KLİNİK SİTOGENETİK LABORATUVARINDA KAN KÜLTÜRÜNDEN YETERLİ SAYIDA ve YÜKSEK ÇÖZÜNÜRLÜKTE METAFAZ ALANI ELDE ETMEK İÇİN DİKKAT EDİLMESİ GEREKEN NOKTALAR

Yıl 2018, Cilt: 11 Sayı: 2, 1 - 4, 27.12.2018

Serdar Yüksel Özgür Eroğlu

Öz

Giriş: Klinik sitogenetik,  insan kemik iliği, fibroblast hücreleri ve
lenfosit hücrelerini dış ortamda üretip metafaz aşamasında durdurmak sureti ile
mikroskop preparatları hazırlanması, bu preparatların boyanması, kromozomal bantların
elde edilmesi  ve insan kromozomlarının
sayısal ve yapısal olarak değerlendirilmesi çalışmaları olarak özetlenebilir.

Amaç: Klinik sitogenetik çalışmaları
görüşte basit bir hücre kültürü çalışmasını takiben yapılan preparat boyanması
gibi basitçe özetlense de, aslında zahmetli, sabır isteyen, uzman ve tecrübeli
laboratuvar personeline ihtiyaç duyulan, hassas, kimi zaman iklim ve bölgesel
koşullar tarafından bile etkilenen süreçleri içerir. Dolayısı ile sitogenetikte
yeterli ve kaliteli metafaz alanı elde etmek zordur. Bu nedenle bu çalışmada
sitogenetikte yeterli sayı, kalite ve yüksek bant çözünürlüğünde metafaz alanı
elde etmek için yapılması gerekenlerden bahsettik.

Materyal ve Metod: Periferik kan ve kordon kanı hücre
kültürü ile hücre üretim aşamaları, boyama prosedürleri karşılaştırılarak, en
etkili yöntemler ve bu aşamalarda dikkat edilmesi gereken noktalar belirtildi.

Bulgular ve sonuç: Klinik sitogenetikte hangi örnek
çalışılıyorsa çalışılsın en kritik aşama hücre kültürü evresidir. Numunenin
alınması, numunenin durumu, ekim aşaması, ekim sonrası inkübatörde üreme ve
enfeksiyon takibi, kan kültüründe inkübatörde bulunan örneğin çökelmesinin
önlemesi, besiyeri seçimi, besiyeri takibi, fiksasyon aşamasında çok yavaş
metanol-asetik asit eklenmesi özellikle önem taşımaktadır.

Anahtar Kelimeler

Klinik sitogenetik, Karyotip, Hücre Kültürü, Kromozom Boyama

Kaynakça

• 1. Lewis R 2007. Human genetics: Concepts and applications. 7th Edition, McGraw Hill, New York, USA.
• 2. Lewis R 2012. Human genetics: Concepts and applications. 10th Edition, McGraw Hill, New York, USA.
• 3. Thieman WJ and Palladino MA 2012. Introduction to biotechnology. Pearson, Boston, USA. PMCid:PMC3354769
• 4. Hartl DL and Ruvolo M 2011. Genetics: analysis of genes and genomes. 8th Edition, Jones and Bartlett Learning, Burlington, Massachusetts, USA. 5. Miglani GS 2008. Fundamentals of genetics. Alpha Science International Limited, Oxford, UK. PMid:19075051 PMCid:PMC2663096
• 6. Russell PJ 2006. iGenetics: A molecular approach. Pearson/Benjamin Cummings, San Fracisco, California, USA.
• 7. Smith JE 2009 Biotechnology. Cambridge University Press, Cambridge, USA. https://doi.org/10.1017/CBO9780511802751
• 8. Snustad DP and Simmons MJ 2012. Genetics. 6th Edition. International student version, John Wiley and Sons, Singapore, Singapore.
• 9. Strachan T and Read A 2010. Human molecular genetics. 4th Edition, Taylor and Francis Group, Garland Science, New York, USA. 10. ACT Laboratory Procedure Manual, 1980, section 2, pgs.70-77 and 2nd edition, 1991, chapter 2 pg 24-30.
• 11. Panda SK, Ravindran B 2013. In vitro Culture of Human PBMCs. Bio-protocol 3(3): e322. DOI: 10.21769/BioProtoc.322.
• 12. Panda SK, Kumar S, Tupperwar N, Vaidya T, George A, Rath S. 2012. Chitohexaose activates macrophages by alternate pathway through TLR4 and blocks endotoxemia. PLoS Pathog 8(5): e1002717.
• 13. Dulbecco R. et al. 1954. Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses. In: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pp. 167-182. PMID 13130792
• 14. Sambrook, Fritsch, Maniatis 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volume 3, apendix B.12
• 15. Portions of this article are from “Phosphate buffered saline. In Wikipedia, the free encyclopedia. Retrieved September 17, 2008, from http://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate_buffered_saline.” This article has been reviewed for scientific accuracy and is used in accordance with Wikipedia’s GNU Free Documentation License (GFDL).