Yağ Dokusunda Katalaz Aktivitesi Ölçümü için Farklı İzolasyon Yöntemlerinin Karşılaştırılması

Recent studies have shown that adipose tissue is not only an energy store, but also an endocrine organ. Obesity, which occurs as a result of increased fat mass in the body, is observed together with increased oxidative stress and low-grade chronic inflammation. It is an increase in tissue oxidative stress due to the inflammation observed in adipose tissue. Antioxidant enzymes are proteins that help suppress the severity of oxidative stress by leading to the formation of fewer active radicals or reducing the damage of a free radical chain reaction on proteins, lipids, carbohydrates, and DNA. Catalase (CAT), an important antioxidant enzyme, prevents the formation of oxidative stress by breaking down H2O2 into water and oxygen. The fact that adipose tissue has a high lipid and low protein content, high lipid interference, makes protein isolation and activity measurements in this tissue difficult. In our study, it was aimed to investigate the effect of using different protein isolation methods on CAT activity in adipose tissue and to identify the necessary conditions for measurement. CAT activity measurements were performed using the Aebi method. Retroperitoneal adipose tissue was removed from the rats and activity measurements were performed using three different homogenization methods. Chloroform/methanol was used as the organic solvent in homogenization 1 (H1), in homogenization 2 (H2) and homogenization 3 (H3) only chloroform was used . As a result of the evaluations, the average specific activity values of the H1 method were found to be higher than those of the other two methods. As a result, it was concluded that the H1 method may be more suitable for measuring CAT enzyme activity in retroperitoneal adipose tissue.

Son zamanlarda yapılan çalışmalar yağ dokusunun yalnızca enerji deposu olmadığını, bunun yanında endokrin bir organ olduğunu da gösterdi. Vücutta artan yağ kitlesi sonucu oluşan obezite artmış oksidatif stres ve düşük dereceli kronik inflamasyonla birlikte gözlenmektedir. Yağ dokusunda gözlenen inflamasyona bağlı olarak dokuda oksidatif stres de artmaktadır. Antioksidan enzimler, daha az aktif radikal oluşmasına yol açarak veya serbest radikal zincir reaksiyonunun proteinler, lipidler, karbohidratlar ve DNA üzerine hasarını azaltarak oksidatif stresin şiddetini bastırmaya yardımcı olan proteinlerdir. Önemli bir antioksidan enzim olan katalaz (CAT), H2O2’yi su ve oksijene parçalayarak oksidatif stresin oluşumunu engeller. Yağ dokusunun yüksek lipit ve düşük protein içeriğine sahip olması, lipit interferansının yüksek olması bu dokuda protein izolasyonunu ve aktivite ölçümlerini zorlaştırmaktadır. Çalışmamızda, yağ dokusunda farklı protein izolasyon yöntemlerinin kullanılmasının CAT aktivitesi üzerine etkisinin incelenmesi ve ölçüm için gerekli şartların ortaya konulması amaçlandı. CAT aktivitesi ölçümleri Aebi yöntemi kullanılarak yapıldı. Sıçanlardan retroperitoneal yağ dokusu çıkarılıp üç farklı homojenizasyon yöntemi kullanılarak aktivite ölçümleri gerçekleştirildi. Homojenizasyon 1 (H1)’de organik çözücü olarak kloroform/metanol, homojenizasyon 2 (H2)’de ve homojenizasyon 3 (H3)’te sadece kloroform kullanıldı. Yapılan değerlendirmeler sonucunda H1 yönteminin ortalama spesifik aktivite değerleri diğer iki yönteme göre daha yüksek bulundu. Sonuç olarak, retroperitoneal yağ dokusunda H1 yönteminin CAT enzim aktivitesi ölçümünde daha uygun olabileceği kanaatine varıldı.