Yumurtacı tavuk işletmelerinde Mycoplasma gallisepticum enfeksiyonunun çabuk serum aglütinasyon, kültür ve polimeraz zincir reaksiyonu yöntemleriyle araştırılması

Year 2013, Volume: 29 Issue: 2, 76 - 81, 01.06.2013

Kamile Kesler Leyla Güler Gülşen Orhan

Abstract

Amaç: Tavuklarda Mycoplasma gallisepticum (MG)’un neden olduğu kronik solunum yolu hastalığı (CRD) et ve yumurta verimi düşüklüğü nedeniyle önemli ekonomik kayıplara neden olmaktadır. Bu çalışmada, yumurtacı tavuklarda MG enfeksiyonu çabuk serum aglütinasyon (ÇSA), kültür ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemleri ile araştırıldı. Gereç ve Yöntem: Çalışmada, 24 haftalıktan büyük 15 ticari yumurtacı işletmede, her birinden 25 adet olmak üzere 375 kan serumu serolojik teşhis için ÇSA ile 73 tavuğun trakea (nekropsi öncesi ve sonrası), hava kesesi ve akciğerlerinden alınan toplam 292 svab örneği MG izolasyonu yönünden ve aynı svab örneklerinin inkübasyon sonrası sıvı kültürleri ile tavuklardan canlı iken alınan 73 trake svab örneği doğrudan PCR ile test edildi.Bulgular: İşletmelerin 13 (%86.6)’ünde kan serumlarında %12-100 arasında pozitiflik tespit edilirken 2 (%13.3)’sine ait serumlar ÇSA ile negatif bulundu. Svab örneklerinin kültürü sonucu 3 (%20) işletmede 3 tavuktan MG izole edildi. Sıvı kültürlerinden yapılan PCR testinde 7 (%46.6) işletmeye ait 9 (9/73) tavukta, canlı hayvanlardan alınan 73 trakeal svabdan 2 (%13.3) işletmeye ait 2 tavukta MG spesifik DNA’sı tespit edildi. İşletmelerin çoğu serolojik olarak pozitif bulunurken izolasyon ve PCR ile etken tespit oranının düşük olması, klinik bulgularla birlikte değerlendirildiğinde bu işletmelerde kronik bir enfeksiyona işaret etmektedir. Öneri: Tavuklarda MG enfeksiyonunun teşhisi için serolojik testlerin tek başına yeterli olmadığı, geçirilmiş bir enfeksiyona ait antikorların kan serumunda uzun süre bulunmasından dolayı ticari işletmelerde geçirilmekte olan bir hastalık probleminin tespiti ve tedavi kararı için serolojik bulguların PCR ve/veya kültür ile doğrulanması uygun olacaktır.

Keywords

Tavuk, Mycoplasma gallisepticum, izolasyon, ÇSA, PCR

Investigation of Mycoplasma gallisepticum infection in layer flocks by rapid serum agglutination, culture and polymerase chain reaction methods

Abstract

Aim: Chronic respiratory disease of chickens caused by Mycoplasma gallisepticum (MG) causes significant economic losses to poultry industry due to decreased meat and egg production. In this study MG infection in layer flocks was investigated by rapid serum agglutination (RSA), culture and polymerase chain reaction (PCR) methods.Materials and Methods: A total of 375 chicken sera from 15 commercial layer flocks older than 24 weeks, 25 sera per flocks, were tested by RSA. Tracheal (before and after necropsy), air sac and lung swabs of 292 samples collected from 73 chickens were tested for MG isolation. Culture broths of 292 samples and 73 tracheal swabs directly from live chickens were tested by PCR.Results: In 13 (86.6%) of 15 flocks a seropositivity rate between 12 to 100% was detected by RSA while all sera from 2 (13.3%) of flocks were found negative. MG was isolated from 3 of 73 chickens belong to 3 (20%) flocks. In 292 culture broths, 9 of 73 chickens from 7 (46.6%) flocks and in 2 of 73 tracheal swabs of live chickens from 2 (13.3%) flocks were PCR positive. Although serology was positive in majority of flocks, detection rate of microorganism or DNA was low. When evaluated with clinical findings the results indicate a presence of chronic infection in these flocks.Conclusion: In the diagnosis of MG infection of chickens, serological tests are not sufficient alone because antibodies remain for a long time after infection. Therefore, for the diagnosis of clinical infection and therapy decisions in commercial flocks, serological findings in the flock should be supported by PCR and/or culture.

Keywords

Chicken, Mycoplasma gallisepticum, isolation, RSA, PCR

References

• Anonim, 2007. Kuluçkahane ve Damızlık Kanatlı İşletmeleri Yö- netmeliği. Tarım ve Köyişleri Bakanlığı (20.03.2007 tarihli ve 26468 sayılı Resmi Gazete), Ankara.
• Bağcıgil FA, 2002. Tavuklarda Mycoplasma gallisepticum enfeksiyonunun tanısında bakteriyolojik ve serolojik yöntemlerin polymerase chain reaction (PCR) ile karşılaştırılması. Doktora Tezi, İÜ Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İstanbul.
• Callison SA, Riblet SM, Sun S, Ikuta N, Hilt D, Leiting V, Kleven SH, Suarez D, Garcia M, 2006. Development and validation of a real-time taqman PCR assay for the detection of Mycoplasma gallisepticum in naturally infected birds. Avian Dis, 50, 537- 544.
• Cengiz S, Babacan O, Dinç G, Akan M, 2011. Tavuklarda Mycoplasma gallisepticum infeksiyonunun polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile teşhisi. Etlik Vet Mikrobiyol Derg, 22, 45-
• Çarlı KT, Eyigor A, 2003. Real Time PCR for detection of Mycoplasma gallisepticum. Avian Dis, 47, 712-717. Erdağ O, Türkaslan J, 1988. Kanatlı mycoplasmalarının laboratuvar teşhis yöntemleri. Pendik Hay Hast Mer Arş Ens Derg, 19, 85-97.
• Esendal Ö, 2002. Mikoplazma infeksiyonları, Kanatlı Hayvan Hastalıkları. Ed; İzgür M, Akan M, Medisan, Ankara, pp; 79-85. Fan HH, Kleven SH, Jackwood NW, 1995. Application of polimerase chain reaction with arbitrary primers to strains identification of Mycoplasma gallisepticum. Avian Dis, 39, 729-735.
• Garcia M, Jackwood MW, Levisohn S, Kleven SH, 1995. Detection of Mycoplasma gallisepticum, M. synoviae, and M. iowae by multi-species polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism. Avian Dis, 39, 606-616.
• Güler L, 1995. Konya Bölgesinde kanatlıların kronik solunum yolu hastalığı (chronic respiratory disease-CRD)’nın serolojik ve etken izolasyonu ile karşılaştırmalı teşhisi üzerine çalışmalar. Veterinarium, 6, 7-15.
• İzgür M, 1983. Kanatlılarda mycoplasma enfeksiyonları. Kanatlı hayvanların infeksiyon hastalıkları ve laboratuvar teşhis yöntemleri. Pendik Vet Kont Arş Enst Yayın No:7, pp:65-71.
• Jordan FTW, 1983. Recovery and identification of avian mycoplasmas, In: Methods in Mycoplasmology, Ed; Tully JG, Razin S, Vol II, Diagnostic Mycoplasmology, Academic Press, USA, pp; 69-79.
• Kahya S, Temelli S, Eyigör A, Çarlı KA, 2010. Real-time PCR, culture and serology for the diagnosis of Mycoplasma gallisepticum in chicken breeder flocks. Vet Microbiol, 144, 319-324. Kemp I, 1998. DNA amplification methods for diagnosis and epidemiological investigations of avian mycoplasmosis. Avian Pathol, 27, 7-14
• Khan MI, Kirkpatrick BC, Yamamoto R, 1987. Mycoplasma gallisepticum strain variations detected by sodyum dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Avian Dis, 31, 315- 320.
• Kleven SH, 1998. Mycoplasmosis, In: A Laboratory manual for the isolation and identification of avian pathogens, fourth edition, Ed; Swayne DE, American Association of Avian Pathologists, Pennsylvania, USA, pp; 74-80.
• Kleven SH, Levisohn S, 1996. Mycoplasma infections of poultry, In: Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology, Vol II Diagnostic procedures, Eds; Tully JG, Razin S, Academic Press, London, UK, pp; 283-292.
• Lauerman LH, 1998. Mycoplasma PCR assays. In: Nucleic acid amplification assays for diagnosis of animal diseases. American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians, Ed; Lauerman LH, Auburn, AL, USA, pp; 39-66.
• Ley DH, 2003. Mycoplasma gallisepticum infection. In: Disease of Poultry, Ed; Saif YM, 11th edition, Iowa State Press, USA, pp; 719-743.
• Moalic PY, 2002. Improving mycoplasmosis control using PCR technology. World Poultry, 7, 38-39.
• Nascimento ER, Pereira VLA, Nascimento MGF, Barreto ML, 2005. Avian Mycoplasmosis update. Brasilian J Poutry Sci, 7, 1-9. OIE, 2008. Avian Mycoplasmosis (Mycoplasma gallisepticum, M. synoviae). Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, Chapter 2.3.5. www.oie.int, pp; 482-496.
• Pang Y, Wang H, Girshick TH, Xie Z, Khan MI, 2002. Development and application of a multiplex polymerase chain reaction for avian respiratory agents. Avian Dis, 46, 691-699.
• Raviv Z, Callison SA, Ferguson-Noel N, Kleven SH, 2008. Strain differentiating real-time PCR for Mycoplasma gallisepticum live vaccine evaluation studies. Vet Microbiol, 129, 179-187.
• Salisch H, Hinz KH, Graack HD, Ryll M, 1998. A comparison of a commercial PCR-based test to culture methods for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in concurrently infected chickens. Avian Pathol, 27, 142-14.
• Slavik MF, Wang RF, Cao WW, 1993. Development and evaluation of the polymerase chain reaction method for diagnosis of Mycoplasma gallicepticum infection in chickens. Mol Cell Probes. 7, 459-463.
• Tuzcu M, Özmen M, Karakoç SR, Tuzcu N, Yoldaş A, 2012. Diagnosis of mycoplasmosis in chicks by pathological and real time PCR methods. Eurasian J Vet Sci, 28, 82-86.
• Türkaslan J, Salihoğlu H, 1989. Çeşitli besiyerleri kullanılarak Mycoplasma gallisepticum’un bakteriyolojik yöntemlerle izolasyon ve identifikasyonu. Pendik Hay Hast Mer Araşt Enst Derg, 20, 53-59.
• Ülgen M, 1991. Kanatlıların Kronik Solunum Yolu enfeksiyonu üzerinde karşılaştırılmalı bakteriyolojik ve serolojik araştırmalar. Doktora Tezi, U.Ü. Sağlık Bilimleri Enst, Bursa.
• Wang H, Fadl AA, Khan MI, 1997. Multiplex PCR for avian pathogenic mycoplasmas. Mol Cell Probes, 11, 211-216.
• Yılmaz F, Timurkan N, Kılıç A, Kalender H, Kılınç Ü, 2011. Detection of Mycoplasma synoviae and Mycoplasma gallisepticum in chickens by immunohistochemical, PCR and culture methods. Revue Med Vet, 162, 79-86.
• Yoder HW, 1989. Nonspecific reactions to mycoplasma serum plate antigens induced by inactivated poultry disease vaccines. Avian Dis, 33, 60-68