TY  - JOUR
T1  - The Effect of Washing After Protein Blocking on Immunohistochemical Staining Applied to Paraffin Sections
TT  - Parafin Kesitlere Uygulanan İmmünohistokimyasal Boyamada Protein Blokajı Sonrası Yıkama Yapılmasının Sonuca Etkisi
AU  - Keçeci, Mete
AU  - Koca, Elif
AU  - Arslan, Esra
AU  - Denek, Reyyan Başak
AU  - Sarı, Ezgi Su
AU  - Akpınar, İpek Pınar
AU  - Ülker, Bünyamin
AU  - Atıcı, Kağan
AU  - Erbakan, Özgenur
AU  - Cengil, Osman
PY  - 2023
DA  - December
Y2  - 2023
DO  - 10.29058/mjwbs.1337146
JF  - Medical Journal of Western Black Sea
JO  - Med J West Black Sea
PB  - Zonguldak Bülent Ecevit Üniversitesi
WT  - DergiPark
SN  - 2822-4302
SP  - 325
EP  - 330
VL  - 7
IS  - 3
LA  - en
AB  - Aim: Immunohistochemistry is still frequently preferred in both diagnostic and experimental studiesbecause it can show proteins where they are in the tissue. One of the main problems in immunohistochemistryis the background staining, which can be prevented by protein blocking and which occurs asa result of binding of primary antibodies to tissue proteins and Fc receptors in the tissue due to antigenicsimilarity. There is no consensus on whether to wash after protein blocking in current publications andimmunohistochemistry manuals published by manufacturers.Material and Methods: In our study, routine immunohistochemistry procedure was applied to determinethe expression of TNF-α on 5 μm thick sections obtained from rat gastric tissue samples in which anexperimental gastric ulcer model was created with ethanol, and two groups were formed, with and withoutwashing after protein blocking, with 10 sections in each group. For semi-quantitative evaluation, thehistological score (h-score) was calculated from the images obtained from the immunohistochemicallystained preparations of both groups and the obtained data were statistically compared.Results: As a result of our study, no statistically significant difference was found between the h-scorevalues of the groups that were washed after protein blocking in immunohistochemical staining andthe groups that did not wash (p=0.971). The median (min-max) values of the groups with and withoutwashing are 211 (179-244) and 215 (171-251), respectively.Conclusion: In the immunohistochemical staining procedure, washing after protein blocking does notchange the staining intensity, does not create background staining, and does not affect the result ofthe h-score for semiquantitative evaluation. Similar studies are recommended for other species, tissuetypes and antigens.
KW  - Immunohistochemistry
KW  - Paraffin section
KW  - Protein blocking
KW  - Washing
KW  - h-score
N2  - Amaç: İmmünohistokimya, proteinleri dokuda bulundukları yerde gösterebilmesi nedeniyle gerek tanısalgerek ise deneysel çalışmalarda günümüzde halen sıklıkla tercih edilmektedir. İmmünohistokimyadatemel problemlerden biri de, protein bloklama yapılarak önlenebilen ve antijenik benzerlik nedeniyledoku proteinlerine ve dokudaki Fc reseptörlerine primer antikorların bağlanması sonucu ortaya çıkan zemin boyanmasıdır. Güncel yayınlarda ve üreticiler tarafından yayımlanan immünohistokimya el kitaplarında protein bloklama sonrasıyıkama yapılıp yapılmaması konusunda fikir birliği yoktur.Gereç ve Yöntemler: Çalışmamızda etanol ile deneysel mide ülseri modeli oluşturulmuş sıçan mide doku örneklerinden elde edilen 5μm kalınlığındaki kesitlere TNF-α ifadesini belirlemek amacıyla rutin immünohistokimya prosedürü uygulanmış ve her grupta kesit sayısı10 olacak şekilde protein bloklama sonrası yıkama yapılan ve yapılmayan iki grup oluşturulmuştur. Her iki grubun immünohistokimyasalyöntemle boyanmış preparatlarından elde edilen görseller üzerinden semikantitatif değerlendirme amacıyla histolojik skor (h-skoru)çıkarılmış ve elde edilen veriler istatistiksel olarak karşılaştırılmıştır.Bulgular: Çalışmamızın sonucunda immünohistokimyasal boyamada protein bloklama sonrası yıkama yapılan grup ile yıkama yapılmayangrupların h-skor değerleri arasında istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmamıştır (p=0,971). Yıkama yapılan ve yapılmayan gruplara aitmedyan (min-maks) değerleri sırasıyla 211 (179-244) ve 215 (171-251)’dir.Sonuç: İmmünohistokimyasal boyama prosedüründe protein bloklama sonrası yıkama yapılması zemin boyanması oluşturmamakta vesemikantitatif değerlendirme için yapılan h-skoru sonucunu etkilememektedir. Diğer doku tipleri ve antijenler için de benzer çalışmalaryapılması önerilmektedir.
CR  - 1. Ramos-Vara, J. A., Kiupel, M., Baszler, T., Bliven, L., Brodersen,
B., Chelack, B., Czub, S., Del Piero, F., Dial, S., Ehrhart,
E. J., Graham, T., Manning, L., Paulsen, D., Valli, V. E., West,
K., & American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians
Subcommittee on Standardization of Immunohistochemistry
(2008). Suggested guidelines for immunohistochemical
techniques in veterinary diagnostic laboratories. Journal of
veterinary diagnostic investigation : official publication of the
American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians,
Inc, 20(4), 393–413.
CR  - 2. PC Goodwin et al., Microscopy, Immuno-Histochemistry, Digital
Imaging, and Quantitative Microscopy (2017) in Comparative
Anatomy and Histology, PM Treuting et al., eds., Academic
Press, 2017.
CR  - 3. Sukswai, N., & Khoury, J. D. (2019). Immunohistochemistry
Innovations for Diagnosis and Tissue-Based Biomarker Detection.
Current hematologic malignancy reports, 14(5), 368–375.
CR  - 4. Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., & Tiemann, M.
(2011). Non-specific binding of antibodies in immunohistochemistry:
fallacies and facts. Scientific reports, 1, 28.
UR  - https://doi.org/10.29058/mjwbs.1337146
L1  - https://dergipark.org.tr/tr/download/article-file/3305869
ER  -