Flubiprofenin İnsan Plasmasından Sıvı Kromatografisi Yöntemi İle Analizinin Geliştirilmesi ve Validasyonu

Year 2009, Issue: 1, 25 - 35, 01.01.2009

Durişehvar Özer Ünal Semra Güler Dilek Demir Erol

Abstract

Flurbiprofenin plasmadan analizi için Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografisi yöntemi ile UV dedektörü kullanılarak hassas bir yöntem geliştirilip valide edilmiştir. Flurbiprofenin plazmadan tüketilmesi için sıvı-sıvı tüketme yönteminde dietileter:diklorometan:izopropa nol, 3:1.5:0.5, v/v/v karışımı tüketme çözücüsü olarak kullanılmıştır. Flurbiprofenin kromatografik analizinde losartan IS iç standart olarak kullanılmıştır. Zıt faz kromatografisinde Nucleosil C18 kolon 150x4.6 mm, 5mm ile mobil faz olarak 0.1 M sodium asetat:asetonitril 65:35, v/v , pH:6.30 kullanılmış ve 248 nm de absorbansları ölçülmüştür. Mobil faz akış hızı 1 ml/dak ve enjeksiyon hacmi 25 ml dir. Kalibrasyon eğrisi 100- 40 000 ng/mL derişim aralığında doğrusal bulunmuştur. En düşük tayin limiti 100 ng/mL olarak tespit edilmiştir. Güniçi ve günlerarası hassasiyet sırasıyla 7.3 ve 12.0 dan az olarak hesaplanmıştır. Doğruluk ise % 2.5-7.3 aralığındadır. Flurbiprofen ve iç standartın geri kazanımı 200, 4000 ve 80000 ng/mL derişimlerinde % 68.1 ile % 72.0 aralığında bulunmuştur. Stabilite çalışmaları FDA’nın “Bioanalitik Yöntem Validasyonu” rehberinde belirtildiği koşullarda yapılmıştır. Geliştirilen bu yöntem Farmakokinetik çalışmalara başarı ile uygulanmıştır.

Development and Validation of Bioanalytical Method for Determination of Flurbiprofen from Human Plasma by Liquid Chromatography

Abstract

A sensitive high performance liquid chromatographic method with UV detection HPLC-UV for the determination of Flurbiprofen from plasma was developed and validated. Liquid-liquid extraction was used for extracting Flurbiprofen from plasma. Diethylether:dichloromethan:isop ropanol, 3:1.5:0.5, v/v/v mixture was used as extraction solvent. The chromatographic separation of Flurbiprofen and losartan IS was carried out using reverse phase Nucleosil C18 column 150x4.6 mm, 5mm with mobile phase of 0.1 M sodium acetate:acetonitrile 65:35, v/v , pH:6.30 and UV detection at a wavelength 248 nm. The flow rate of mobile phase was 1 mL/min, injection volume was 25 ml. The calibration curve was linear within the concentration range 100- 40 000 ng/mL. The limit of quantification was 100 ng/mL with good accuracy and precision. Intraday and interday precision were less than 7.3 and 12.0 respectively and the range of accuracy was 2.5-7.3 % . Recoveries of Flurbiprofen and IS from plasma ranged from 68.1 to 72.0% for 200, 4000 and 80000 ng/ mL concentrations. The stability was assessed under a variety of conditions FDA, Bioanalytical Method Validation Guidline and found that appropriate for the quantification. The method developed has been applied successfully to pharmacokinetic study.

References

• Davies NM. Clin Pharmacokinet. 28, 100–14 (1995).
• Hutzler M.S., Frye R.F., Tracy T.S., J. of Chromatography B. 749, 119-125 (2000).
• Giagoudakis G., Markantonis S.L.: 17, 897-901 (1998).
• SniderB.G., Beaubien L.J.: Sears P.D., Rahn, J. Pharm. Sci. 70,1347-1349 (1981).
• Jonhson V.A., Wilson J.T.: J Chromatogr. 382 367-371 (1986).
• Askholt J., Nielsen-Kudsk F.: Acta Pharmacol Toxicol, 59 5,382-6 (1986).
• Satomoto M., Adachi Y., Higuchi H., Watanabe K., Sahoh T., Masui 51 (4), 431 (2002).
• Albert K.S., Gillespie W.R., Raabe A., Garry M., J. Pharm. Sci. 73 (12) 1823-5 (1984).
• Teng X.M., Wang S.W., Davies N.M.: J. Pharm Biomed Anal. 15;33 95-100 (2003).
• Kumar A., Mann HJ., Remmel RP.: J. of Chromatography B Analyt Technol. Biomed Life Sci. 853 287-93 (2007).
• Sultan M., Stecher G., Stöggl WM., et.al.: Curr. Med. Chem. 12, 573-88 (2005).
• Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation, FDA, May 2001
• Hartmann C., Smeyers-Verbeke J., Massart D.L., McDowall, R.D, J. Pharm. Biomed. Anal., 17, 193-218, (1998).
• Buick, A.R., Doig, M.V., Jeal, S.C., Land, G.S., McDowall, R.D., J. Pharm. Biomed. Anal., 8(8-12), 629-637, (1990).
• Shah, V.P., Midha, K.K., Dighe, S., et al, Eur. J. Drug Met. Pharm. 16(4), 249-255, (1991).