Epididimal ve Dondurulmuş Çözülmüş Holstain Boğa Spermasında Farklı Boyama Yöntemlerinin Karşılaştırılması

Abstract

Öz: Bu çalışmanın amacı, epididimal ve dondurulmuş çözdürülmüş boğa spermalarında farklı sperma boyama yöntemlerinin etkinliğinin karşılaştırılmasıdır. Dondurulmuş sperma 37 ºC’de 30 saniyede çözdürüldü. Epididimal sperma mezbahadan cauda epididimisten elde edildi ve PBS ile sulandırıldı. Mikroskop altındaki ön değerlendirilmeden sonra dondurulmuş çözdürülmüş ve epididimal spermalardan froti hazırlandı ve hazırlanan frotiler kurutuldu. Spermatozoa Coomassie Blue, Gümüş Nitrat, May-Grünwald+Giemsa, Naphthol Yellow-S+Eritrosin-B, Trypan Blue+Giemsa ve Eosin+Coomassie Blue, Panceao-S, Ponceau-S+ Napthol Yellow-S+ Eritrosin B ve modifiye wright ile boyandı. Boyanan frotiler parlak ışık mikroskobunda değerlendirildi (Nikon E-600). Bütün frotilerden en az 100 spermatozoa incelendi. Sağlam spermatozoadaki egüteryal bölge çok iyi fark edildi ve akrozomal bölge bazı sperma boyama yöntemlerinde diğer bölgelere göre farklı renkte boyandı  (Coomassie Blue, May-Grünwald+ Giemsa, Naphthol yellow-S+Eritrosin-B, Eosin+Coomassie Blue). Bozuk akrozomlu spermatozoadaki eguteryal bölgeler iyi boyanmadı. Çalışmamızdaki tüm boyama yöntemlerinde epididimal sperma dondurulmuş çözdürülmüş spermaya göre daha iyi boyandı. Bu ise cryoprotektan olarak kullanılan maddelerden kaynaklanabileceği tahmin edildi (hayvansal protein kaynakları gibi). Sonuç olarak çalışmamız Eosin+Coomassie boyamasının Holstein boğalarda basit, ucuz, güvenilir bir boyama yöntemi olduğunu gösterdi. Bu metot Holstein boğalarda epididimal ve dondurulmuş çözdürülmüş spermalarda hızlı çalışan, ölü-canlı ve akrozomal/ morfolojik bozuklukların hesaplanmasında kullanılabilir bir metot olduğunu ortaya koymuştur.

Anahtar kelimeler: sığır, spermatozoa, boyama

Keywords

• Sığır, spermatozoa, boyama

References

1. Christensen P, Whitfield’ CH and Parkinson TJ.1996. In vitro induction of acrosome reactions ın stallion spermatozoa by heparin and A23187. Theriogenology 45:1201-1210. 9.
2. Elder FFB, Hsu TC.1981. Silver Staining Patterns of Mamalian Epididymal Spermatozoa. Cytogen Cell Genet 30: 157-167. 10.
3. Foresta C, Ferlin A, Bettella A, Rossato M, Varotto A.1995. Diagnostic and clinical features in azoospermia. Clinical Endocrinology, 43(5): 537- 543. 11.
4. Hansen C, Srikandakumar A, Downey DR.1991. Presence of follicular fluid in the porcine oviduct and its contribution to the acrosome reaction. Molecular Reproduction and Devolopment, 30 (2): 148-153.. 12.
5. İleri İK., AK K, Papuccuoğlu S, Birler S.2008. Evcil hayvanlarda Reprodüksiyon ve Sun’i tohumlama. İstanbul Üniversitesi Veteriner Fakültesi Yayını, Ders notu no :142, 2008. 13.
6. Katarzyna A and Elzibieta S.2011. The use of silver nitrate for the identification
7. ofspermatozoon structure in selected mammals. Can.
8. J. Anim. Sci. 91: 239-246. 14.

9. Kovakcs A and Foote RH.1992. Viability and Acrosomes Staining of Bull, Boar and Rabbit Spermatozoa. Biotechnic & Histochemistry, 1052- 0295/92/6703-0119. 15.
10. Larson JL and Miller DJ. 1999. Simple Histochemical Stain for Acrosomes on Sperm From Several Spercies. Molecular Reproduction and Development, 52: 445-449. 16.
11. Lenz RV, Ball GD, Lohse JK, First NL and Ax RL. 1983. Chondroitin Sulfate Facilitates an Acrosome Reaction in Bovine Spermatozoa as Evidenced by Light Microscopy, Electron Microscopy and In Vitro Fertilization. Biology of Reproduction, 28: 683-690. 17.
12. Moller CC, Bleil JD, Kinloch RA, Wassarman PM.1990. Structural and functional relationships between mouse and hamster zona pellucida glycoproteins. Dev Biol 137: 276–286. 18.
13. Rajamahendran R, Anbrose J, Lee C. 1994. Anti-human sperm monoclonal antibody HS-11: a potential marker to detect bovine sperm acrosome reaction in vitro. J Reprod Fertil, 101: 539–545. 19.
14. Uçar Ö. 2004. Akrozom reaksiyonunun sperma kalitesi, muhafazası ve suni tohumlama başarısındaki rolü. Kafkas Üniv. Vet. Fak. Derg., 10(1):117-124. 20.
15. Yıldız C, Ataman MB, Kaya A, Tepeli C, Lehimcioğlu N. 2000. Köpek ve koçlarda akrozom bozukluklarının belirlenmesi amacıyla farklı tespit ve boyama yöntemlerinin karşılaştırılması. Y.Y.Ü. Vet. Fak. Derg., 11 (2): 7-11,.