Vitrifikasyon Yöntemiyle Dondurulan İn Vitro Üretilmiş Sığır Embriyolarının Payet İçinde Devitrifikasyonunun Embriyo Canlılığı Üzerine Etkisinin Araştırılması

Abstract

Bu çalışmanın amacı, vitrifikasyon yöntemiyle dondurulan in vitro koşullarda üretilmiş sığır embriyolarında direkt transfer tekniğine uygun olarak payet içerisinde gerçekleştirilen devitrifikasyonun embriyo canlılığı üzerine etkisinin araştırılmasıdır. Çalışmada, mezbahadan sağlanan ovaryumlardan toplanan oositler kullanılarak in vitro üretilen 84 adet iyi kalite embriyo kullanılmıştır. Embriyolar kültürlerinin yedinci günü vitrifikasyon tekniği ile dondurulmuş ve çözdürülen embriyoların devitrifikasyon işlemi payet içerisinde gerçekleştirilmiştir. Bu amaç için, çözdürülen payetleri sallayarak içerisindeki vitrifikasyon ve devitrifikasyon solüsyonlarının karışması sağlanmıştır. Vitrifiye edilen embriyolardan kontrol grubundakiler payetten dışarı alınarak devitrifiye edilmiştir. Deneme gruplarında ise çözdürülen payetler oda sıcaklığında üç farklı süreyle (G1=5, G2=15 ve G3=20 dk.) bekletilerek devitrifiye işleminin payet içerisinde gerçekleştirilmesi sağlanmıştır. Devitrifikasyon sonrası bütün gruplarda embriyolar TCM199 mediumu içerisinde kültüre alınarak kültürün 24 ve 48. saatlerinde embriyo canlılık oranları incelenmiştir. İntaktooplazmalı embriyo oranları yönünden çözdürme sonrası kontrol grubu ile diğer gruplar arasında istatistiksel fark görülmemiştir. 24 ve 48. saat canlılık oranları bakımından gruplar arası farklılıklar önemli bulunmuş ve deneme gruplarında kontrol grubuna göre daha düşük embriyo canlılık oranı elde edilmiştir (P<0.05). Bu çalışma ile payete yerleştirilen vitrifikasyon ve devitrifikasyon solüsyonları arasında hava boşluğu bırakılmasının devitrifikasyon işleminin beklenen düzeyde gerçekleşmesine imkan vermediği dolayısıyla payet içerisine yerleştirilen embriyo, vitrifikasyon ve devitrifikasyon solüsyonlarının yerleşim şekliyle ilgili daha detaylı çalışmaların yapılması gerektiği sonucuna varılmıştır

Keywords

• Invitroembriyo, vitrifikasyon, devitrifikasyon, direkt transfer

Investigation of The Effects of in Straw Devitrification of In Vitro Produced Bovine Embryos Frozen by Vitrification on Embryo Viability

Abstract

The aim of this study was to investigate embryo viability rates after devitrification in straw to use of these embryos for direct transfer technique in frozen bovine embryos by vitrification method.In the study,oocytes were provided from ovaries of slaughtered cows and a total of84 embryos with good quality were produced in vitro. Embryos were frozen by vitrification method at 7th day of their culture and, devitrification process of thawed embryos were carried out in straws. For this purpose, thawed straws containing vitrification and devitrification solutions were mixed up by shaking. Control group of vitrified embryos were taken out of the straws for devitrification. In experimental groups, straws weredevitrifiedat room temperature for three different time periods (G1 = 5, G2= 15 and G3 = 20 min.) After devitrification, embryos of all groups were cultured into TCM-199 medium and survivability controls of embryos were performed at 24 and 48 hours. There was no statistically significant difference among control and other groups regarding rates of embryo with intact ooplasm. Significant differences were obtained between the groups in point of embryo viability rates at 24 and 48 hours of culture environment, and viability rate of embryos were lower in experimental groups than those of controls (p<0.05). In conclusion, the air gap spacing between vitrification and devitrification solutions seemed to disable devitrification process, and hence further studies will be needed to assign the location of embrios, vitrification and devitrification solutions in straws for better devitrification process

Keywords

• In vitro embryo, vitrification, devitrification, direct transfer