The Measurement Of Alpha Amanitin Levels Using Hplc Method In Amanita Phalloides From Düzce Province

Abstract

Aim: The aim of this study is to measure the level of alpha amanitin toxin using HPLC methodfrom Amanita phalloides mushroom collected in the province of Düzce in 2010.Method: One of the mushrooms as a whole body. The other one was extracted after seperatedinto parts. The measurement was done by HPLC using 303 nm UV wavelength and 250x4,6mm C18 5 µm particle included column. Ammonium acetate+methanol+acetonitrile (80+10+10,v/v/v) was used as a mobile phase, and the flow rate was set 1 ml/min. The results were givenas a toxin quantity in 1 g dry mushroom.Results: The amount of alpha amanitin was measured as 4,806 mg (±0,033) in the whole body,3,522 mg (±0,024) in the cap, 5,318 mg (±0,056) in the lamellar, 0,903 mg (±0,004) in the ring,2,577 mg (±0,037) in the stipe, 0,698 mg (±0,008) in the volva.Conclusion: The level of alpha amanitin in Amanita phalloides from Duzce Province is differfrom different countries. Higher and lower levels of toxin than our data obtained investigationsare present in the literature. The reason of this differences might be several factors like extractionmethods, analysis methods and environmental conditions

Keywords

• Amanita Phalloides, Alpha amanitin, HPLC

Düzce Yöresinde Yetişen Amanita Phalloides Mantarındaki Alfa Amanitin Düzeyinin Hplc Yöntemiyle Ölçümü

Abstract

Amaç: Düzce ili sınırlarında 2010 yılında toplanan Amanita phalloides mantarındaki alfaamanitin toksin düzeyinin HPLC yöntemiyle ölçümü amaçlanmıştır.Yöntem: Bir mantar bütün olarak, diğeri ise parçalara ayrılarak ekstraksiyon yapılmıştır.Ölçümler HPLC cihazında 303 nm UV dalga boyu, 250x4,6 mm C18 5 µm partikül içeren kolonkullanılarak gerçekleştirilmiştir. Mobil faz olarak amonyum asetat + metanol + asetonitril(80+10+10, v/v/v) kullanılmış ve akış hızı 1 mL/dakikaya ayarlanmıştır. Sonuçlar 1 g kurumantardaki toksin miktarı olarak verilmiştir.Bulgular: Bütün mantardaki alfa amanitin miktarı 4,806 mg (±0,033), şapkada 3,522 mg(±0,024), lamelde 5,318 mg (±0,056), halkada 0,903 mg (±0,004), sapta 2,577 mg (±0,037),kapçıkta 0,698 mg (±0,008) olarak ölçüldü.Sonuç: Düzce yöresinde yetişen Amanita phalloides mantarlarındaki alfa amanitin düzeyleri,başka bölgelerde yetişenlerden farklılık göstermektedir. Bulduğumuz sonuçlardan daha yüksekve daha düşük seviyede toksin düzeyi ölçülmüş araştırmalar literatürde mevcuttur. Bu farklılığınetkenleri arasında iklim şartları yanında ekstraksiyon ve analiz yöntemlerindeki farklılıklar darol oynayabilir

Keywords

• Amanita phalloides,Alfa amanitin,HPLC

References

1. Mat A. Türkiye’de Mantar Zehirlenmeleri Ve Zehirli Mantarlar. İstanbul: Nobel Yayınları; 2000.
2. French LK, Hendrickson RG, Horowitz BZ. Amanita phalloides poisoning. Clin Toxicol (Phila). 2011:49(2):128-9.
3. Vetter J. Toxins of Amanita phalloides. Toxicon. 1998:36(1);13-24.
4. Lengsfeld AM, Löw I, Wieland T, Dancker P, Hasselbach W. Interaction of phalloidin with actin. Proc Natl Acad Sci USA. 1974:71(7),2803-7.
5. Letschert K, Faulstich H, Keller D, Keppler D. Molecular characterization and inhibition of amanitin uptake into human hepatocytes. Toxicol Sci. 2006:91(1);140-9.
6. Kröncke KD, Fricker G, Meier PJ, Gerok W, Wieland T, Kurz G. Alpha-Amanitin uptake into hepatocytes. Identification of hepatic membrane transport systems used by amatoxins. J Biol Chem. 1986:25;261(27);12562-7.
7. Gong XQ, Nedialkov YA, Burton ZF. Alpha-amanitin blocks translocation by human RNA polymerase II. J Biol Chem. 2004:25;279(26);27422-7.
8. Buku A, Campadelli-Fiume G, Fiume L, Wieland T. Inhibitory effect of naturally occurring and chemically modified amatoxins on RNA polymerase of rat liver nuclei. FEBS Lett. 1971:14(1);42-4.

9. Tong TC, Hernandez M, Richardson WH, et al. Comparative treatment of alpha-amanitin poisoning with N-acetylcysteine, benzylpenicillin, cimetidine, thioctic acid, and silybin in a murine model. Ann Emerg Med. 2007:50(3);282-8.
10. Özbek H, Cengiz N, Bayram İ, Öntürk. Alfa amanitinle oluşturulmuş böbrek ve karaciğer toksisitesinde alfa pinen ve silibininin etkisinin sıçanlar üzerinde araştırılması. Genel Tıp Dergisi. 2008:18(4):159-64.
11. Ganzert M, Felgenhauer N, Zilker T. Indication of liver transplantation following amatoxin intoxication. J Hepatol. 2005:42(2);202-9.
12. Zhao J, Cao M, Zhang J, Sun Q, Chen Q, Yang ZR. Pathological effects of the mushroom toxin alpha-amanitin on BALB/c mice. Peptides. 2006:27(12);3047-52.
13. Mcknight TA, Mcknight KB, Skeels MC. Amatoxin and phallotoxin concentration in amanita bisporigera spores. Mycologia. 2010:102(4):763-5.
14. Defendenti C, Bonacina E, Mauroni M, Gelosa L. Validation of a high performance liquid chromatographic method for alpha amanitin determination in urine. Forensic Sci Int. 1998:92(1);59-68.
15. Bresinsky A, Besl H, A Colour. Atlas of Poisonous Fungi. London: Wolf Publishing; 1990.
16. Ergüven M, Çakı S, Deveci M. Mantar Zehirlenmesi: 28 vakanın değerlendirilmesi. Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Dergisi. 2004:47:249-53.
17. Mat A, Yurdun T, Tümkor Z. Determination of alpha amanitin by HPLC in Amanita phalloides growing in Istanbul forests. İ. Ü. Ecz. Fak. Derg. 1995:31;17-24.
18. Wang Y, Bao. H, Xu L, Bau T. Determintaion main peptide toxins from Amanita pallidorosea with HPLC and their antifungal action on Blastomyces albicans. Wei Sheng Wu Xue Bao. 2011:51(9);1205-11.
19. Vargas N, Bernal A, Sarria V, Franco-Molano A, Restrepo S. Amatoxin and phallotoxin composition in species of the genus Amanita in Colombia: A taxonomic perspective. Toxicon. 2011:58:583-90.
20. Enjalbert F, Cassanas G, Salhi SL, Guinchard C, Chaumont JP. Distribution of the amatoxins and phallotoxins in Amanita phalloides. Influence of the tissues and the collection site. C R Acad Sci III. 1999:322(10);855-62.