SINIRLI BÖLGE MUTASYON YÖNTEMİ İLE MUTASYON FREKANSININ BELİRLENMESİ İÇİN İÇ STANDART MOLEKÜLÜ KULLANIMI

Year 1999, , 1 - 13, 01.06.1999

Sinan Süzen James M. Parry

https://doi.org/10.1501/Eczfak_0000000328

Abstract

Spesifik DNA kısımlarının polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanarak in vitro
çoğaltılması üzerine değişkenlerin etkisi ile ilişkili bazı problemleri gidermek için, iç standart
tekniği sınırlı bölge mutasyon (RSM) metoduna katıldı. İç standart, eksilme dışında hedef dizilim
ile aynı nükleotid diziliminde dizayn edildi. Böylece büyüklükteki farklılıklar hedef ve iç standart'ın
ayırımı için kullanılabildi. RSM tekniğinde iç standart kullanımının uygulaması sıçan ras geninde gerçekleştirildi. N-metil-N-nitrozaüre (MNU) ile indüklenmiş mutasyonlar 10-5 sıklıkla Hras
geni ekson 1 'de HindIII restriksiyon enzim tanıma bölgesinde saptandı. İç standart kullanımı
mııtasyon sıklığının hesaplanmasına başarılı bir şekilde olanak sağladı.

Keywords

iç standart, ras, PCR, RSM

THE USE OF AN INTERNAL STANDARD MOLECULE FOR DETERMINING MUTATION FREQUENCY IN RESTRICTION SITE MUTATION METHOD

Abstract

In order to overcome some problems associated with the effects of variables on in vitro
amplification of specific DNA segments using polymerase chain reaction (PCR), an internal
standard technique was included to restriction site mutation (RSM) method. The internal standard
was designed with same nucleotide sequences as the target sequence but with a deletion so that
differences in size could be used to distinguish the PCR products of the target and internal
standard. The application of the internal standard usage in the RSM method was performed on the
rat ras gene. N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induced mutations were detected at frequencies 10-5
at the H-ras gene in exon 1 at Hind III restriction enzyme recognition sequence. The use of internal
standard successfully allowed the calculation of mutation frequency.

Keywords

internal standard, ras, PCR, RSM