Tüberküloz Tanısında Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yönteminin Konvansiyonel Yöntemlerle Karşılaştırılması

Year 2002, Volume: 19 Issue: 1, - , 23.12.2009

S. Güneş H. Bağcı N. Kara

Abstract

Comparison of The Myobacterium Tuberculosis with The Conventional Methods

Polymerase chain reaction (PCR). due to its faster response than culture was used for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis. Amplification reactions were performed using primers that amplify a 123 bp fragment of Insertion Sequence 6110 (IS61 10) specific to M. tuberculosis.
A total of 64 samples were tested by PCR. The type (number) of specimens tested as fallows: sputum (31). urine (20). perisentez (5), torosentez (4). peritoneal fluid (3) and broneial washing (1). Sputum samples were decontaminated by N-acetyl-L-cysteine-NaOH. other samples were decontaminated by NaOH-Na citrate method. The DNA used in PCR was obtained by boiling. 33 samples were found positive wiLh PCR and 30 samples were negative with PCR. 30 samples were smear positive and 30 samples were smear negative. 17 samples were culture positive and 30 samples were culture negative. The sensilivily and specificity were 94% and 79%. respectively.
Polymerase chain reaction run with the DNA isolated from standart M. tuberculosis strain H3/Rq was working normally in the presence of DNAs (less than 1 pgj of Escherichia coli and Staphylococcus aureus.
The detection limit for PCR was determined by making serial dilihions of DNA from the standart M. 1 uberculosis H37Rq strain. The detection limit of IVI. tubereiilosis HMTkq strain was found to be as low as -8 M. tuberculosis genome eqivalonts of DNA in biological samples.


Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR). kültüre göre daha kısa sürede cevap vermesi nedeniyle Mycobacterium tuberculosis'in tanısında kullanıldı. Polimeraz zincir reaksiyonunda kullanılan primerler bu bakteriye özgül olan Insertion Sequence 61 10 (1S61 10)'a ait olup 123 baz çilli uzunluğunda bir bölgenin çoğaltılmasında kullanıldılar.
31 balgam, 20 idrar, 5 parasentez, 4 torasentez, 3 periton mayi ve 1 bronkiyal lavaj olmak üzere 64 örnek çalışıldı. Balgam örneklerinin dekontaminasyonu N-aseüTL-sistein-NaOH. diğer örneklerin dekontaminasyonu ise NaOH-Sodyum sitrat yöntemiyle yapıldı. Kaynatma yöntemiyle elde edilen DNA. polimeraz zincir reaksiyonunda kullanıldı. 33 örnek PCR pozitif. 31 örnek PCR negatif olarak bulundu. ARB (aside-alkole rezistan basilj pozitif örneklerin sayısı 30, ARB negatif örneklerin sayısı ise ,30'du. Kültür sonuçlarına göre 17 örnek kültür pozitif. 31 örnek ise kültür negatifti. Polimeraz zincir reaksiyonunun duyarlılığı %94. özgüllüğü ise %79 olarak hesaplandı.
Standart suş M. tuberculosis H37Rq'dan elde edilen DNA ile yürütülen PCR'ın Esclıerichia coli ve Staplıylococcus aureus DNA'lannm varlığında (lug'dan az) bile normal olarak çalıştığı görüldüğü.
Standart suş DNA'sının farklı konsantrasyonlarının PCR ile çoğaltılmasıyla elde edilen sonuçlara göre içinde yaklaşık olarak 8 M. tuberculosis genomuna eşdeğer miktarlarda DNA bulunduran biyolojik materyallerde basilin varlığının gösterilmesinin mümkün olduğu bulundu.
Sonuç olarak. PCR'm tüberküloz tanısında kullanılabilecek hızlı, duyarlı ve özgül bir
yöntem olduğu gösterildi.

Keywords

-