Research Article
BibTex RIS Cite

Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri

Year 2017, Volume: 12 Issue: 2, 187 - 194, 30.10.2017
https://doi.org/10.17094/ataunivbd.347975

Abstract

Bu çalışmada, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enzimi
(6PGD; E.C.1.1.1.44) Van Kedisi eritrositinden afinite kromatografisi ile
saflaştırıldı. Netilmicin sülfat, Ampicillin ve Amoxicillin’nin inhibitor
etkisi incelendi. Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre spektrofotometre ile
340 nm’de ölçüldü. Sonra enzimin optimum pH ve optimum sıcaklığı sırasıyla 8.0
ve 50 0C olarak tespit edildi. Enzimin saflığı sodyumdodesilsülfat-
poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile kontrol edildi. 6PGD eritrositi
için saflaştırma oranı 1787 olarak bulundu. NADP+ ve 6PGA
substratları için KM ve Vmax değerleri hesaplandı. Netilmicin
sülfat, Ampicillin ve Amoxicillin’nin inhibitor etkileri incelendi, Ki
değerleri ve inhibisyon tipleri Lineweaver-Burk grafiğinden tespit edildi.

References

  • 1. Toews ML., Kanjı M., Carper W., 1976. 6-phosphogluconate dehydrogenase. The J of Biolog Chem, 251, 7127-7131. 2. Tandoğan B., Ulusu NN., 2003. 6-fosfoglukonat dehidrogenaz: Moleküler ve kinetik özellikleri. Türk Biyo Dergisi, 28, 268-273. 3. Caprari P., Caforio MP., Cianciulli P., Maffi D., Pasquino MT., Tarzia A., Amadori S., Salvati AM., 2001. 6-Phosphogluconate dehydrogenase deficiency in an Italian family. Annals of Hemato, 80, 41-44. 4. Corrons V., Colomer D., Pujades A., Rovira A., Aymerich M., Merino A., 1996. Congenital 6-phosphogluconate dehydrogenase deficiency Associated with chronic hemolytic anemia in a Spanish family. American J of Hemato, 53, 221-227. 5. Walzem RL., Storebakken T., Hung SSO., Hansen RJ., 1991. Relationship between growth and selected liver enzyme activities of individual rainbow trout. J of Nutrition, 121, 1090-1098. 6. Barrett P., 1997. The pentose phosphate pathway and parasitic protozoa. Parasitol Today, 13 (1), 11-16. 7. Keha EE., Küfrevioğlu Öİ., 2000. Biyokimya. 344-345, Aktif Yayınevi, Ankara. 8. Gözükara E., 1989. Enzimler. ”Biyokimya”, 572-576, Ofset Repromat Ltd. Şti., Ankara. 9. Beutler E., 1971. Redcell metabolism. “Manual of biochemical methods”, 12, 68-70, Academic press, London. 10. Gür F., Beydemir Ş., Gümüştekin K., Bakan N., 2014. Ketoprofenin 6-fosfoglukonat dehidrogenaz aktivitesi üzerine in vitro ve in vivo etkisinin araştırılması. Atatürk Üni Vet Bil Derg, 9, 173-179. 11. Beydemir Ş., Çiftçi M., Yılmaz H., Küfrevioğlu OI., 2004. 6-phosphogluconate dehydrogenase: Purification, characterization and kinetic properties from Rat erythrocytes. Turk J of Vet Ani Sci, 28, 707-714. 12. Laemmli DK., 1970. Clevage of structural proteins during in assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 680-683. 13. Bradford MM., 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analy Biochem, 7, 248-254. 14. Özabacıgil F., 2005. İnsan eritrosit 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması, bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine in vitro ve tavşanlarda in vivo etkisinin incelenmesi. Atatürk Üni, Sağ Bil Ens, Erzurum, Türkiye. 15. Akyüz M., Erat M., Çiftçi M., Gümüştekin K., Bakan N., 2004. Effects of some antibiotics on human erythrocyte 6-Phospho Gluconate Dehydrogenase: An in vitro and in Vivo study. J of Enzyme Inhi and Medicinal Chem, 19, 361-365. 16. Adem Ş., Çiftçi M., 2007. Effects of some drugs on human erythrocyte 6-phosphogluconate dehydrogenase: an in vitro study. J of Enzyme Inhi and Med Chem, 22, 751-754. 17. Ciftci M., Beydemir S., Yılmaz H., Bakan E., 2002. Effects of some drugs on rat erythrocyte 6-phosphogluconate dehydrogenase: An in vitro and in vivo study. J Pharma, 54:275-280. 18. Weisz KS., Schofield PJ., Edwards MR., 1985. Human brain 6-PGD: Purification and kinetic properties. J of Neurochem, 44, 510-517. 19. Demir H., Çiftçi M., Küfrevioğlu Öİ., 2003. Purification of 6-phosphogluconate dehydrogenase from Parsley (Petroselinum hortense) leaves and investigation of some kinetic properties. Prep Biochemhem and Biotech ,33, 39-52. 20. Krepinsky K., Plaumann M., Martin W., Schnarrenberger C., 2001. Purification and cloning of chloroplast 6-PGD from spinach. Euro J of Biochem, 268, 2678-2686. 21. Ceyhan D., Danısan A., Oğu, IH., Ozer N., 2005. Purification and kinetic properties of 6-phosphogluconate dehydrogenase from rat small intesine. The Protein J, 24, 293-301. 22. Ohara H., Russell RA., Uchide K., Kondo H., 2004. Purification and characterization of NAD spesific 6-phosphogluconate dehydrogenase from Leuconostoc lactis SHO-54. J of Biosci and Bioengin, 98, 126-128. 23. Erat M., 2005. Purification of 6-phosphogluconate dehydrogenase from chicken liver and investigation of same kinetic properties. Prep Biochemhem and Biotechno, 35, 53-69.

Purification, Characterisation and Kinetic Properties of 6-Phosphogluconate Dehydrogenase Enzyme (E.C. 1.1.1.44) from the Van Cat Erythrocyte

Year 2017, Volume: 12 Issue: 2, 187 - 194, 30.10.2017
https://doi.org/10.17094/ataunivbd.347975

Abstract

In this study, 6-phosphogluconate dehydrogenase enzyme
(6PGD; E.C.1.1.1.44)  was purified from
erythrocyte the Van Cat by affinity chromatography. The inhibitor effect of
Netilmicin sulphate, Ampicillin and
Amoxicillin were also examined. Enzyme
activity was measured by spectrophotometer according to Beutler method at 340
nm. Then the optimum pH and optimum temperature of the enzyme were determined
to be 8.0 and 50 ° C, respectively. In order to control the purification of
enzyme, sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was
used.
The
purification rate for erythrocyte 6PGD was found as 1787. KM and Vmax
were also determined for NADP+ and 6PGA as substrates.
The inhibitor
effect of Netilmicin sulphate, Ampicillin and
Amoxicillin were also examined and Ki
values and the types of inhibition were determined by the Lineweaver-Burk
graph. 

References

  • 1. Toews ML., Kanjı M., Carper W., 1976. 6-phosphogluconate dehydrogenase. The J of Biolog Chem, 251, 7127-7131. 2. Tandoğan B., Ulusu NN., 2003. 6-fosfoglukonat dehidrogenaz: Moleküler ve kinetik özellikleri. Türk Biyo Dergisi, 28, 268-273. 3. Caprari P., Caforio MP., Cianciulli P., Maffi D., Pasquino MT., Tarzia A., Amadori S., Salvati AM., 2001. 6-Phosphogluconate dehydrogenase deficiency in an Italian family. Annals of Hemato, 80, 41-44. 4. Corrons V., Colomer D., Pujades A., Rovira A., Aymerich M., Merino A., 1996. Congenital 6-phosphogluconate dehydrogenase deficiency Associated with chronic hemolytic anemia in a Spanish family. American J of Hemato, 53, 221-227. 5. Walzem RL., Storebakken T., Hung SSO., Hansen RJ., 1991. Relationship between growth and selected liver enzyme activities of individual rainbow trout. J of Nutrition, 121, 1090-1098. 6. Barrett P., 1997. The pentose phosphate pathway and parasitic protozoa. Parasitol Today, 13 (1), 11-16. 7. Keha EE., Küfrevioğlu Öİ., 2000. Biyokimya. 344-345, Aktif Yayınevi, Ankara. 8. Gözükara E., 1989. Enzimler. ”Biyokimya”, 572-576, Ofset Repromat Ltd. Şti., Ankara. 9. Beutler E., 1971. Redcell metabolism. “Manual of biochemical methods”, 12, 68-70, Academic press, London. 10. Gür F., Beydemir Ş., Gümüştekin K., Bakan N., 2014. Ketoprofenin 6-fosfoglukonat dehidrogenaz aktivitesi üzerine in vitro ve in vivo etkisinin araştırılması. Atatürk Üni Vet Bil Derg, 9, 173-179. 11. Beydemir Ş., Çiftçi M., Yılmaz H., Küfrevioğlu OI., 2004. 6-phosphogluconate dehydrogenase: Purification, characterization and kinetic properties from Rat erythrocytes. Turk J of Vet Ani Sci, 28, 707-714. 12. Laemmli DK., 1970. Clevage of structural proteins during in assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 680-683. 13. Bradford MM., 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analy Biochem, 7, 248-254. 14. Özabacıgil F., 2005. İnsan eritrosit 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması, bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine in vitro ve tavşanlarda in vivo etkisinin incelenmesi. Atatürk Üni, Sağ Bil Ens, Erzurum, Türkiye. 15. Akyüz M., Erat M., Çiftçi M., Gümüştekin K., Bakan N., 2004. Effects of some antibiotics on human erythrocyte 6-Phospho Gluconate Dehydrogenase: An in vitro and in Vivo study. J of Enzyme Inhi and Medicinal Chem, 19, 361-365. 16. Adem Ş., Çiftçi M., 2007. Effects of some drugs on human erythrocyte 6-phosphogluconate dehydrogenase: an in vitro study. J of Enzyme Inhi and Med Chem, 22, 751-754. 17. Ciftci M., Beydemir S., Yılmaz H., Bakan E., 2002. Effects of some drugs on rat erythrocyte 6-phosphogluconate dehydrogenase: An in vitro and in vivo study. J Pharma, 54:275-280. 18. Weisz KS., Schofield PJ., Edwards MR., 1985. Human brain 6-PGD: Purification and kinetic properties. J of Neurochem, 44, 510-517. 19. Demir H., Çiftçi M., Küfrevioğlu Öİ., 2003. Purification of 6-phosphogluconate dehydrogenase from Parsley (Petroselinum hortense) leaves and investigation of some kinetic properties. Prep Biochemhem and Biotech ,33, 39-52. 20. Krepinsky K., Plaumann M., Martin W., Schnarrenberger C., 2001. Purification and cloning of chloroplast 6-PGD from spinach. Euro J of Biochem, 268, 2678-2686. 21. Ceyhan D., Danısan A., Oğu, IH., Ozer N., 2005. Purification and kinetic properties of 6-phosphogluconate dehydrogenase from rat small intesine. The Protein J, 24, 293-301. 22. Ohara H., Russell RA., Uchide K., Kondo H., 2004. Purification and characterization of NAD spesific 6-phosphogluconate dehydrogenase from Leuconostoc lactis SHO-54. J of Biosci and Bioengin, 98, 126-128. 23. Erat M., 2005. Purification of 6-phosphogluconate dehydrogenase from chicken liver and investigation of same kinetic properties. Prep Biochemhem and Biotechno, 35, 53-69.
There are 1 citations in total.

Details

Journal Section Araştırma Makaleleri
Authors

Serpil Kılıç This is me

Publication Date October 30, 2017
Published in Issue Year 2017 Volume: 12 Issue: 2

Cite

APA Kılıç, S. (2017). Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi, 12(2), 187-194. https://doi.org/10.17094/ataunivbd.347975
AMA Kılıç S. Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi. October 2017;12(2):187-194. doi:10.17094/ataunivbd.347975
Chicago Kılıç, Serpil. “Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu Ve Kinetik Özellikleri”. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi 12, no. 2 (October 2017): 187-94. https://doi.org/10.17094/ataunivbd.347975.
EndNote Kılıç S (October 1, 2017) Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi 12 2 187–194.
IEEE S. Kılıç, “Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri”, Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi, vol. 12, no. 2, pp. 187–194, 2017, doi: 10.17094/ataunivbd.347975.
ISNAD Kılıç, Serpil. “Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu Ve Kinetik Özellikleri”. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi 12/2 (October 2017), 187-194. https://doi.org/10.17094/ataunivbd.347975.
JAMA Kılıç S. Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi. 2017;12:187–194.
MLA Kılıç, Serpil. “Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu Ve Kinetik Özellikleri”. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi, vol. 12, no. 2, 2017, pp. 187-94, doi:10.17094/ataunivbd.347975.
Vancouver Kılıç S. Van Kedisi Eritrositi’nden 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzimi (E.C. 1.1.1.44)’nin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Kinetik Özellikleri. Atatürk Üniversitesi Veteriner Bilimleri Dergisi. 2017;12(2):187-94.