Brucella ileenfekte korunlarda Brucella melitensis Rev 1 sitosoluble antijenlerine karşı oluşan immunoglobulin G antikorlarının immunoblot yöntemi ile analizi

Year 1996, Volume: 2 Issue: 1-2 - 1996, 12 - 16, 16.06.1996

Kemal Gürtürk Banur Boynukara Abdülbaki Aksakal

Abstract

Bu çalışmada Brucella ile enfekte koyunların kan serumlarında, Brucella melitensis sitosoluble antijenlerine karşı oluşan îmmunoglobulin tgG antikorlar immunoblot yöntemi ile incelendi. Sitosoluble antijenler, Brucella melitensis Rev 1 suşundan 0.1 mol/1 sodium sitrat’lı 1 mol/i NaCI çözeltisi içinde hazırlanan Brucella süspansiyonunun ısı ite muamelesi tuzla ekstrakte edilebilen sitosoluble antijenler ve 0.15 mol/l NaCI içiı de hazırlanan Brucella süspansiyonunun otoklavda muamele edilmesinden sonra etanol'le ç/ktürme e.anol ile çöktürülebilen sitosoluble antijenler işlemleri ile ayrı ayrı ekstrakte edildi. Her iki ekstrakt sodyum codesilsulfat poliakrilamıd jel elektroforezde analize edildiğinde. 62-66 kDa, 42 kDa, 33 kDa, 27-29 kDa ve 20.5-22 kDa ile 18,7 kDa'dan daha küçük mofeküler ağırlığa sahip benzer protein bandları içerdiği gözlendi. Ayrıca tuzla ekstrakte edilebilen 50 kD moleküler ağırlıkta farklı bir protein bandı tespit edildi, immunoblot analizde, Brucella ile enfekte koyunlarm kan serumlarının karıştırılması ile elde edilen serumdaki tgG antikorların her iki ekstraktdaki 33-50 kDa arasında moleküler ağırlığa sahip sitosoluble antijenlerle reaksiyon verdiği gözlendi. Ayrıca, antikorlar, etanol ile çöktürülebilen. 23-25 kDa, 52-60 kDa, 62-66 kDa moleküier ağırlıktaki sitosoluble anijenlerle reaksiyon verdi. Her iki ekstraktda 20 kDa moleküler ağırlığın altındaki sitosoluble antijenlere karşı antikorlarla reaksiyon görülmedi.

Keywords

Brucella melitensisRev 1 .İmmunoblot. Koyun

Immunoblotting analysis of Immunoglobuiin G antibody response against cytosoluble antigens of Brucella melitensis strain Rev 1 in

Abstract

in this study. Immunoglobuiin G IgG antibodies against Brucella melitensis cytosoluble antigens CSA in sera of Brucella infected sheep were examined by immunoblotting. CSA uıere çxtracted from Brucella melitensis strain Rev 1 by heat treatment of Brucella suspension in 1 mol/1 NaCI containing 0.1 mol/1 Na-Citrate salt extractable CSA and by ethanol precipitation after autoclauing of Brucella suspension in 0,15 mol/1 NaCI ethanol precipitable CSA respectively The analysis of the both extracts in sodium dodecyl suiphate-polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE resulted mainly in similar protein bands at molecular masses MM of 62-66 kDa, 42 kDa. 33 kDa . 27-29 kDa. 20.5-22 kDa and the protein bands belou.' 18.7 kDa. İn addition. a distinct protein band in salt extractab!e CSA was observed at MM of 50 kDa . In immunoblot analysis using a pool of sera from different Brucella infected sheep. IgG antibodies reacted mainly with CSA betıveen 33 kDa and 50 kDa MM of both exracts. In addition. antibody response of infected sheep against 23 to 25 kDa. 52 to 60 kDa and 62 to 66 kDa ethanol precipitable CSA ıvas also detected Antibody reactiuity against CSA of the both extracts belouı 20 kDa wasn ’t observed.

Keywords

Brucella melitensis Rev 1, Immunoblotting, Sheep

References

• 1- Arda. M .Mınbav. A.Leloğlu, N . Aydın, N , Akay. O (1992). Özel Mikrobiyoloji. Epidmiyoloji, Bakteriyel ve Mıkotık înfekstyöz Hatalıklar Atatürk Unıv.. Kars Vet Fak Yayın. No], Erzurum
• 2- Blobel, H and Schlıesser, T (1982) Ilandbuch der bakteriellen Infekiıonen beı tıeren. VEB Gustav Fischer Verlag, 555 pp
• 3- Alton, G G.. Jones. M.L Angus. D D and Verger. J.M (1988) Techniques for the Brucellosis laboratory INRA Ed 147 Rue de L’Universite 75007 Parts, 190 pp
• 4- Plommet, M. New anımal vaccıne (1991) Brucella and Brucellosis in Man and in Animals. Turkish Microbiol Soc. pp. 77- 85
• 5- Jimenes de Bagiles, M P , Martn. CM. Blasco, J.M , Monyon.I and Gamazo. C (1992) AN ELİSA wıth Brucella I.ıpopolısacchande antigcn for the dıagnosis of B melıtensıs ınfeelıon m Sheep and for the evaluatıon of serlogıcal response follotting subcutaneous or conjunctıval B melıtensıs strain Ret 1 vaccınatıon. vet Microbiol. 30. 233-241
• 6- labalabai. L.B.. and Deyoe. B.I, (1984b) spesifıc enzyme-lınked rınmunosorbentassay for detectıon of bovıne antıbody to Brucella abortus Infect. Immun., 26; 668-679
• 7- Diaz. R., Toyos, J., Salvo, M.D. Pardo. M.L. (1981) A simple method for the extraction of polvsacchande B from Brucella cells for use ın the radıal immundifiusion test diagnosıs of bovıne brucellosis. Arın Rech Vet. 12; 35-39
• 8- Macmıllan, A.P. and Bradshaw, b (1991) The differeatıation of sera from cattle recentlv vaccınaıed uıth Brucella abortus S19 from those infecteduıth fıeld straıns using an indırect ELİSA Brucella and Brucellosis m Man and Anımals. Turkish Microbiol Soc., pp: 195-206
• 9- Zvgmunt, MS, Dubray, G . Lımet, J.N.. Cloeckaert. A . Jacques, I. and Tk-o Vo (1990) Antıgeıuc structure of Brucella Protectıve and Diagnostıc antıgens Bnıcella and Brucellosis in Man and Aniınals. Turkish Microbiol Soc , pp: 27 - 37.
• 10- Goldbaum. FA. Morelli. I. Wallach, J Rubbı. C.P. and Fossati, CA (1991) Human brucellosis. Immunoblotting analysis of three Brucella abortus antigenıc fractıons allı the detectıon of components of diagnostıc importance Mc -ma. 51; 227 - 232
• 11- Belzer, C A . Tabatabaı. L B . Deyoe. B L (1991) DılTerentıatıon by Westem Blotung of immune response of cattle vaccinatcd with Brucella abortus S 19 or ınfected eypenmcntally or naturally wıth vırulent Brucella abortus Vet Microbiol 27. 79 - 90
• 12- Chin, J.C., Pang. B , and Carrigan, M (1991) Conıparison of sero-reactıvity of rams wıth brucellosis m a complement fıxatıon test, whole celi ELİSA and by ımmunoblottıng Vet Microbiol. 26. 291 – 299.
• 13- Debbarh, H.S.A., Cloeckaert, A., Zvgmunt M S. (1995) Identification of sero-reactıve Brucella melıtensıs cytosoluble protems whıch dsıcrımmate between antıbodıes elicıted bv ınfectıon and Rev 1 vaccınatıon Vet Microbiol 44. 37-18
• 14- Riezu-boj. JI. Morivon, I. Blasco. J.M , Gamazo, C . and Diaz, R (1990) Antibodv response to Brucella outer membrane proteıns m övme brucellosis. Infect. Immun , 26. 668 - 679
• 15- Zvgmunt. M S . Debbarh. H.S.A., Cloeckaert, A and Dubray, G (1994) Antibodv response to Brucella melıtensıs outer membrane antıgens in naturally ınfected and Rev 1 vaccinated sheep Vet Microbiol. 39; 33 - 46
• 16- Tabatabai, L B . Devoe. B.L.. Patterson. J.M. 11989) Immunogenıcıtv of Brucella abortus salt extractable protems. Vet Microbiol . 120.49-58
• 17- Lowry, O H. Rosebrough, N.J. Farr. A L and Randall. R J. (1951) Protein mesurement with the folin phenol reagent J Bıol Chem . 193. 265-275.
• 18- Laemli, II K 11970) Cleavage of structural protems durıng the assamblev of the head of Bctenophage T4 Nature. 227:680-685
• 19- Weber. K and Osbom. M (1969) The relıabılıtv ofnıolecular wcıght determmatıons by dodecyl sulphatepolyacrylamide gel electrophoresıs. J Bıol Chem 244, (16); 4406- 4412
• 20- Towbin, H , Staehelin, T., and Gordon. J. (1979) Elektrophorctıc transfer of protems from polyacry lamide gel to nitrocellulose sheets Procedur and some applications Proc. Natl Acad. Sci. 76 (9);4350-4354
• 21- Gurtürk K., Aksakal, A , Bavdaş. B (1995) Van yöresinde yavru atan boyunlarda Brusellozis üzerine etyolojik ve serolojık incelemeler Y Y Ü Sağ Bil Ens Derg 2; 13-15
• 22- Cloeckaert.A . Wergıfosse, P . Dubray, G. and Lımet. J.N. (1990) Identification of seven surface-exposed Brucella outher membrane proteins by use of monoclonal antıbodıes Immunogold labellmg for electron mıcroscopy and Enzvme Lmked Immunosorbent Assay. Infect İmmun . 58. (12); 3980-3987
• 23- Kittelberger, R.. Hılbmk.F.. Hansen. M.K. Penrose, M , Geoffrey, W de L , Letesson, J.J., Garin-Bastujı. B., Searson. J. Fossati, Carlos, A.F., Cloeckaert, A and Schurıng.G (1995) Serologıcal crossreactıvity between Brucella abortus and Yersmıa enterocoltıca 0:9; I Immunobot analy sis of the antibodv response to Brucella pıotem antıgens m ovıne Brucellosis. Vet. Microbiol.,47; 257-270