Development and Validation of Liquid Chromatographic Method with DAD for the Quantification of Natamycin In Dairy Products

Abstract

In this paper high performance liquid chromatography method

was developed for the determination of natamycin in dairy

product in Turkish market. Chromatographic separation was

achieved on a C8 column (150 mm x 4.6 mm x 5 μm 100 mm)

with a mobile phase of methanol : water : acetic acid (12:8:1

v/v/v), at 1ml/min flow rate with DAD detection at 303 nm.

Natamycin was analysed simultaneously using HPLC-UV

method of ISO 9233+2, 2007( IDF 140-2, 2007).

The method was found linear over the concentration ranges

of 0.01-0.8 mg/L. Correlation coefficients (r) of the regression

equations were greater than 0.999. The LOD and LOQ values

for UV and DAD were found 0.321 mg/kg and 0.355 mg/kg;

0.321 mg/kg and 0.388 mg/kg for cheese samples respectively.

The relative recoveries obtained for the spiked cheese samples

were between 90 and 110 %. Also the interday precision of the

method was found as 1.874% and 3.442 % RSD values for UV

and DAD dedections. From the results of the present study using

HPLC-DAD indicated that it is not reasonable to attribute the

determination of natamycin in cheese. Therefore, the difference

of the validation parameters were found insignificant for both

detections. However, It was succesfully applied to determination

of 46 different cheese products and finding dealing with the

presence of natamycin in cheese samples were presented.

Keywords

• HPLC-DAD,validation,natamycin,antifungal agent

Peynir örneklerinde Natamisin’in nicel analizi için HPLCDAD yöntemi geliştirilmesi ve validasyonu

Abstract

Bu çalışma kapsamında süt ürünlerinde yüksek performanslı

sıvı kromatografisi kullanılarak bir analitik yöntemi geliştirildi.

Kromatografik ayırmalar C8 kolon (150 mm x 4.6 mm x 5 μm)

metanol : su : asetik asit (12:8:1 v/v/v) mobil fazı ile 1 mL/dak

akış hızında ve DAD dalga boyunda 303 nm’de çalışılmıştır.

Natamisin analizi için geliştirilen yöntemde ISO 9233+2, 2007

yöntemi kullanılmıştır. Yapılan doğrusallık çalışmalarında

natamisin için 0,01-0,8 mg /kg aralıklarında elde edilen

regresyon eşitliklerinin korelasyon katsayıları 0.999’dan yüksek

bulunmuş ve yöntemlerin doğrusallığı gösterilmiştir. Geri

kazanım sonuçları % 90-110 aralığında bulunmuştur. The LOD

and LOQ değerleri UV and DAD dedektörleri için sırasıyla

0.321 mg/kg and 0.355 mg/kg; 0.321 mg/kg and 0.388 mg/kg

bulunmuştur. Ayrıca yöntemin UV ve DAD için güniçi kesinliği

%1.874 ve %3.442 bulunmuştur. Çalışma sonuçları HPLC DAD

kullanımının natamisin tayinine katkısı olmadığını gösterdi.

Bu nedenle validasyon parametrelerinin her iki dedektör

için farklılığının önemsiz olduğu bulundu. Fakat yöntem

ISO 9233+2, 2007 (IDF 140-2, 2007 yöntemine göre valide

edildi ve 46 peynir örneğinin tayininde uygulandı ve peynir

örneklerindeki natamisin varlığına ilişkin bulgular sunuldu.

Keywords

• HPLC-DAD,validation,natamycin,antifungal agent

References

1. 1. Chen GQ, Lu FP, and Du LX. Natamycin production bystreptomyces gilvaspaareus base on statistical optimization. JAgric Food Chem 2008; 56: 5057-61.
2. 2. EFSA 2009 Scientific opinion of EFSA prepared by the panelon food additivies and nutritient sources added to food (ANS)on the use of natamycin (E235) as a food additive. The EFSAJ 2009; 7: 1412-37.
3. 3. Raab WP In Natamycin (primaricin). Its properties andpossibilities in medicine. Georg Thieme Publ, Stuttgart-NewYork. 1972.
4. 4. ISO 9233-2, 2007 (IDF 140-2, 2007) Cheese, cheese rind andprocessed cheese- and determination of natamycin content.Part 2 high-performance liquid chromatographic method forcheese, cheese rind and processed cheese.
5. 5. Sağlam OF. Tuk Gıda Mevzuatı. AB Ofset, Ankara. 1999.
6. 6. De Ruig WG, Van Oostrorn JJ, Leenheer K. J Assoc Off AnalChem 1987;70: 949-54.
7. 7. Reps L, Drychowski J, Tomasik K, Niewska W. Natamycin inripening cheeses. Pak J Nutr 2002; 1: 243-7.
8. 8. Capitan-Vallvey LF, Checa-Moreno R, Navas N, Capitan-Vallvey LF, Checa-Moreno R, Navas N. Rapid ultravioletspectrophotometric and liquid chromatographic methodsfor the determination of natamycin in lactoserum matrix. JAOAC Int 2000; 83: 802-8.

9. 9. Tuinstra LGMT, Traag WA. Liquid chromatographicdetermination of natamycin in cheese at residue levels. J AssocOff Anal Chem 1982; 65: 820-2.
10. 10. Rybińska K, Postupolski J, Szczesna M. Determination ofnatamycin residues in ripening cheese by high-performanceliquid chomatography. Rocz Panstw Zakl Hig 1997; 48:173-81.