The Effects Of Low Plt On Nitric Oxide (NO) Synthesis From Human Manocyte Derived Macrophages

Abstract

The aim of this study was to asses the effects of environmental pH changes to acidic range on nitric oxide (NO) synthesis from macrophages. Human monocyte derived macrophages were obtained from peripheral blood of healthy human volunteers by using Ficoll-Hypaque density gradient method. Isolated monocytes were seeded into tissue culture flasks and incubated at 37°C in a 5 %C02 humidified incubator for 7 days in RPMI (Roswell Park Memorial Institute)-1640 medium with 10% Fetal-calf serum (FCS). Macrophages were then harvested and seeded in 96-wellplates at 105 cells/well. RPMI 1640 containing 10% FCS at three different pH ranges of 7.4. 7.0 and 6.8 was added to all wells. Samples from each well were taken for determining nitrite concentration at 3, 6, 24 and 48 hours time. Substitution of the medium of adherent macrophages with media at different pH modified NO production as reflected by changes in nitrite accumulation; as the pH became more acidic, more nitrite was detected in the culture media. The results indicate that the state of pH to which macrophages exposed to causes significant improvement in NO synthesis. İnsan Monosit-Derive Makrofajlann Nitrik Oksit (NO) Sentezine Düşük pH'ın Etkileri Çalışmada, asidik karakterde çevresel pH değişikliklerinin makrofajlann nitrik oksit (NO) sentezine etkilerinin araştınlması amaçlanmıştır. İnsan monosit derive makrofajlar sağlıklı gönüllülerin periferal kanlarından Ficoll-Hypaque density graident metod kullanılarak elde edilmiştir. İzole edilen monositler doku kültür flasklanna dağıtıldıktan sonra %10 fetal-calf serumlu (FCS) RPMI (Roswell Park Memorial Institute)-1640 besiyerinde 7 gün 37CC ve %5 C07 içeren ortamda inkübe edilmiştir. Oluşan makrofajlar 96 kuyucuklu plaklara 105 hücre/kuyucuk olacak şekilde dağıtılmıştır. Tüm kuyucuklara pH 7.4, 7.0 ve 6.8 olan %10 FCS'lu RPMI 1640 ilave edilmiştir. 3. 6, 24 ve 48 saat sonra kuyucuklardan alınan örneklerdeki nitrit kon-santrasyonlan tespit edilmiştir. Farklı pH'daki besiyerleri ile adherent makrofajlann besiyerleri değiştirildiğinde NO üretiminin bir göstergesi olan nitrit birikiminde değişiklik olmaktadır. pH daha asidik olunca kültür ortamında daha çok nitrit tespit edilmektedir. Sonuçlar göstermektedir ki. makrofajlann maruz kaldığı pH'ın durumu NO sentezinde belirgin bir artışa neden olmaktadır.

Keywords

• -