Der(21)T(17;21) ve 13q Delesyonlu Bir KLL Olgusunun Sitogenetik, FISH ve Qrt-PCR ile İncelenmesi

Abstract

Amaç: Kronik Lenfositik Lösemi (KLL), lenfoproliferatif bir hastalık olup, ortalama görülme yaşının 65 olduğu heterojen bir klinik gösterir. En yaygın kromozomal değişim 13q14 ve 17p13 delesyonlarıdır. Her iki bölgenin kaybı da kötü prognozla ilişkilendirilmektedir. 17p13 bölgesi başka kromozomlarla yeniden düzenlenmelere katılmaktadır. Bu düzenlenmelerden biri de t(17;21) translokasyonudur. Son çalışmalar mikroRNA’ların çeşitli solid tümör ve hematolojik kanserlerde rol oynadığını göstermektedir. KLL olgularında delesyona uğrayan 13q14 bölgesi üzerinde yer alan DLEU2 geninin kodladığı miR-15 ve miR-16’nın ifadesinin bu bölgenin delesyonuna bağlı olarak azaldığı gösterilmiştir. 
Yöntem: Çalışmamızda evre 0 KLL tanılı kadın olgudan alınan perifer kan örneği konvansiyonel sitogenetik yöntemiyle sitogenetik olarak, kromozom 17 ve kromozom 21’e özgü farklı renkte tüm kromozomu boyayan DNA probları kullanılarak metafaz FISH (mFISH) tekniği, 17p delesyonu için P53 delesyon ve 13q delesyonu için D13S319 plus probları ile iFISH tekniği ve miR-15a/miR-16-1 ifade düzeylerinin belirlenmesi için qRT-PCR yöntemi uygulandı. 
Bulgular: Yapılan çalışma sonucu olguda sitogenetik olarak del(6)(q?), del(13)(q22), der(21)t(17;21)(q11.2;q22) kromozom düzensizlikleri saptandı. FISH tekniği ile del17p13, del13q14, ve der(21)t(17;21) bulguları doğrulanırken, gerçek zamanlı PZR (qRT-PCR) yöntemiyle de miR-15a ve miR-16-1 ifadesinin azaldığı gözlemlendi. Elde edilen bulgulara göre azalan miRNA seviyeleri ile yüksek orandaki mono ve biallelik 13q14 delesyonları arasında korelasyon bulundu. 
Sonuç: Konvansiyonel sitogenetik ve iFISH yöntemine ek olarak miR-15a ve miR-16-1 ifade seviyeleri de KLL olgularında belirleyici faktör olarak kullanılabileceğini düşünmekteyiz.

Anahtar Kelimeler: KLL, Sitogenetik, FISH, miR-15a/miR-16-1, P53 geni, qRT-PCR

References

1. Codony C, Crespo M, Abrisqueta P, Montserat E, Bosch
2. F. Gene expression profiling in chronic lymphocytic
3. leukaemia. Best Pract Res Clin Haematol 2009;22:211-222.
4. Kalil N ,Cheson B. Chronic lymphocytic leukemia. The
5. Oncologist 1999;4:352-369.
6. Bullrich F, Croce C. Molecular Biology of Chronic
7. Lymphocytic Leukemia. Chronic Lymphocytic Leukemias,
8. Revised and Expanded, 2nd edn: Cheson B (ed). Marcel

9. Dekker, Inc: New York, NY, USA, 2001; p. 9–32.
10. Lopez C, Baumann T, Costa D, Lopez-Guerra M, Navarro
11. A, Gomez C, et al. A new genetic abnormality leading to
12. TP53 gene deletion in chronic lymphocytic leukaemia. Br J
13. Haematol 2012;156:612–618.
14. Undi RB, Kandi R, Gutti RK. MicroRNAs as haematopoiesis
15. regulators. Adv Hematol 2013;2013:1-20.
16. Zhong X, Coukos G, Zhang L. miRNAs in human cancer.
17. Methods Mol Biol. 2012;822:295-306.
18. Calin GA, Pekarsky Y, Croce CM. The role of microRNA
19. and other non-coding RNAs in the pathogenesis of chronic
20. lymphocytic Leukemia, Best Pract Res Clin Haematol
21. ;20(3):425-437.
22. Parker H, Rose-Zerilli MJ, Parker A, Chaplin T, Wade R,
23. Gardiner A, et al. 13q deletion anatomy and disease
24. progression in patients with chronic lymphocytic leukemia.
25. Leukemia 2011;25:489-497.
26. Palamarchuk A, Efanov A, Nazaryan N, Sanatanam U,
27. Alder H, Rassenti L, et al. 13q14 deletion in CLL involve
28. cooperating tumor suppressors. Blood 2010;19:3916-
29. Humplikova L, Kollinerova S, Papajik T, Pikalova Z,
30. Holzerova M, Prochazka V, et al. Expression of miR-15a and
31. miR-16-1 in patients with chronic lymphocytic leukemia.
32. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub.
33. ;157(4):284-293.
34. Ward BP, Tsongalis GJ, Kaur P. MicroRNAs in chronic
35. lymphocytic leukemia. Exp Mol Pathol 2011;90:173-178.
36. Put N, Wlodarskal I, Vandenberghe P, Michaux L. Chronic
37. Lymphocytic Leukemia. In Genetics of Chronic Lymphocytic
38. Leukemia: Practical Aspects and Prognostic Significance,
39. Dr. Pablo Oppezzo (Ed.), Rijeka, Croatia, 2012, p.269-296.
40. ISCN 2013: An International System for Human Cytogenetic
41. Nomenclature, L.G.Shaffer, J. McGovan-Jordan, M. Schmid
42. (eds); S. Karger, Basel 2013.
43. Bo MD, Rossi FM, Rossi D, Deambrogi C, Bertoni F, Giudice
44. ID, et al. 13q14 deletion size and number of deleted cells
45. both influence prognosis in chronic lymphocytic leukemia.
46. Genes, Chromosomes Cancer 2011;50:633-643.