METİSİLİNE DİRENÇLİ STAPHYLOCOCCUS AUREUS KLİNİK İZOLATLARININ HIZLI BELİRLENMESİ İÇİN StaResMet®’İN PERFORMANSININ DEĞERLENDİRİLMESİ

Abstract

Metisilin direncinin hızlı ve doğru tespiti, Staphylococcus aureus ile gelişen enfeksiyonların tedavisinde önemli bir aşamadır. Bu çalışmada, Akdeniz Üniversitesi Hastanesi Merkez Laboratuvarı kültür koleksiyonundan temin edilen S. aureus izolatlarında metisilin direncinin hızlı tespiti için StaResMet® kiti (AYCMED Medikal ve Tıbbi Cihazlar San. ve Tic. A.Ş., Samsun, Türkiye) değerlendirilmiştir. Tür düzeyinde tanımlamaları MALDİ-TOF (Becton Dickinson, BD) ile yapılarak seçilen 290 adet S. aureus izolatı, StaResMet® kiti ile metisilin direnci açısından test edilmiştir. Çalışmada referans yöntem olarak CLSI tarafından önerilen sıvı mikrodilüsyon (SMD) yöntemi kullanılarak sefoksitin minimum inhibitör konsantrasyonu (MİK) belirlenmiştir. Test yöntemleri eş zamanlı olarak, aynı bakteriyel inokulumlar kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Kalite kontrol için S. aureus ATCC 29213 (metisiline duyarlı) ve S. aureus ATCC 43300 (metisiline dirençli) suşları kullanılmıştır. CLSI kriterlerine göre MİK ≤4 μg/ml olan suşlar, metisiline duyarlı; MİK ≥8 μg/ml olan suşlar ise metisiline dirençli kabul edilmiştir. StaResMet® ile tüm izolatların inkübasyonun altıncı saatinde duyarlılık sonuçları belirlenmiş ve SMD ile 20 saatin sonunda elde edilen duyarlılık sonuçları ile karşılaştırılmıştır. StaResMet® kiti ile alınan duyarlılık sonuçları, SMD ile kategorik olarak 100 % uyumlu bulunmuştur. Referans yöntem ile StaResMet® kit arasında temel uyum oranı 98.27 % olarak saptanmıştır. Her iki yöntem arasında da küçük, büyük veya çok büyük uyumsuzluk bulunmamıştır. StaResMet®, metisiline dirençli Staphylococcus aureus’un saptanmasında hızlı, kullanımı kolay, güvenilir bir kolorimetrik ilaç duyarlılık kiti olup, klinik uygulamalarda kullanılma potansiyelinin yüksek olduğu düşünülmüştür.

Keywords

• kolorimetrik yöntem
• metisilin direnci
• Staphylococcus aureus
• StaResMet®

Performance Evaluation of StaResMet® for Rapid Identification of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Clinical Isolates

Abstract

Rapid and accurate detection of methicillin resistance is an important step in the treatment of Staphylococcus aureus infections. We evaluated StaResMet® kit(AYCMED Medical and Medical Devices Industry and Trade Inc. Samsun, Turkey) for rapid detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus isolates obtained from Akdeniz University Hospital Central Laboratory culture collection. Species-level identification was performed with MALDI-TOF (Becton Dickinson, BD) and selected 290 S.aureus isolates were tested for methicillin resistance with a StaResMet® kit. In the study, the minimum inhibitory concentration (MIC) of cefoxitin was determined by using the broth microdilution (BMD) method recommended by CLSI as the reference method. Test methods were performed simultaneously using the same bacterial inoculum. S. aureus ATCC 29213 (methicillin-susceptible) and S. aureus ATCC 43300 (methicillin-resistant) strains were used for quality control. Strains with MIC ≤4 μg/ml according to CLSI criteria were methicillin sensitive; Strains with MIC ≥8 μg/ml were considered methicillin resistant. Susceptibility results of all isolates were determined at 6th hour of incubation with StaResMet® and compared with BMD susceptibility results obtained at the end of 20 hours. The susceptibility results obtained with the StaResMet® kit were found to be 100% compatible with BMD. The essential agreement between the reference method and the StaResMet® kit was 98.27%. There is no minor, major or very major discrepancy between both methods. StaResMet® is a rapid, easy-to-use and reliable colorimetric drug susceptibility kit for the detection of methicillin-resistant S. aureus and was considered to have a high potential to be used in clinical applications.

Keywords

• colorimetric method
• methicillin resistance
• Staphylococcus aureus
• StaResMet®

References

1. 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, 30th edition. CLSI standard M100. CLSI, Wayne, PA. (2020).
2. 2. Çoban AY, Demirpek U, Çiftçi A, et al. Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: bir sınır değer duyarlılık test yöntemi. Mikrobiyol Bul. 2014;48(1):40-7. doi:10.5578/mb.6614
3. 3. Coban AY. Rapid determination of methicillin resistance among Staphylococcus aureus clinical isolates by colorimetric methods. J Clin Microbiol. 2012;50(7):2191-3. doi: 10.1128/JCM.00471
4. 4. Domínguez MA, Liñares J, Martín R. Molecular mechanisms of methicillin resistance in Staphylococcus aureus. Microbiologia. 1997;13(3):301-8.
5. 5. Duckworth G. Controlling methicillin resistant Staphylococcus aureus: Time to return to more stringent methods of control in the United Kingdom? BMJ. 2003;327(7425):1177-8. doi: 10.1136/bmj.327.7425.1177
6. 6. Food and Drug Administration. Guidance for Industry and FDA Class II Special Controls Guidance Document: Antimicrobial Susceptibility Test (AST) Systems, (2009).
7. 7. Hafez HM, Abd El Hamid DH, Tarek D, Gomaa FM. Resazurin microplate assay: Rapid assay for detection of methicillin resistant Staphylococcus aureus. Int J Cur Microb App Sci. 2017;6(4):174-81. doi: 10.546/ijcmas
8. 8. Kurlenda J, Grinholc M. Current diagnostic tools for methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections. Mol Diagn Ther. 2010;14(2):73-80. doi: 10.1007/BF03256356

9. 9. McClure JA, Conly JM, Obasuyi O, et al. A novel assay for detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus directly from clinical samples. Front Microbiol. 2020;11:1295. doi: 10.3389/fmicb.2020.01295
10. 10. Milletli Sezgin F, Vural A, Kiraz A, et al. Same-day detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus ısolates by StaResMet® Kit. Jundishapur J. Microbiol. 2017;10(11):e14937. doi: 10.5812/jjm.14937
11. 11. Mizusawa M, Carroll KC. Novel strategies for rapid identification and susceptibility testing of MRSA. Expert Rev Anti Infect Ther. 2020;18(8):759-78. doi: 10.1080/14787210.2020.1760842
12. 12. Nour M, Mastouri M, Nejma MB. Le staphylocoque doré résistant à la méticilline: émergence et bases moléculaires de la résistance. Pathol Biol. 2005;53(6):334-40. doi: 10.1016/j.patbio.2004.08.001
13. 13. Orhan Z, Kayış A, Akyol İ, Kaya E, Aral M. Klinik Staphlococcus aureus izolatlarının bazı antibiyotiklere dirençlerinin fenotipik ve genotipik olarak belirlenmesi. FLORA. 2017;22(3):102-9. doi: 10.5578/flora.64045
14. 14. Soysal M, Coban AY. Staphylococcus aureus izolatlarında metisilin direncinin hızlı tespitinde StaResMet®’in değerlendirilmesi. KLIMIK Derg. 2017;30(2):64-7. doi: 10.5152/kd.2017.16
15. 15. Temiz H, Kaya Ş, Temiz S. Kan kültürlerinden izole edilen Staphlococcus aureus suşlarında antibiyotiklere direnç. FLORA. 2014;19(2):80-4.
16. 16. Tenover FC, Tickler IA. Detection of methicillin-Resistant Staphylococcus aureus infections using molecular methods. Antibiotics (Basel, Switzerland). 2022;11(2):239. doi: 10.3390/antibiotics11020239