Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması

Melek Pehlivan; Seda Vatansever; Burcu Çerçi; Damla Akoğulları; Yusuf Özlem İlbey; İbrahim Pirim

doi:10.34087/cbusbed.886995

Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması

Abstract

Giriş: Böbrek hücrelerinin elde edilmesinde kullanılan primer kültür yöntemi, böbrek hastalıklarının hücre düzeyinde değerlendirilmesi ve hücre fonksiyonlarının incelenmesi için olanak sağlamaktadır. Bu çalışmanın amacı böbrek primer kültürü için kullanılabilecek üç farklı izolasyon yönteminin hücre sağkalımı ve protol etkinliği açısından birbirleriyle karşılaştırılmasıdır. Gereç ve Yöntemler: Nefrektomi ile çıkarılan böbrek dokusu steril şartlarda mekanik, tripsin ve kollagenaz yöntemi ile ayrımlanarak podosit vasatı içerisinde kültüre edildi. Kültüre edilen hücrelerin podosin, vimentin, E-kaderin, TGF-β1, CD133, ZO-1 ve Nefrin dağılımlarının analizi immünositokimyasal yöntem ile yapıldı. Bulgular: Kollajenaz enzimatik yöntemi sonrasında hücrelerin kültürün 7. gününden itibaren, mekanik yöntemde ise 13. günden itibaren epiteloid karakter aldıkları gözlenirken, tripsin enzimatik yönteminde 13. günde kültürde artan fuziform yapıdaki hücreler gözlendi. Her üç yöntem ile böbrek dokusundan elde edilen podosit hücrelerin immunositokimyasal analizi sonrasında, elde edilen hücrelerde vimentin, E-kaderin, TGF-β, CD133, ZO-1 immunoreaktiviteleri farklılık gösterir iken, podosin ve nefrin immunoreaktivitelerinin kollajenaz enzimatik yöntemi ile elde edilen hücrelerde kuvvetli olduğu saptandı. Tartışma: Bu çalışmada, farklı proteinlerin immunositokimyasal boyamaları ile kontrol edilen böbrek hücreleri için üç farklı primer kültür teknikleri karşılaştırıldığında, kollajenaz ile muamele edilen böbrek dokusundan daha yüksek verimle hücre saflaştırılabildiği gözlendi. Podosit hücrelerinin kültüre edilmesinde hücre sağkalım verimi ve protokol etkinliği açısından kollajenaz yönteminin en uygun yöntem olduğu gösterildi.

Keywords

References

1.Chawla, Lakhmir S., and Paul L. Kimmel. "Acute kidney injury and chronic kidney disease: an integrated clinical syndrome." Kidney international 82.5 (2012): 516-524.
2. Levey, A,S, Cassandra, B, B, Lesley, A, I, Glomerular filtration rate and albuminuria for detection and staging of acute and chronic kidney disease in adults: a systematic review, Jama, 2015, 313(8), 837-846.
3. Ding, W, Keyvan, Y, Lina, A,S, Isolation, characterization, and high throughput extracellular flux analysis of mouse primary renal tubular epithelial cells, Journal of visualized experiments JoVE, 2018, 136.
4. Vander, A,J, Sherman J,H, Luciano D,S, The mechanism of body function. In: Vander’s human physiology, McGraw-Hill Education, 2000, pp 476-486.
5. Detrisac, C,J, Sens M,A, Garvin A,J, Spicer S,S, Sens D,A, Tissue culture of human kidney epithelial cells of proximal tubule origin, Kidney international ,1984, 25(2), 383-390.
6. Uysal O, Sevimli T, Sevimli M, Gunes S, Sariboyaci AE, Cell and Tissue Culture: The Base of Biotechnology. In: Omics Technologies and Bio-Engineering Towards Improving Quality of Life, 1st edn, Academic Press, London, 2018, pp 391-429.
7. Hendijani, F, Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues, Cell proliferation, 2017,50(2), e12334.
8. Valente, M,J, Henrique, R, Costa, V,L, Jerónimo, C, Carvalho, F, Bastos, M,L, Pinho, P,G, Carvalho, M, A rapid and simple procedure for the establishment of human normal and cancer renal primary cell cultures from surgical specimens. PloS one, 2011, 6(5), e19337.

9. Hawksworth G,M, Isolation and culture of human renal cortical cells with characteristics of proximal tubules. Methods in Molecular Medicine, 2005, 107, 283–290.
10. Vesey, D,A, Qi, W, Chen, X, Pollock, C,A, Johnson, D,W, Isolation and primary culture of human proximal tubule cells. Methods in Molecular Biolology, 2009, 466, 19–24.
11. Glynne, P, Primary culture of human proximal renal tubular epithelial cells. Methods in Molecular Medicine, 2000, 36: 197–205.
12. Qian, T, Hernday, S,., Bao, X, Olson, W,R, Panzer, S,E, Shusta, E,V, Palecek, S,P, Directed differentiation of human pluripotent stem cells to podocytes under defined conditions, Scientific reports,2019, 9(1), 1-12.
13. Satelli, A, Li, S, Vimentin in cancer and its potential as a molecular target for cancer therapy. Cellular and molecular life sciences, 2011, 68(18), 3033-3046.
14. Shen, S,S, Krishna, B, Chirala, R, Amato, R,J, Truong, L,D, Kidney-specific cadherin, a specific marker for the distal portion of the nephron and related renal neoplasms. Modern pathology,2005, 18(7), 933-940.
15. Sureshbabu, A, Muhsin, S,A, Choi, M,E, TGF-β signaling in the kidney: profibrotic and protective effects. American Journal of Physiology-Renal Physiology, 2016, 310(7), F596-F606.
16. Bruno, S., Bussolati, B., Grange, C., Collino, F., Graziano, M. E., Ferrando, U., & Camussi, G. (2006). CD133+ renal progenitor cells contribute to tumor angiogenesis. The American journal of pathology, 169(6), 2223-2235.
17. Shankland, S. J., Pippin, J. W., Reiser, J., & Mundel, P. (2007). Podocytes in culture: past, present, and future. Kidney international, 72(1), 26-36.

Details

Primary Language

Turkish

Subjects

Biochemistry and Cell Biology (Other)

Journal Section

Research Article

Authors

Melek Pehlivan
0000-0001-8755-4812
Türkiye

Seda Vatansever
0000-0002-7415-9618
Türkiye

Burcu Çerçi
0000-0002-7477-1073
Türkiye

Damla Akoğulları
0000-0001-9778-8532
Türkiye

Yusuf Özlem İlbey
0000-0002-1483-9160
Türkiye

İbrahim Pirim ^*
0000-0001-8485-3286
Türkiye

Publication Date

September 30, 2021

Submission Date

March 2, 2021

Acceptance Date

May 7, 2021

Published in Issue

Year 2021 Volume: 8 Number: 3

DOI

https://doi.org/10.34087/cbusbed.886995

IZ

https://izlik.org/JA84YR42JH

Cite

RIS / Bibtex

APA

Pehlivan, M., Vatansever, S., Çerçi, B., Akoğulları, D., İlbey, Y. Ö., & Pirim, İ. (2021). Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal, 8(3), 524-533. https://doi.org/10.34087/cbusbed.886995

AMA

1.Pehlivan M, Vatansever S, Çerçi B, Akoğulları D, İlbey YÖ, Pirim İ. Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal. 2021;8(3):524-533. doi:10.34087/cbusbed.886995

Chicago

Pehlivan, Melek, Seda Vatansever, Burcu Çerçi, Damla Akoğulları, Yusuf Özlem İlbey, and İbrahim Pirim. 2021. “Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması”. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal 8 (3): 524-33. https://doi.org/10.34087/cbusbed.886995.

EndNote

Pehlivan M, Vatansever S, Çerçi B, Akoğulları D, İlbey YÖ, Pirim İ (September 1, 2021) Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal 8 3 524–533.

IEEE

[1]M. Pehlivan, S. Vatansever, B. Çerçi, D. Akoğulları, Y. Ö. İlbey, and İ. Pirim, “Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması”, CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal, vol. 8, no. 3, pp. 524–533, Sept. 2021, doi: 10.34087/cbusbed.886995.

ISNAD

Pehlivan, Melek - Vatansever, Seda - Çerçi, Burcu - Akoğulları, Damla - İlbey, Yusuf Özlem - Pirim, İbrahim. “Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması”. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal 8/3 (September 1, 2021): 524-533. https://doi.org/10.34087/cbusbed.886995.

JAMA

1.Pehlivan M, Vatansever S, Çerçi B, Akoğulları D, İlbey YÖ, Pirim İ. Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal. 2021;8:524–533.

MLA

Pehlivan, Melek, et al. “Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması”. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal, vol. 8, no. 3, Sept. 2021, pp. 524-33, doi:10.34087/cbusbed.886995.

Vancouver

1.Melek Pehlivan, Seda Vatansever, Burcu Çerçi, Damla Akoğulları, Yusuf Özlem İlbey, İbrahim Pirim. Böbrek Hücrelerinin Elde Edilmesinde Üç Farklı Primer Kültür Yönteminin Karşılaştırılması. CBU-SBED: Celal Bayar University-Health Sciences Institute Journal. 2021 Sep. 1;8(3):524-33. doi:10.34087/cbusbed.886995