Viral Hemorajik Septisemi Virusunun (VHSV) Fenotipik Karakterinin Virulans Üzerine Etkisinin Araştırılması

Abstract

Research of The Viral Hemorrhagic Septisemia Virus (Vhsv) Phenotypic Characteristics Effect on Virulence

Abstract

Viral Hemorajik Septisemi Virusu (VHSV) (Piscine novirhabdovirus), deniz ve tatlı su balıklarında enfeksiyonlara neden olan bir virustur. Bu çalışmada; Türkiye’de tatlı su (Gökkuşağı alabalığı) ve deniz (Kalkan balığı) balıklarından izole edilen Bolu\06 ve TR-WS13G adlı iki VHSV izolatının farklı fenotiplerinin Gökkuşağı alabalıklarındaki (Oncorhynchus mykiss) klinik bulgular, mortalite oranı ve patojenite üzerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada Bolu/06 ve TR-WS13G VHSV izolatları plak saflaştırma yöntemiyle saflaştırıldı. Test sonunda her iki izolata ait dar ve geniş plak oluşturan 4 farklı saflaştırılmış izolat 60-100 g ağırlığındaki gökkuşağı alabalıklarına intraperitonal olarak verilerek deneysel enfeksiyon oluşturuldu. Deneysel enfeksiyon sırasında ölen veya deneme sonucunda öldürülen balıklarda real time RT-PCR metodu ile VHSV viral nükleik asit varlığı ve miktarı araştırıldı.  Deneysel enfeksiyon sonucunda mortalite oranı; kontrol grubunda %3,33, Bolu/06 dar ve geniş plak izolat gruplarında sırasıyla %43,3 ve %20,  TR-WS13G dar ve geniş plak izolat gruplarında ise sırasıyla %33,3 ve %14,8 olarak tespit edildi. rRT-PCR testi sonucunda ölen\öldürülen balık örneklerinde viral kopya sayısı 1,67x10²-7,33x10⁴/µl olarak tespit edildi. Fenotipik olarak hem tatlı su izolatı Bolu/06 hem de deniz izolatı TR-WS13G’nin dar plak çapına sahip izolatlarının geniş plak oluşturan izolatlarından daha yüksek mortaliteye neden olduğu, ayrıca gökkuşağı alabalıklarından izole edilen tatlı su izolatı Bolu/06’nın kalkan balığından izole edilen deniz izolatı TR-WS13G’den daha patojen olduğu ortaya konulmuştur. Bu sonuçlar ile VHS virusunun fenotipik karakterinin virulans üzerinde önemli düzeyde etkili olduğu gösterilmiştir.

Keywords

• Gökkuşağı alabalığı,Plak test,rtPCR,Viral Hemorajik Septisemi Virusu

References

1. Altuntas C. 2015. Viral hemorajik septisemi virüsü’nün (VHSV) Doğu Karadeniz’de yaşayan doğal balık türlerinde yayılımı, epidemiyolojisi ve kültür balıkları üzerine virülensi [Doktora Tezi] Karadeniz Teknik Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Trabzon.
2. Anonim 2017. Manual of diagnostic tests for aquatic animals. http://www.Anonim.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/aahm/current/chapitre_vhs.pf2017.
3. Blanda F, Snow M, Garver KA, Matejusova I. 2013. Genotype-specific Taqman® assays for the detection and rapid characterisation of european strains of viral haemorrhagic septicaemia virus. J Virol Methods. 187: 209–214. doi: 10.1016/j.jviromet.2012.10.005.
4. Bowen RA. 2011. Fenner’s veterınary vırology. 4rd Ed, San Diego, Academic Press is an imprint of Elsevier. 327-341.
5. Burke JA, Mulcahy D. 1980. Plaquing procedure for ınfectious hematopAnonimtic necrosis virus. J Appl Environ Microbiol. 4: 872-876.
6. Calleja F, Godoy MG, Cárcamo JG, Bandín I, Yánez AJ, Dopazo CP, Kibenge FS, Avendano-Herrera R. 2012. Use of reverse transcription-real time polymerase chain reaction (real time RT-PCR) assays with universal probe library (upl) probes for the detection and genotyping of infectious pancreatic necrosis virus strains isolated in Chile. J Virol Methods. 183: 80–85. doi.org/10.1016/j.jviromet.2012.03.022.
7. Cicek Y. 2018. Viral Hemorajik Septisemi Virusunun (VHSV) Fenotipik Karakterinin Virulans Üzerine Etkisinin Araştırılması [Yüksek Lisans Tezi] Ondokuz Mayıs Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Samsun.
8. Cutrín JM, Olveira JG, Bandín I, Dopazo CP. 2009. Validation of real time RT-PCR applied to cell culture for diagnosis of any known genotype of viral haemorrhagic septicaemia virus. J Virol Methods. 162: 155–162. doi.org/10.1016/j.jviromet.2009.07.033.

9. Einer-Jensen K, Ahrens P, Forsberg R, Lorenzen N. 2004. Evolution of the fish rhabdovirus viral haemorrhagic septicaemia virus. J Gen Virol. 85: 1167–1179. doi.org/10.1099/vir.0.79820-0.
10. Einer-Jensen K, Harmache A, Biacchesi S, Bremont M, Stegmann A, Lorenzenn. 2014. High virulence differences among phylogenetically distinct isolates of the fish rhabdovirus viral hemorrhagic septicaemia virus are not explained by variability of the surface glycoprotein G or the nonvirion protein Nv. J Gen Virol. 95: 307–316. doi.org/10.1099/vir.0.057448-0.
11. Gadd T. 2013. Fish rhabdoviruses; viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV) and perch rhabdovirus (PRV): Study of viral strains and the disease epidemiology in Finland [PhD Thesis]. University of Helsinki, Faculty Of Veterinary Medicine, Finland. 18-38.
12. Herzog P, Drosten C, Müller MA. 2008. Plaque assay for human coronavirus NL63 using human colon carcinoma cells. Virol J. 5: 138. doi.org/10.1186/1743-422X-5-138.
13. Isıdan H, Kutlu İ. 2014. Viral hemorajik septisemi virüs genotip 1e suşlarının çipura (Sparus aurata) ve levrek (Dicentrarchus labrax) balıkları üzerinde patojenitelerinin belirlenmesi. Yunus Araştırma Bülteni. 2: 49-53. doi: 10.17693/yunus.26244.
14. Kalaycı G, Incoğlu S, Ozkan B. 2006. First ısolation of viral hemorrhagic septicemia (VHS) virus from turbot (Scopthalmus maximus) cultured in the Trabzon coastal area of the black sea in Turkey. B Eur Ass Fish Path. 26: 157- 162.
15. Kim MS, Kim KH. 2013. The role of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) NV gene in TNF-α and VHSV infection-mediated NF-KB activation. Fish Shellfish Immunol 34: 1315-1319. doi: 10.1128/JVI.00279-17.
16. Kim R, Faisal M. 2011. Emergence and resurgence of the viral hemorrhagic septicemia virus (Novirhabdovirus, Rhabdoviridae, Mononegavirales) J Adv Vet Anim Res. 2: 9–23. doi.org/10.1016/j.jare.2010.05.007.
17. Kinkelin P, Berre LM. 1977. Isolement d'un rhabdovirus pathogene de la truite fario (Salmo trutta, L.). C r Acad Sci Paris, Serie D. 284: 101-104.
18. Matejusova I, Mckay P, Mcbeath AJA, Collet B, Snow M. 2008. Development of a sensitive and controlled real-time RT-PCR assay for viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) in marine salmonid aquaculture. Dis Aquat Organ. 80: 137–144. doi.org/10.3354/dao01911.
19. Matrosovich M, Matrosovich T, Garten W, Klenk HD. 2006. New low-viscosity overlay medium for viral plaque assays. Virol J. 3: 63. doi: 10.1186/1743-422X-3-63.
20. McAllistera J, Gaucia PJ, Mitchell IR, Boyle DB, Bulach DM, Weir RP, Melville LF, Davis SS, Gubala AJ. 2014. Genomic characterisation of almpiwar virus, harrison dam virus and walkabout creek virus; three novel rhabdoviruses from northern Australia. Virol Rep. 3–4: 1-17. doi.org/10.1016/j.virep.2014.09.001.
21. Nishizawa T, Savas, H, Isıdan H, Ustündağ C, Iwamoto H, Yoshimizu M. 2006. Genotyping and pathogenicity of viral hemorrhagic septicemia virus from free living turbot (Psetta maxima) in a Turkish Coastal Area of the Black Sea. Appl Environ Microbiol. 72: 2373–2378. doi.org/10.1128/AEM.72.4.2373-2378.2006.
22. Pham PH, Lumsden JS, Tafalla C, Dixon B, Bols NC. 2013. Differential effects of viral hemorrhagic septicaemia virus (VHSV) genotypes IVa and IVb on gill epithelial and spleen macrophage cell lines from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Fish Shellfish Immunol. 34: 632-640. doi.org/10.1016/j.fsi.2012.12.004.
23. Purcell MK, Hart SA, Kurath G, Winton JR. 2006. Strand-specific, real-time RT-PCR assays for quantification of genomic and positive-sense RNAs of the fish rhabdovirus, ınfectious hematopAnonimtic necrosis virus. J Virol Methods. 132: 18–24. doi.org/10.1016/j.jviromet.2005.08.017.
24. Schönherz AA, Lorenzen N, Einer-Jensen K. 2013. Inter-species transmission of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) from turbot (Scophthalmus maximus) to rainbow trout (Onchorhynchus mykiss). J Gen Virol. 94: 869–875. doi: 10.1099/vir.0.048223-0.
25. Schütze H, Mundt E, Mettenleiter TC. Complete genomic sequence of viral hemorrhagic septicemia virus, a fish rhabdovirus. Virus Genes 1999; 19: 59–65. doi: 10.1023/A:1008140707132.
26. Skall HF, Olesen NJ ve Mellergaard S. Viral haemorrhagic septicaemia virus in marine fish and its implications for fish farming. J Fish Dis 2005; 28: 509–529. doi.org/10.1111/j.1365-2761.2005.00654.x.