasyon ve ligasyonunun ardından sirküle oligonükleotidler, sirküle dönen amplifikasyon (RCA) için substrat oluştururlar. </span> <span lang="TR"> RCA ürünleri Texas Red işaretli probların hibridizasyonu ile işaretlenir ve <em style="mso-bidi-font-style: normal;">in situ </em> PLA sinyalleri </span> <span style="mso-bidi-font-size: 14.0pt; mso-bidi-font-family: AdvGulliv-R;" lang="TR">floresan mikroskobunda görüntülenir. </span> </p> <p class="MsoNormal" style="margin-bottom: 6.0pt; text-align: justify; mso-layout-grid-align: none; text-autospace: none;"> <span lang="TR">Bulgular: Öncelikle hücre içi </span> <span style="font-family: Symbol; mso-ascii-font-family: "Times New Roman"; mso-hansi-font-family: "Times New Roman"; mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;" lang="TR"> <span style="mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;">b </span> </span> <span lang="TR">-katenin and Axin2 protein ekspresyonları belirlendi. Ardından </span> <span style="font-family: Symbol; mso-ascii-font-family: "Times New Roman"; mso-hansi-font-family: "Times New Roman"; mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;" lang="TR"> <span style="mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;">b </span> </span> <span lang="TR">-katenin-Axin2 protein interaksiyon varlığı hem nükleus hem de sitoplazmada gösterildi. </span> </p> <p class="MsoNormal" style="text-align: justify;"> <span lang="TR">Sonuç: Burada sunulan sonuçlar, <em style="mso-bidi-font-style: normal;">in situ </em> PLA tekniğinin, WNT yolağı üyelerinin birbirleri ile olan etkileşimlerinin hücresel boyutta tespit edilmesinde kullanılabileceğini göstermiştir. Çalışmamızda, artmış düzeyde </span> <span style="font-family: Symbol; mso-ascii-font-family: "Times New Roman"; mso-hansi-font-family: "Times New Roman"; mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;" lang="TR"> <span style="mso-char-type: symbol; mso-symbol-font-family: Symbol;">b </span> </span> <span lang="TR">-katenin-Axin2 protein etkileşimini T-ALL hücre soyunda (Jurkat) gösterdik. Bu WNT sinyal yolağının T-ALL de bozulmuş regülasyonuna işaret ettiğini göz önünde bulundurursak WNT yolağı elemanları yeni tedavi protokolleri için birer hedef molekül halini alabilirler.  </span> </p> <!--EndFragment-->}, number={2}, publisher={Istanbul University}