ACE I/D VE ANJİYOTENSİNOJEN M235T POLİMORFİZMLERİNİN BELİRLENMESİNDE KONVANSİYONEL PZR VE EŞZAMANLI PZR YÖNTEMLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI

Abstract

Amaç: Anjiyotensin dönüştürücü enzim (ACE) ve Anjiyotensinojen (AGT) renin-anjiyotensin sisteminin anahtar bileşenleridir. ACE I/D ve AGT M235T polimorfizmleri genellikle konvansiyonel PZR tekniği ile saptanmaktadır. Fakat son zamanlarda hızlı genotiplendirme tekniğinin geliştirilmesi ile bu polimorfizmlerin belirlenmesi kolaylaşmıştır. Çalışmamızda ACE I/D ve M235T polimorfizmlerinin belirlenmesinde Eşzamanlı ve konvansiyonel PZR yöntemlerini karşılaştırmayı amaçladık. Yöntem: ACE I/D ve AGT M235T polimorfizmleri konvansiyonel ve Eşzamanlı PZR teknikleri ile çalışıldı ve bu tekniklerin avantajları ve dezavantajları belirlendi. Bulgular: Bulgularımıza göre konvansiyonel PZR ile I/D polimorfizminin yanlış genotiplendirme oranı % 6 belirlendi. Bu nedenle hatalı genotiplendirmeden kaçınmak için tüm DD genotipli örneklere ikinci bir PZR daha uygulandı (İnsersiyon spesifik PZR). DNA örnekleri aynı zamanda Eşzamanlı PZR ile de analiz edildi. Son olarak konvansiyonel PZR ve Eşzamanlı PZR sonuçları karşılaştırıldı. Tüm genotipler Eşzamanlı PZR ile tek seferde doğru olarak saptandı. Ayrıca M235T polimorfizmi de PCR-RFLP ve Eşzamanlı PZR teknikleri ile analiz edildi. İki tekniğin sonuçları arasıda herhangi bir farklılık gözlemedi. Ancak PCR-RFLP yönteminde tamamlanmamış enzim kesimi gibi olası problemler yanlış genotiplendirmeye neden olabilmektedir. Sonuç: Özetle ACE I/D ve M235T polimorfizmlerinin hızlı genotipleme tekniği olan Eşzamanlı PZR ile belirlenmesi güvenilirlik ve zaman kaybı yönünden laboratuvar araştırmaları ve tanı için uygun bir seçenek sunmaktadır.

Keywords

• ACE, AGT, Eşzamanlı PZR, Polimorfizm, PZR

References

1. 1. Rankinen T, Gagnon J, Perusse L, et al. AGT M235T and ACE ID polymorphisms and exercise blood pressure in the HERITAGE Family Study. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2000; 279: H368–H374.
2. 2. Marteau JB, Zaiou M, Siest G, Visvikis-Siest S. Genetic determinants of blood pressure regulation. J Hypertens 2005; 23(12): 2127-2143.
3. 3. Pilati M, Cicoira M, Zanolla L, Nicoletti I, Muraglia S, Zardini P. The role of angiotensin-converting enzyme polymorphism in congestive heart failure. Congest Heart Fail 2004; 10: 87–93
4. 4. Arima H, Kiyohara Y, Tanizaki Y, Nakabeppu Y, Kubo M, Kato I. Detection of angiotensin-converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism from paraffinembedded tissues. Circ J 2002; 66: 1034–1036.
5. 5. Ashavaid TH, Shalia KK, Kondkar AA, Todur SP, Nair KG, Nair SR. Gene polymorphism and coronary risk factors in Indian population. Clin Chem Lab Med 2002; 40: 975-985
6. 6. Agachan B, Isbir T, Yılmaz H, Akoglu E. Angiotensin converting enzyme I/D, angiotensinogen T174MM235T and angiotensin II type 1 receptor A1166C gene polymorphism in Turkish hypertensive patients. Exp Mol Med 2003; 35: 545-549
7. 7. Cockerill FR. Application of rapid-cycle Real-Time polymerase chain reaction for diagnostic testing in the Cclinical microbiology laboratory. Arch Pathol Lab Med 2003; 127: 1112-1120.
8. 8. Wilhelm J, Pingoud A. Real-Time polymerase chain reaction. ChemBioChem 2003; 4: 1120 -1128.

9. 9. Wittwer CT, Ririe KM, Andrew RV, David DA, Gundry RA, Balis UJ. The LightCycler: A microvolume multisample fluorimeter with rapid temperature control. Biotechniques 1997; 22: 176-181
10. 10. Hiratsuka M, Kishikava Y, Narahara K, et al. Detection of angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism using Real Time polymerase chain reaction and melting curve analysis with SYBR Green I on a Geneamp 5700. Anal Biochem 2001; 289: 300-303.
11. 11. Rigat B, Hubert C, Corvol P, Soubrier F. PCR Detection of the insertion/deletion of the human angiotensin converting enzyme gene (DCP 1) (Dipeptidyl Carboxypeptidase 1). Nucleic Acids Res 1992; 20: 1433–1346.
12. 12. Lindpaintner K, Pfeffer MA, Kreutz R, et al. A prospective evaluation of an angiotensin converting enzyme gene polymorphism and the risk of ischemic heart disease. N Engl J Med 1995; 332: 706–711.
13. 13. Morise T, Takeuchi Y, Takeda R. Rapid detection and prevalance of the variants of the angiotensinogen gene in patients with essential hypertension. J Intern Med 1995; 237: 175-180.
14. 14. Malin R, Wirta V, Hiltunen TP, Lehtimaki T. Rapid detection of angiotensinogen M/T235 polymorphism by fluorescence probe melting curves. Clin Chem 2000; 46 (6 Pt 1): 880-881.
15. 15. Shanmugam V, Sell KW, Saha BK. Mistyping ACE heterozygotes. PCR methods Appl 1993; 3: 120-121.
16. 16. Perna NT, Batzer MA, Deininger PL, Stoneking M. Alu insersition polymorphism: A new type of marker for human population studies. Hum Biol 1992; 64: 641-648.
17. 17. Evans AE, Poirter O, Kee F. Polymorphism of the angiotensin converting enzyme gene in subjects who die from coronary heart disease. Quart J Med 1994; 87: 211- 214.
18. 18. Lin MH, Tseng CH, Tseng CC, Huang CH, Chong CK, Tseng CP. Real Time PCR for rapid genotyping of angiotensin-converting enzyme insertion-deletion polymorphism. Clin Biochem 2001; 34: 661-666.
19. 19. Somogyvari F, Szolnoki Z, Marki-Zay J, Fodor I. Real Time PCR assay with fluoresan hybridization probes for exact and rapid genotyping of the angiotensinconverting enzyme gene insertion/deletion polymorphism. Clin Chem 2001; 47: 1728-1729