SEKİZ HÜCRELİ FARE EMBRİYOLLARININ DONDURULMA VE ÇÖZDÜRÜLMELERİ

Abstract

: Bu çahşmada 8 Iıücreli fare enıbryolarll1l1l dondurulma, - ı96 C derecede tutulma ve çözdüriilmeleri sonu yaşama kaabiliyetleri in vitro olarak incelenmiştir. Bu amaçla 8 Iıa.ftahk dişi farelere Pregnant mare's Serum Gonodotroplıin (P MSG) 48 saat sonrada Human c/ıorionic Gonadotroplıin (HCG) intra-peritoneal enjekte edilerek süperovulasyon sağlandı. Hormonlar/a uyanlan dişiler erkeklerle çiftleştirilmelerinden sonra gebeliğin ikinci günü sonunda cervical dislokasyonla öldürülen farelerin oviduct ve uteruslannııı anterior dilimlerinden toplanan embriyolar PBl içine ahndılar. Dondurma öncesi altı aşamada içinde son konsantrasyonu 1.5 M Dimethyl su/foxide (DMSO) olacak şekilde DMSO kanştmlan örnekler katkı maddesinin daha rahat etkilemesi için ı5 dakika süreyle oda lSlsll1da tutuldular. Daha sonra 10-20 adet sekiz hücreli emhriyo bir test tüpüne 0.2 ml.P Bi içersinde konuldular. Tüpler ilk etapta -6 oCdereceye kadar soğutuldu ve bu derecede özel jorceps kulla11llarak içersinde buz kristalleri oluşturulduktan sonra da yavaş yavaş (0.3 oC/ dak.) -33 C dereceye kadar donduruldular. -33 C derecedeki tüpler hemen sıvı azota sokulup orada 3 gün süreyle tutuldular. Embriyolarm dondurulmalan R202 / IOIR tipi bir mini dondurucu ile gerçekleştirilmiştir. Çözülmenin sağlanması için tüpler sıvı azottan çıkanldıktan hemen sonra 25-30 C derecedeki su banyosuna sokulup çalkalanddar. Osmolik basmcı azaltmak için embriyolar oda ISlSlnda PBl de yıkanddar ve ufak petride parafinle kapft PBI in içine transfer edildiler. Etüvde 37 C derecede % 5 CO2 li ortamda 48 saat korunan embriyolarll1 gelişmeleri izlendi. Sekiz hücreli 320 embriyonun dondurulup, 3 gün - i96 C derecede tutulmaları ve sonra çözdürülmeleri sonu 240 tanesi kültürde blastosüs! aşamasma gelmiştir.

Keywords

• fare
• sekiz hücreli
• dondurulma ve çözdürülme

References

1. Ankara Üniversitesi- Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi