İnsan Blastosöl Sıvısında Yeni Bir İnvaziv Yöntem: Blastosentez Yöntemi İle İnsan Blastokistlerindeki Blastosöl Sıvısından Preimplantasyon Genetik Tanı Analizi

Abstract

Bu derlemede; vitrifikasyonda blastosöl sıvısının (blastokistlere ait sıvı) (BS) aspire edilmesi ile blastokistin gelişimini, hayatta kalma oranını ve implantasyon başarısını etkileyip etkilemediği tartışılacaktır. Blastosöl sıvısında mevcut olan genetik ürün gerçekten embriyo genomunu yansıtıp yansıtmadığı tartışma konusudur. Preimplantasyon genetik tanı (PGT) analizi için blastosöl sıvıdan elde edilen bilgi gerçekten polar cisimcik (PB), blastomer veya trofoektoderm biyopsisinden elde edilen DNA ile uyumlu sonuçları verip vermediğide bilinmemektedir.

Embriyoda kavitasyon gelişimi dördüncü günde gerçekleşir. Bu süreçte iç hücre kitlesi (IHK) ve trofoektoderm (TE) hücreleri farklılaşmaya başlar. TE hücreleri blastosöl boşluğuna sodyum iyonu ile birlikte blastosöl sıvı depolamaya başlar. Bu sıvı ile blastokist hacmi genişler. Blastokistin genişleme derecesi, hücre sayısı, iç hücre kitlesi ve ilkel trofoblast hücreleri ile uyum halinde beşinci ve altıncı günde en ileri seviyeye ulaşır.

Yardımcı üreme tekniklerinde embriyoların dondurulması sıklıkla kullanılmaktadır. Embriyo dondurma çoklu embriyo transferi ihtiyacını ortadan kaldırarak çoğul gebelik oranını azaltır. Bununla beraber transfer edilmeyen veya edilemeyen embriyolarında bir sonraki süreçte kullanılmak üzere dondurulmasıda doğurganlık potansiyelinin korunması adına önemlidir.

Yapılan çalışmalarda blastosöl sıvısının hızlıca azaltılması ile oluşturulan dondurmada buz kristali oluşumunun azaldığı ve embriyo canlılığının olumlu etkilendiği görülmüştür. Bunun sebebinin kriyoprotektif ajanların daha az blastosöl sıvısıyla maruziyetinden kaynaklandığı düşünülmektedir. Ayrıca blastosöl sıvısının aspirasyonu ile hücre dışı ve hücre içi dinamik denge eşitlenerek kriyoprotektif ajanlardan daha az etkilendiği düşünülmektedir.

Ayrıca infertilite tedavisinde in vitro fertilizasyon (IVF) kullanım oranı %1-5 ‘dir. Ancak, bunlardan sadece küçük bir oranı sağlıklı bir gebelik için gerekli olan genetik ve metabolik gereksinimlere sahiptirler. Embriyo yeterlilik değerlendirmesi için günümüzde kullanılan morfolojik skorlama tekniği yetersizdir. Klinik embriyoloji başarı oranlarını artırmak için; embriyoların implantasyon öncesi blastosöl sıvısı analizleri; polar cisim, blastomer veya trofoektoderm biyopsilerine alernatif yeni bir yöntem olarak öne çıkmaktadır.

Blastokistlerden blastosöl sıvısı aspire edilmesi için zona pellucidaya tek bir lazer darbesi TE ve IHK zarar vermeden lazerin oluşturduğu ısı etkisiyle bir delik açarak buradan rutin IVF kliniklerinde kullanılan intrastoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI) cihazı yardımı ile blastosentez adı verilen yöntem ile aspire edilir.

Keywords

• Blastokist,Blastosöl,Blastosentez

References

1. D'Alessandro, A., G. Federica, S. Palini, et al. A mass spectrometry-based targeted metabolomics strategy of human blastocoele fluid: a promising tool in fertility research. Molecular BioSystems. 2012;8(4):953-958.
2. Jensen, P. L., H. C. Beck, J. Petersen, et al. Proteomic analysis of human blastocoel fluid and blastocyst cells. Stem cells and development. 2012;22(7):1126-1135.
3. Shapiro, B. S., S. T. Daneshmand, F. C. Garner, et al. Evidence of impaired endometrial receptivity after ovarian stimulation for in vitro fertilization: a prospective randomized trial comparing fresh and frozen–thawed embryo transfer in normal responders. Fertility and sterility. 2011;96(2):344-348.
4. Roque, M., M. Valle, F. Guimarães, et al., Freeze-all policy: fresh vs. frozen-thawed embryo transfer. Fertility and sterility. 2015;103(5):1190-1193.
5. Trounson, A. and L. Mohr, Human pregnancy following cryopreservation, thawing and transfer of an eight-cell embryo. Nature. 1983;305(5936):707-709.
6. Sullivan, E. A., F. Zegers-Hochschild, R. Mansour, et al. International Committee for Monitoring Assisted Reproductive Technologies (IHKART) world report: assisted reproductive technology. Human Reproduction. 2004;28(5):1375-1390
7. AbdelHafez, F. F., N. Desai, A. M. Abou-Setta, et al. Slow freezing, vitrification and ultra-rapid freezing of human embryos: a systematic review and meta-analysis. Reproductive biomedicine online. 2010;20(2):209-222.
8. Pavone, M. E., J. Innes, J. Hirshfeld-Cytron, et al. Comparing thaw survival, implantation and live birth rates from cryopreserved zygotes, embryos and blastocysts. Journal of human reproductive sciences. 2011;4(1):23-28.

9. Ozmen, B., S. Askan, Y. Mohammed and D. Klaus. Current data on the vitrification of human embryos: Which one is the best; zygote, cleavage or blastocyst stage. J Turkish-German Gynecol Assoc. 2007;8(2):218-226.
10. Desai, N., J. Szeptycki, M. Scott, F. F. AbdelHafez and J. Goldfarb. Artificial collapse of blastocysts before vitrification: mechanical vs. laser technique and effect on survival, cell number, and cell death in early and expanded blastocysts. Cell Preservation Technology. 2008;6(3):181-190.
11. Mukaida, T., C. Oka, T. Goto and K. Takahashi. Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts. Human Reproduction. 2006;21(12):3246-3252.
12. Li, Z., Y. Wang, W. Ledger, D. Edgar and E. Sullivan. Clinical outcomes following cryopreservation of blastocysts by vitrification or slow freezing: a population-based cohort study. Human Reproduction. 2014;29(12):2794-2801.
13. Poli, M., A. Ori, T. Child, et al. Characterization and quantification of proteins secreted by single human embryos prior to implantation. EMBO Mol Med. 2015;7(11):1465-1479.
14. Capalbo, A., L. Rienzi, D. Cimadomo, et al. Correlation between standard blastocyst morphology, anöploidi and implantation: an observational study in two centers involving 956 screened blastocysts. Human Reproduction. 2014;29(6): 1173-1181.
15. Farfalli, V., M. Magli, A. Ferraretti and L. Gianaroli et al. Role of ananöploidi on embryo implantation. Gynecologic and obstetric investigation. 2007;64(3):161-165.
16. Darwish, E. and Y. Magdi. Artificial shrinkage of blastocoel using a laser pulse prior to vitrification improves clinical outcome. J Assist Reprod Genet. 2016;33(4):467-471.
17. Poli, M., S. Jaroudi, J. Sarasa, et al. The blastocoel fluid as a source of DNA for preimplantation genetic diagnosis and screening. Fertility and Sterility. 2013;100(3):37.
18. Taylor, T. H., S. A. Gitlin, J. L. Patrick, et al. The origin, mechanisms, incidence and clinical consequences of chromosomal mosaicism in humans. Human reproduction update. 2014;20(4):571-581
19. Magli, M. C., A. Pomante, G. Cafueri, et al. Preimplantation genetic testing: polar bodies, blastomeres, trophectoderm cells, or blastocoelic fluid? Fertility and sterility. 2016;105(3):676-683.
20. Tobler, K. J., Y. Zhao, R. Ross, et al. Blastocoel fluid from differentiated blastocysts harbors embryonic genomic material capable of a whole-genome deoxyribonucleic acid amplification and comprehensive chromosome microarray analysis. Fertil Steril. 2015;104(2):418-425.