Tütün Dumanına Maruz Kalan Ratlarda Hesperetinin Testis Dokusundaki Antioksidan Etkisinin İncelenmesi

Year 2017, Volume: 6 Issue: 2, 4 - 9, 01.10.2017

Osman Fatih Yilmaz Nalan Kaya Gonca Ozan Şeyma Özer Kaya Dürrin Özlem Dabak İbrahim Enver Ozan

Abstract

Amaç: Tütün dumanında bulunan ve kanla taşınan toksik maddeler oksidan antioksidan sistem arasındaki dengeyi dokular aleyhine değiştirmektedir. Antioksidan, antimikrobiyal ve antiinflammatuvar özelliklerinin olduğu bilinen hesperetin; limon, portakal ve greyfurt gibi turunçgillerde bulunur. Çalışmada tütün dumanı maruziyetinin testis dokusunda oluşturacağı hasara karşı hesperetinin koruyucu etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmada 24 adet erişkin Spraque-Dawley erkek rat kullanıldı. Ratlar 4 gruba ayrıldı n:6 :kontrol K , tütün dumanı TD , tütün dumanı+mısırözü yağı TD+M ve tütün dumanı+hesperetin TD+HES . TD, TD+M ve TD+HES gruplarındaki ratlar, günde iki defa birer saat tütün dumanına maruz bırakıldı. TD+HES grubundaki ratlara tütün dumanına ilaveten oral gavajla, mısırözü yağında çözülmüş hesperetin gün aşırı 50 mg/kg dozunda uygulandı. TD+M yağı grubundaki ratlara ise tütün dumanına ilaveten hesperetini çözmede kullanılan miktarda mısırözü yağı gün aşırı oral gavajla verildi. 12 haftalık deney süresi sonunda tüm gruplardaki ratlar dekapite edildi. Testis dokuları çıkarıldı. Histokimyasal ve eNOS boyamaları ile TUNEL yöntemi uygulandı. Biyokimyasal analizler ve sperm analizleri yapıldı. Bulgular: TD ve TD+M gruplarına ait kesitlerde seminifer tübül germinal epitelinde dejenerasyon, atrofik tübüller, vasküler konjesyon, seminifer tübül bazal membranlarında ayrılmalar, interstisyel alanda ödem ve bazı tübüllerde lümene dökülmüş immatür hücreler tespit edildi. Ayrıca bu gruplarda apoptotik hücre sayısında ve eNOS immünreaktivitesinde artış gözlendi. Hesperetin uygulamasının histolojik değişimlerde, eNOS immünreaktivitesinde ve apoptotik hücre sayısında azalmaya neden olduğu belirlendi. Malondialdehit MDA düzeyleri TD ve TD+M gruplarında arttığı, hesperetin uygulamasının ise MDA düzeyini azalttığı tespit edildi. Katalaz CAT ve glutatyon peroksidaz GSH-Px enzim aktivitelerinin, TD ve TD+M gruplarında azaldığı, TD+HES grubunda ise GSH-Px aktivitesinin arttığı tespit edildi. CAT aktivitesi açısından TD, TD+M ve TD+HES grupları arasında fark bulunamadı. TD ve TD+M gruplarında anormal sperm sayısında artış, TD+HES grubunda ise azalma tespit edildi. Sonuç: Bulgular tütün dumanının testis dokusunda hasara neden olduğu ve hesperetin uygulamasının ise bu toksik etkilere karşı koruma sağladığını göstermektedir

Keywords

Tütün Dumanı, Hesperetin, Histoloji, Biyokimya, Testis

Examination of the Antioxidant Effect of Hesperetin in Testis Tissue in Rats Exposed to Tobacco Smoke

Abstract

Introduction: Toxic substances in tobacco smoke which are carried to every part of the body by blood, are likely to change the balance between oxidant– antioxidant systems against tissues. Hesperetin, known to have antioxidant, antimicrobial and antiinflammatory properties; is found in citrus fruits, such as lemons, oranges and grape fruits. In this study, it is aimed to examine the protective effects of hesperetin against oxidative damage on testis tissue caused by tobacco smoke exposure. Materials and Methods: Twenty-four male adult Spraque-Dawley rats were divided into 4 groups n=6 :Control C , tobacco smoke TS , tobacco smoke plus corn oil TS+CO and tobacco smoke plus HES TS+HES . TS, TS+CO and TS+HES groups were exposed to tobacco smoke 1hour twice a day and hesperetin was applied 50 mg/kg dissolved in corn oil by oral gavage every other day. In rats in the TS+CO group, in addition to tobacco smoke, the amount of corn oil that was used to dissolve hesperetin was given by oral gavage every other day. At the end of the experimental period of 12weeks rats were decapitated. Testis tissues removed. Histochemical, eNOS staining and TUNEL methods were applied.Biochemical and sperm analyzes were performed. Results: In rat testis tissues of TS and TS+CO; degeneration in germinative epitelium, atrophic tubules, vascular congestion, seperation in seminiferious tubule basement membranes, edema in interstitial area and immature cell debris in tubule lumen were detected Also, the increased apoptotic cells and eNOS immunreactivity were observed in TS and TS+CO groups.HES administration caused a decrease in histological alterations, eNOS immunreactivity and apoptotic cells. Malondialdehyde MDA levels were found to increase in TS and TS+CO, while hesperetin administration reduced MDA levels. Catalase CAT and glutathione peroxidase GSH-Px enzyme activities were found to decrease in TS and TS+CO whereas GSH-Px activity increased in TS+HES. In terms of CAT activity, there was no difference between TS, TS+CO and TS+HES. There was an increase in the number of abnormal sperm in the TS and TS+CO, and a decrease in the TS+HES. Conclusions: The findings indicate that tobacco smoke causes damage to the testicular tissue and that the administration of hesperetin protects against these toxic effects

Keywords

Tobacco Smoke, Hesperetin, Histology, Biochemistry, Testis

References

• Tütün ve tütün kontrolü. Toraks kitapları. Türk Toraks Derneği. İstanbul: Aves Yayıncılık, Ocak 2010.
• Mouly P, Gaydou EM, Auffray A. separation glycosides and polymethoxylated flavones in citrus juices using lipid chromatography. J Chromatogr A 1998; 800: 171-79. flavanone
• Garg A, Garg S, Zaneveld LJ, Singla AK. Chemistry and pharmacology of the citrus bioflavonoid hesperidin. Phytother Res 2001; 15: 655-69.
• Cai YZ, Luo Q, Sun M, Corke H. Antioxidant activity and phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated with anticancer. Life Sci 2004; 74: 2157-84.
• Lin N, Sato T, Takayama, et al. Novel anti- inflammatory actions of nobiletin, a citrus polymethoxy flavonid, on human synovial fibroblasts and mouse macrophages. Biochem Pharmacol 2003; 65: 2065-71.
• Foulds J, Delnevo C, Ziedonis DM, Steinberg MB. Health effects of tobacco, nicotine and exposure to tobacco smoke pollution. In: Brick J, ed. Handbook of the Medical Consequences of Alcohol and Drug Abuse. New York: The Haworth Press, 2008: pp 423-60.
• Sankako MK, Garcia PC, Piffer RC, et al. Possible mechanism by which zinc protects the testicular function of rats exposed to cigarette smoke. Pharmacol Reports 2012; 64: 1537-46.
• La Maestra, S, de Flora S, Micale RT. Effect of cigarette smoke on DNA damage, oxidative stress, and morphological alterations in mouse testis and spermatozoa. Int J Hyg Environ Health 2014; http://dx.2014.08.006
• Güven MC, Can B, Ergün A, Saran Y, Aydos K. Ultrastructural effects of cigarette smoke on rat testis. Eur Urol 1999; 36: 645-49.
• Ozkan L, Yardimoglu M, Ozkurkcugil C. Protective effects of pentoxifylline on the seminiferous tubules morphology in smoking rats. Res Web Pub 2013; 1: 1-7.
• Shikone T, Billig H, Hsueh AJW. Experimentally increases apoptosis in rat testis. Biol Reprod 1994; 51: 865-72. cryptorchidism
• Sönmez MF, Tascioglu S. Protective effects of grape seed extract on cadmium-induced testicular damage, apoptosis, and endothelial nitric oxide synthases expression in rats. Toxicol Ind Health 2016; 32(8): 1486-94.
• Pradeep K, Ko KC, Choi MH, et al. Protective Effect of Hesperidin, a Citrus Flavanoglycone, Against gamma-Radiation-Induced Tissue Damage in Sprague- Dawley Rats. J Med Food 2012; 15: 419-27.
• Sudheer KM, Srinivasan KK, Unnikrishnan MK. Hesperidin inhibits nitrite-induced methemoglobin formation. Indian J Pharm Sci 2003; 65: 436-8.
• Shrivastava M, Kar V, Shrivastava S. Cyclophosphamide altered the myocardial marker enzymes: Protection provoked by Hesperidin in Rats. Int J Phytomed 2013; 5: 141-5.
• Trivedi PP, Tripathi DN, Jena GB. Hesperetin protects testicular toxicity of doxorubicin in rat: Role of NFκB, p38 and caspase-3. Food Chem Toxicol 2011; 49: 38-47.
• Shagirtha K, Pari L. Hesperetin, a citrus flavonone, protects potentially cadmium induced oxidative testicular dysfunction in rats. Ecotoxicol Environ Safety 2011; 74: 2105-11.
• Çelik E. Ratlarda deneysel testis torsiyonu ile oluşturulan iskemi/reperfüzyon hasarından korunmada hesperetinin etkileri. Uzmanlık tezi, Malatya: İnönü Üniversitesi, Tıp Fakültesi, 2012.