Investigation of Neospora caninum and Toxoplasma gondii tachyzoites in peripheral blood samples ofdogs by TaqMan probe based Real Time PCR

Abstract

This study was carried out to investigate Neospora caninum and Toxoplasma gondii tachyzoites in total of 400 whole peripheral blood samples with EDTA which were collected from the clinically healthy dogs in Kayseri region. Following the isolation of genomic DNA from the blood samples, spectrophotometric measurements of the obtained genomic DNAs were performed and appropriate concentrations were prepared for Real Time PCR (qPCR). qPCR analyses of the samples were conducted using the specific primers and probes that target the gene regions NC5 for N. caninum and RE for T. gondii. Out of 400 blood samples, 15 (3.8%) were found to be infected with N. caninum while no T. gondii positivity was determined in the examined samples. In conclusion, some molecular epidemiological data about N. caninum and T. gondii infections dogs in Kayseri region were firstly demonstrated in Turkey with this study

Keywords

• Dog
• Neospora caninum
• Real Time PCR
• tachyzoit
• Toxoplasma gondii

Köpek periferal kan örneklerinde Neospora caninum ve Toxoplasma gondii takizoitlerinin TaqMan prob bazlı Real Time PCR ile araştırılması

Abstract

Bu çalışma, Kayseri yöresinde klinik olarak normal görünümlü köpeklerden toplanmış toplam 400 adet EDTA'lı periferal tam kan örneğinde Neospora caninum ve Toxoplasma gondii takizoitlerinin araştırılması amacıyla yapılmıştır. Kan örneklerinden genomik DNA izolasyonunu takiben, elde edilen genomik DNA’ların spektrofotometrik ölçümleri yapılmış ve Real Time PCR (qPCR) için uygun konsantrasyonlar hazırlanmıştır. N. caninum için NC5 ve T.gondii için RE gen bölgelerini hedef alan spesifik primer ve problar kullanılarak örneklerin qPCR analizleri gerçekleştirilmiştir. qPCR sonuçlarına göre 400 örneğin 15’inde (%3,8) N. caninum pozitifliği tespit edilmiş olup hiçbir örnekte T. gondii pozitifliğine rastlanmamıştır. Sonuç olarak bu çalışma ile Türkiye’de ilk kez Kayseri yöresinde köpeklerin perifer tam kan örneklerinde N.caninum ve T. gondii takizoitleri TaqMan Prob Bazlı Real Time PCR tekniği ile araştırılmış ve moleküler epidemiyolojik veriler elde edilmiştir

Keywords

• Köpek
• Neospora caninum
• Real Time PCR
• takizoit
• Toxoplasma gondii

References

1. Anderson ML, Andrianarivo AG, Conrad PA (2000): Neosporosis in cattle. Anim Reprod Sci, 60, 417-431.
2. Bjerkas I, Mohn SF, Presthus J (1984): Unidentified cyst-forming sporozoon causing encephalomyelitis and myositis in dogs. Z Parasitenkd, 70, 271-274.
3. Coşkun ŞZ, Aydın L, Bauer C (2000): Seroprevalence of Neospora caninum infection in domestic dogs in Turkey. Vet Rec, 146, 649.
4. Dubey JP, Schares G (2011): Neosporosis in animals-the last five years. Vet Parasitol,180, 90-108.
5. Dubey JP (2009): Toxoplasmosis of Animals and Humans, Second Edition, CRC Press.
6. Dubey JP, Schares G, Ortega-Mora LM (2007): Epidemiology and control of neosporosis and Neospora caninum. Clin Microbiol Rev, 20, 323-367.
7. Dubey JP, Schares G (2006): Diagnosis of bovine neosporosis. Vet Parasitol, 140, 1-34.
8. Dubey JP, Buxton D, Wouday W (2006): Pathogenesis of Bovine Neosporosis. J Comp Path, 134, 267-289.

9. Dubey JP (1998): Advances in the life cycle of Toxoplasma gondii. Int J Parasitol, 28, 1019-1024.
10. Dubey JP, Lindsay DS (1996): A review of Neospora caninum and neosporosis. Vet Parasitol, 67, 1-59.
11. Dubey JP, Beattie CP (1988): Toxoplasmosis of animals and man. CRC Press, Inc Boca Raton, Florida.
12. Dumanlı N, Aktaş M, Altay K (2013): Toxoplasmosis, Köpek ve kedilerde Görülen Parazit Hastalıkları, 1095- 1099. In: Özcel MA, İnci A, Köroğlu E, Karaer Z, Eren H, Yukarı BA, Dumanlı N, Aydın L, Yıldırım A, Eds., Veteriner Hekimliğinde Parazit Hastalıkları, Türkiye Parazitoloji Derneği, İzmir.
13. Dumanlı N, Aktaş M, Altay K (2013): Neosporosis, Köpek ve Kedilerde Görülen Parazit Hastalıkları, 1100- 1101. In: Özcel MA, İnci A, Köroğlu E, Karaer Z, Eren H, Yukarı BA, Dumanlı N, Aydın L, Yıldırım A, Eds., Veteriner Hekimliğinde Parazit Hastalıkları, Türkiye Parazitoloji Derneği, İzmir.
14. Georgieva DA, Prelezov PA, Koinarski VTS (2006): Neospora caninum and Neosporosis in animals - a review. Bulg J Vet Med, 9, 1-26.
15. Ghalmi F, China B, Kaidi R, Daube G, Losson B (2008): Detection of Neospora caninum in dog organs using real time PCR systems. Vet Parasitol, 155, 161-167.
16. Gondim LF, McAllister MM, Pitt WC, Zemlicka DE (2004): Coyotes (Canis latrans) are definitive hosts of Neospora caninum. Int J Parasitol, 34, 159-161.
17. İça A, Yıldırım A, Düzlü Ö, İnci A (2006): Kayseri yöresinde Neospora caninum’un seroprevalansı. Türk Parazitol Derg, 30, 92-94.
18. İnci A, Albasan H (2013): Veteriner Hekimliğinde Parazit Hastalıkları, Sığırlarda Görülen Parazit Hastalıkları- Giriş, 47-49. In: Özcel MA, İnci A, Köroğlu E, Karaer Z, Eren H, Yukarı BA, Dumanlı N, Aydın L, Yıldırım A, Eds., Veteriner Hekimliğinde Parazit Hastalıkları, Türkiye Parazitoloji Derneği, İzmir.
19. Kasper DC, Sadeghi K, Prusa AR, Reischer GH, Kratochwill K, Förster-Waldl E, Gerstl N, Hayde M, Pollak A, Herkner KR (2009): Quantitative real-time polymerase chain reaction for the accurate detection of Toxoplasma gondii in amniotic fluid. Diagn Microbiol Infect Dis, 63, 10-15.
20. King JS, Brown GK, Jenkins DJ, Ellis JT, Fleming PJ, Windsor PA, Slapeta J (2012): Oocysts and high seroprevalence of Neospora caninum in dogs living in remote Aboriginal communities and wild dogs in Australia. Vet Parasitol, 187, 85-92.
21. Kul O, Kabakci N, Yildiz K, Ocal N, Kalender H, Ilkme NA (2009): Neospora caninum associated with epidemic abortions in dairy cattle: the first clinical neosporosis report in Turkey. Vet Parasitol, 159, 69-72.
22. Marsh AE, Barr BC, Sverlow K, Ho M, Dubey JP, Conrad PA (1995): Sequence analysis and comparison of ribosomal DNA from bovine Neospora to similar coccidial parasites. J Parasitol, 81, 530-535.
23. Romanelli PR, Freire RL, Vidotto O, Marana ER, Ogawa L, De Paula VS, Garcia JL, Navarro IT (2007): Prevalence of Neospora caninum and Toxoplasma gondii in sheep and dogs from Guarapuava farms, Paraná State, Brazil. Res Vet Sci, 82, 202-207.
24. Silva MS, Uzêda RS, Costa KS, Santos SL, Macedo AC, Abe-Sandes K, Gondim LF (2009): Detection of Hammondia heydorni and related coccidia (Neospora caninum and Toxoplasma gondii) in goats slaughtered in Bahia, Brazil. Vet Parasitol, 162, 156-159.
25. Simsek S, Ütük AE, Babür C, Köroglu E (2006): Seroprevalence of Toxoplasma gondii in dogs in the province of Kocaeli. T Parazitol Derg, 30, 171-174.
26. Wang Q, Jiang W, Chen YJ, Jing ZY (2011): Prevalence of Toxoplasma gondii antibodies and DNA in dogs in Shanghai, China. J Parasitol, 97, 367-369.
27. Williams DJL, Trees AJ (2006): Protecting babies: vaccine strategies to prevent foetopathy in Neospora caninum -infected cattle. Parasite Immunol, 28, 61-67.
28. Yagoob G (2011): Seroprevalence of Neospora caninum in stray dogs. Am J Anim Vet Scies, 6, 100-104,
29. Yıldız K, Kul O, Babur C, Kılıç S, Gazyagcı AN, Çelebi B, Gürcan IS (2009): Seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle ranches with high abortion rate: special emphasis to serologic co-existence with Toxoplasma gondii, Brucella abortus and Listeria monocytogenes. Vet Parasitol, 164, 306-310.