Farklı genetik kaynaklardan elde edilen F2 biber genotiplerinde (Capsicum annuum L.) TSWV’ye dayanıklılığın moleküler analizi

Abstract

TSWV’ye dayanıklılık geni ile ilişkili olan SCAC₅₆₈ CAPS markırı ıslah programlarında dayanıklı ve hassas biber genotiplerini ko-dominant seviyede (RR, Rr, rr) ayırt etmek için kullanılmaktadır. Ancak farklı genetik arka plana sahip olan bazı ıslah materyallerinin heterozigot ve homozigot düzeyde seleksiyonunda tutarsız sonuçlar alınabilmektedir. Bu çalışmada farklı genetik kaynaklardan elde edilmiş F2 biber genotiplerinin SCAC₅₆₈ markırı kullanarak domates lekeli solgunluk virüsü (TSWV)’ne karşı dayanıklılığının moleküler yöntemlerle testlenmesinde iki farklı enzimle (XbaI ve TaqI) yapılan kesim sonuçlarının karşılaştırmalı olarak birlikte değerlendirilmesinin ve dayanıklı ile hassas genotiplerin ko-dominant seviyede belirlenmesinde kullanılabilirliğinin test edilmesi amaçlanmıştır. Çalışmada F2 aşamasındaki iki popülasyona ait genotipler SCAC₅₆₈ CAPS markırı kullanılarak test edilmiştir. Çalışmada her iki popülasyondan toplam 110 adet F2 bitkisine ait genomik DNA SCAC₅₆₈ CAPS markırı ile PCR’da çoğaltılmış ve elde edilen PCR ürünleri XbaI ya da TaqI enzimleri ile kesilmiştir. Kesim ürünleri % 2’lik agaroz jelde ayrıştırılarak UV altında görüntülenmiştir. Çalışma sonuçları popülasyonlardan bir tanesine ait F2 genotiplerinde heterozigot ve homozigot düzeyde beklenen genotipik açılımı (1RR:2Rr:1rr) verirken diğer popülasyonda F2 seviyesinde beklenen açılımın elde edilebilmesi için her iki enzime ait kesim sonuçlarının birlikte değerlendirilmesi sonucu dayanıklı ve hassas bireylerin heterozigot ve homozigot seviyede ayırt edilebileceğini göstermiştir. Sonuçlar açılım gösteren F2 popülasyonlarında SCAC₅₆₈ CAPS markırının TSWV’ye karşı hassas ve dayanıklı genotiplerin belirlenmesinde, iki enzimle kesim yapılarak başarılı bir şekilde kullanılabileceğini teyit etmiştir.

Keywords

• TSWV,F2,CAPS marker,ko-dominant marker,MAS

Molecular screening for TSWV resistance in F2 pepper (Capsicum annuum L.) genotypes from different genetic background

Abstract

A CAPS marker linked to resistance gene to TSWV in pepper was employed to classify tolerant and susceptible plants at co-dominant level (RR, Rr, rr). During this process selecting heterozygote and homozygote resistant plants from different genetic backgrounds may show some deviations. In this experiment for determination of heterozygote/homozygote resistance/susceptible genotypes developed from different genetic background using two enzymes (XbaI and TaqI) separately at the same time and assessing the gel pictures together was studied. For this purpose, the F2 pepper plants belonging to two different population and each population developed from different genetic background were tested with SCAC₅₆₈ marker. The genomic DNA of 110 plants representing both populations were amplified with SCAC568 CAPS marker and the PCR products were digested with XbaI and TaqI enzymes. The digested fragments were separated in agarose gel and visualized under UV light. The genotypes belonging to one population gave the expected segregation (1RR: 2Rr: 1rr) at F2 level while the other population required digestion of PCR products with both XbaI and TaqI enzyme separately and assessment the results together to determine resistant and susceptible plants at co-dominant level and to obtain the expected F2 segregation. The results showed that SCAC568 CAPS marker can be used successfully to select the resistant and susceptible genotypes in F2 segregation population by employing two enzymes. 

Keywords

• F2,TSWV,CAPS marker,codominant marker,MAS

References

1. Azeri T (1994) Detection of tomato spotted wilt virus in tobacco and tomato cultivars by enzyme linked immunosorbent assay. J. Turkish Phytopathology 23(1): 37-46.
2. Black LL, Hobss HA, Gatti JM (1991) Tomato spotted wilt virus resistance in Capsicum chinense ‘PI 152225’and ‘PI 159236’. Plant Disease, 75: 863.
3. Boiteux LS (1995) Allelic relationships between genes for resistance to tomato spotted wilt tospovirus in Capsicum chinense. Theorotical and Applied Genetics 90: 146–149.
4. Brittlebank CC (1919) Tomato diseases. Journal of Agriculture Victoria 27: 231-235.
5. Cebolla-Cornejo J, Soler S, Gomar B, Soria DM, Nuez F (2003) Screening Capsicum germplasm for resistance to tomato spotted wilt virus (TSWV). Annals of Applied Biology 143(2): 143–152.
6. Costa J, Catalá MS, Lacasa A, Díez MJ, Nuez F (1995) Introduction of plant genetic resistance to TSWV from C. chinense ‘PI 159236’ in different pepper genetic backgrounds. In First International Symposium on Solanacea for Fresh Market. March 28–31 1995, Malaga, Spain. Acta Hortic. 412: 523–532.
7. Çelik İ, Özalp R, Çelik N, Polat İ (2018) Domates Lekeli Solgunluk Virüsü (TSWV)’ne dayanıklı sivri biber hatlarının Geliştirilmesi. Derim 35(1): 27-36 doi: 10.16882/derim.2018.325765.
8. Doyle JJ, Doyle JL (1987) A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochem Bull 19: 11–15.

9. Floor HH (1971) Current status of the gene-for-gene concept. Annual Reviews of Phytopathology 9: 275-296.
10. German TL, Ullman DE, Moyer JW (1992) Tospoviruses: diagnosis, molecular biology, phylogeny, and vector relationships. Annual Review of Phytophatology 30, 315-348.
11. Goldbach R, Peters D (1994) Possible causes of the emergence of tospovirus diseases. Sem. Virology. 5: 113-120.
12. Jahn M, Paran I, Hoffmann K, Radwanski ER, Livingstone KD, Grube RC, Aftergoot E, Lapidot M, Moyer J (2000) Genetic mapping of the Tsw locus for resistance to the tospovirus tomato spotted wilt virus in Capsicum spp. and its relationship to the Sw-5 gene for resistance to the same pathogen in tomato. The American Phytopathological Society 13(6): 673-682.
13. Moury B, Palloix A, Gebre Selassie K, Marchoux G (1997) Hypersensitive resistance to tomato spotted wilt virus in three Capsicum chinense accessions is controlled by a single gene and is overcome by virulent strains. Euphytica 94: 45–52.
14. Moury B, Pflieger S, Blattes A, Lefebvre V, Palloix A (2000) A CAPS marker to assist selection of tomato spotted wilt virus (TSWV) resistance in pepper. Genome 43: 137–142.
15. Nevame AYM, Xia L, Nchongboh CG, Hasan MM, Alam MA, Yongbo, L Wenting Z, Yafei H, Emon RM, İsmail MR, Efisue A, Gang S, Wenhu L, Longting S (2018) Development of a New Molecular Marker for the Resistance to Tomato Yellow Leaf Curl Virus, BioMed Research International, vol. 2018, Article ID 8120281, https://doi.org/10.1155/2018/8120281.
16. Parrella G, Gognalons P, Gebre-Selassie K, Vovlas C, Marchoux G (2003) An update of the host range of Tomato spotted wilt virüs. Journal of Plant Pathology 8: 227-264.
17. Rosello S, Diez MJ, Lacasa A, Jorda C, Nuez F (1996) Testing resistance to TSWV introgressed from Lycopersicon peruvianum by artificial transmission techniques. Euphytica 98: 93-98.
18. Shi A, Vierling R, Grazzini R, Chen P, Caton H, Panthee D (2011) Identification of molecular markers for Sw-5 gene of tomato spotted wilt virus resistance. Am. J Biotechnol. Mol. Sci. 1: 8–16 doi: 10.5251/ajbms.2011.1.1.8.16.
19. Tekinel N, Dolar MS, Sağsöz S, Salcan Y (1969) Mersin Bölgesinde ekonomik bakımdan önemli bazı sebzelerin virüsleri üzerinde araştırmalar. Bitki Koruma Bülteni 9(1): 37-49.
20. Tekinel N (1973) Adana, Antalya, Hatay ve İçel illerinde domates virüs hastalıklarının yayılış alanlarının ve oranlarının tespiti üzerinde araştırmalar. Bitki Koruma Bülteni Cilt 13 No: 3, s. 107-141.
21. Yang HB, Liu WY, Kang WH, Kim JH, Cho HJ, YooJH, Kang BC (2012) Development and validation of L allele-specific markers in Capsicum. In Molecular Breeding vol. 30, no. 2, pp. 819–829. doi: 10.1007/s11032-011-9666-7.
22. Yürtmen M, Guldur ME, Yılmaz MA (1999) Tomato spotted wilt virus on peppers in İçel province of Turkey. Petria 9(3): 243-344.