Research Article
BibTex RIS Cite

ISOLATION OF AEROBIC BACTERIA FROM COW MILKS WITH SUBCLINICAL MASTITIS

Year 2012, Volume: 1 Issue: 2, 65 - 69, 30.08.2012

Abstract




OBJECTIVE: This study was aimed to detect the aerobic bacteria from the cow milks with subclinical mastitis.



METHODS: A total of 125 lactating dairy cows in four dairy farms were examined in terms of mastitis by clinical observations, California mastitis test (CMT), somatic cell counts (SCC) and bacteriological analysis of milk samples. CMT positive-results scored as (+1), (+2) and (+3). SCC were determined by the DeLaval cell counter® (DCC).



RESULTS: There was no evidence of clinical mastitis in dairy cows examined. The CMT results of 499 quarter milk samples from 125 cows; 42 cows negative (33,6%), 83 cows positive (66,4%), 156 milk samples positive (31,3%) and 343 milk samples negative (68,7%). SCC for the milk samples which were scored as CMT (+1), (+2) and (+3), was found to be in the range of 114.120–382.100, 436.000–1.413.200 and 1.879.640–3.882.100 cell/mL, respectively. SCC for CMT negative milk samples was determined in the range of 23.500–241.200 cell/mL. As the results of the bacteriological analysis of 156 milk samples from 83 cows; while microbiological culture were positive in 117 milk samples (75%) from 58 cows (69,9%), 39 milk samples (25%) from 25 cows (30,1%) were negative. A total of 120 bacterial strains isolated from the milk samples were 48 (%41,0) Staphylococcus aureus, 20 (%17,1) coagulase negative staphylococci (CNS), 14 (%12,0) Enterobacter aerogenes, 11 (%9,4) Escherichia coli, 10 (%8,5) Streptococcus spp., 8 (%6,8) Klebsiella pneumoniae, 6 (%5,1) Citrobacter spp. and 3 (%2,6) Bacillus spp.


CONCLUSION: S. aureus is the most fruquently isolated bacterium from the cow milks with subclinical mastitis.


References

  • 1. Savaşan S, Kaya O. Sığır mastitislerinde Gram-pozitif ve Gram-negatif bakterilerin filtrasyon-boyama yöntemi ile çabuk tanısı. Ankara Üniv. Vet. Fak. Derg. 2004; 51: 29–34.
  • 2. Halasa T, Huijps K, Østerås O, Hogeveen H. Economic effects of bovine mastitis and mastitis management: A review. Veterinary Quarterly. 2007; 29(1): 18–31.
  • 3. Akan M. Mastitis patojenlerinde antimikrobiyal direnç. Türkiye Klinikleri J Vet Sci. 2010; 1(1): 44–49.
  • 4. Gürbulak K, Canooğlu E, Abay M, Atabay Ö, Bekyürek T. İneklerde subklinik mastitisin farklı yöntemlerle saptanması. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2009; 15(5): 765–770.
  • 5. Baştan A, Kaymaz M, Fındık M, Erünal N. İneklerde subklinik mastitislerin elektriksel iletkenlik, somatik hücre sayısı ve california mastitis testi ile saptanması. Anakara Üniv Vet Fak Derg. 1997; 44: 1-6
  • 6. İlhan Z, Taşal İ, Sağcan S, Solmaz H. Subklinik mastitisli keçi sütlerinden aerobik bakterilerin izolasyonu. YYU Vet Fak Derg. 2011; 22(2): 89–91.
  • 7. Bradley AJ. Bovine mastitis: An evolving disease. The Vet J. 2002; 164: 116–128.
  • 8. Boynukara B, Gulhan T, Alisarli M, Gurturk K, Solmaz H. Classical enterotoxigenic characteristics of Staphylococcus aureus strains isolated from bovine subclinical mastitis in Van, Turkey. Int J Food Microbiol. 2008; 125: 209–211.
  • 9. Türkyılmaz S, Yıldız Ö, Oryaşın E, Kaynarca S, Bozdoğan B. Molecular identification of bacteria isolated from dairy herds with mastitis. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2010; 16(6): 1025–1032.
  • 10. Ünal N, Yıldırım M. İneklerin süt, meme başı derisi ve burun mukozalarından izole edilen stafilokok türlerinin antibiyotik direnç profilleri. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2010; 16(3): 389–396.
  • 11. Şeker E. Identification of Candida species isolated from bovine mastitic milk and their in vitro hemolytic activity in Western Turkey. Mycopathologia. 2010; 169: 303–308.
  • 12. International Dairy Federation. Laboratory methods for use in mastitis work. Brussels, Belgium. IDF Document 132, 1981.
  • 13. Chaiyotwittayakun A, Aiumlamai S, Chanlun A, Srisupa S. Alternative method for determination of milk somatic cell count in dairy cow. Proceedings, The 15th Congress of FAVA. P17-P18. 27-30 October 2008, Bangkok, Thailand.
  • 14. Quinn PJ, Carter ME, Markey BK, Carter GR (1994). Clinical veterinary microbiology. Spain, Wolfe Publishing. 1994.
  • 15. Koneman EM, Allen SD, Dovell VR, Sommers HM, Winn WC. Color atlas and textbook of diagnostic microbiology. 5th Edition. Philadelphia, JP Lippincott Company. 1997.
  • 16. T.C. Balıkesir Valiliği, Gıda Tarım ve Hayvancılık İl Müdürlüğü. Balıkesir hayvansal üretim.15 Eylül 2010. http://www.balikesirtarim.gov.tr/uretim/hayvansal-uretim.html
  • 17. T.C. Türkiye İstatistik Kurumu Başkanlığı. Süt ürünleri üretim istatistikleri, Nisan 2012. TÜİK Haber Bülteni. Sayı:10839, 12.06.2012. http://www.tuik.gov.tr/PreHaberBultenleri.do?id=10839
  • 18. Rişvanlı A, Kalkan C. Sütçü ineklerde yaş ve ırkın subklinik mastitisli memelerin sütlerindeki somatik hücre sayıları ile mikrobiyolojik izolasyon oranlarına etkisi. YYÜ. Vet Fak Derg. 2002; 13 (1–2): 84–87.
  • 19. Commission Regulation (EC) No: 1662/2006, of 6 November 2006, amending regulation (EC) No 853/2004 of the Europen Parliament and of the Council laying down specific hygiene rules for food of animal origin. Official Journal of the European Union. 18.11.2006; L 320/1–10 http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2006:320:0001:0010:EN:PDF
  • 20. Türk Gıda Kodeksi. Çiğ süt ve Isıl İşlem Görmüş İçme Sütleri Tebliği. (Tebliğ No: 2000/6). Resmi Gazete. 14 Şubat 2000; Sayı: 23964: 27–37. Başbakanlık Basımevi, Ankara.
  • 21. Tel OY, Keskin O, Zonturlu AK, Kaya NBA. Şanlıurfa yöresinde subklinik mastitislerin görülme oranı, aerobik bakteri izolasyonu ve duyarlı antibiyotiklerin belirlenmesi. F Ü Sağ Bil Vet Derg. 2009; 23 (2): 101-106.
  • 22. Muz A, Gülcü HB, Ertaş HB, Kalender H. Mastitisli inek sütlerinden izole edilen mikroorganizmaların identifikasyonları ve antibiyotiklere duyarlılıkları üzerinde bir araştırma. Fırat Univ Sağlık Bil Derg. 1992; 6: 113-121.
  • 23. Türütoğlu H, Ateşoğlu A, Salıkoğlu H, Öztürk M. Marmara bölgesi süt ineklerinde mastitise neden olan aerobik etkenler. Pendik Vet Mikrobiol Derg. 1995; 26: 125-137.
  • 24. Ak S. Trakya yöresinde sığır mastitisinden sorumlu bulaşıcı ve çevresel bakteriyel etkenler ve antibiyotiklere duyarlıkları. İstanbul Univ Vet Fak Derg. 2000; 26 (2): 353-365.
  • 25. Kuyucuoğlu Y, Uçar M. Afyon bölgesi süt ineklerinde subklinik ve klinik mastitislerin görülme oranları ve etkili antibiyotiklerin tespiti. Vet Hek Mikrobiol Derg. 2001; 1: 19-24.
  • 26. Beytut E, Aydın F, Özcan K, Genç O. Kars ili yöresinde mastitislerin patolojik ve bakteriyolojik olarak incelenmesi. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2002; 8(2): 111-122.
  • 27. Gülcü HB, Ertaş HB. Elazığ yöresinde mezbahada kesilen ineklerde mastitisli meme loblarının bakteriyolojik incelenmesi. Turk J Vet Anim Sci. 2004; 28: 91-94.
  • 28. Türütoğlu H, Mudut S, Pehlivanoğlu F. Antibiotic susceptibility and β-lactamase prevalence for staphylococci isolated from bovine mastitic milk samples. Acta Veterinaria (Beograd). 2002; 52 (5-6): 337-344.
  • 29. Abera M, Habte T, Aragaw K, Asmare K, Sheferaw D. Major causes of causes mastitis and associated risk factors in smallholder dairy farms in and around Hawassa, Southern Ethiopia. Trop Anim Health Prod. Published online: 10 January 2012. doi: 10.1007/s11250-011-0055-3.
  • 30. Persson Y, Nyman A-K J, Grönlund-Andersson U. Etiology and antimicrobial susceptibility of udder pathogens from cases of subclinical mastitis in dairy cows in Sweden. Acta Vet Scand. 2011; 53:36. doi: 10.1186/1751-0147-53-36.
  • 31. Fluit AC. Livestock-associated Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Infect. 2012; doi: 10.1111/j.1469-0691.2012.03846.x
  • 32. Saei HD, Ahmadi M, Mardani K, Batavani RA. Molecular typing of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis based on polymorphism of the coagulase gene in the north west of Iran. Vet Microbiol. 2009; 137: 202-206.
  • 33. Ünal N, İstanbulluoğlu E. İnsan ve sığır kökenli Staphylococcus aureus izolatlarının fenotipik ve genotipik özelliklerinin araştırılması. Ankara Vet Fak Derg. 2009; 56: 119-126.
  • 34. Matos JS, White DG, Harmon RJ, Langlois BE. Isolation of Staphylococcus aureus from sites other than the lactating mammary gland. J Dairy Sci. 1991; 74: 1544-1549.
  • 35. Hata E, Kobayashi H, Nakajima H, Shimizu Y, Eguchi M. Epidemiological analysis of Staphylococcus aureus isolated from cows and the environment of a dairy farm in Japan. J Vet Med Sci. 2010; 72(5): 647-652.
  • 36. Taponen S, Simojoki H, Haveri M, Larsen HD, Pyȍrȁlȁ S. Clinical characteristic and persistence of bovine mastitis caused by different species coagulase-negative staphylococci identifed with API or AFLP. Vet Microbiol. 2006; 115: 199-207.
  • 37. Kırkan Ş, Göksoy EÖ, Kaya O. Identification and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus and coagulase negative staphylococci from bovine mastitis in the Aydın region of Turkey. Turk J Vet Anim Sci. 2005; 29: 791-796.
  • 38. Ergün Y, Aslantaş Ö, Doğruer G, Cantekin Z. Hatay ilindeki aile tipi süt sığırcılığı işletmelerinde subklinik mastitislerin epidemiyolojisi. Vet Bil Derg. 2004; 20(4): 25-28.
  • 39. Hogan J, Smith KJ. Coliform mastitis. Vet Res. 2003; 34: 507-519.

SUBKLİNİK MASTİTİSLİ İNEKLERİN SÜTLERİNDEN AEROBİK BAKTERİLERİN İZOLASYONU

Year 2012, Volume: 1 Issue: 2, 65 - 69, 30.08.2012

Abstract




AMAÇ: Bu çalışmada, subklinik mastitisli ineklerin sütlerinden aerobik bakterilerin izolasyonu amaçlandı.

YÖNTEMLER: Dört adet damızlık süt sığırı işletmesine ait laktasyondaki 125 adet inek klinik gözlemler, California mastitis testi (CMT), süt örneklerinin somatik hücre sayısı (SHS) ve konvansiyonel yöntemlere göre bakteriyolojik analizi yapılarak mastitis yönüyle incelendi. CMT pozitif sonuçlar (+1), (+2) ve (+3) şeklinde skorlandı. SHS, DeLaval cell counter® (DCC) cihazı ile belirlendi. BULGULAR: İnceleme sonrası hayvanlarda klinik mastitis bulgusuna rastlanmadı. Yüz yirmi beş adet ineğin meme loblarından alınan toplam 499 süte uygulanan CMT sonucunda; 42 ineğin (%33,6) negatif, 83 ineğin (%66,4) en az bir meme lobunun pozitif, 156 süt örneğinin (%31,3) pozitif ve 343 süt örneğinin (%68,7) negatif olduğu tespit edildi. CMT (+1), (+2) ve (+3) olarak skorlanan süt örneklerinin SHS aralıkları sırasıyla 114.120–382.100, 436.000–1.413.200 ve 1.879.640–3.882.100 hücre/ml şeklinde belirlendi. CMT negatif meme loblarından alınan süt örneklerinin SHS aralığı ise 23.500–241.200 hücre/ml bulundu. Bakteriyolojik analizi yapılan 83 ineğe ait 156 süt örneğinin, 58 ineğe (%69,9) ait 117 süt örneğinden (%75) mikroorganizma izole edilirken, 25 ineğe (%30,1) ait 39 süt örneğinde (%25) herhangi bir üreme gözlenmedi. Kültür pozitif örneklerin 48’inden (%41,0) Staphylococcus aureus, 20’sinden (%17,1) Koagulaz Negatif Stafilokok (KNS), 14’ünden (%12,0) Enterobacter aerogenes, 11’inden (%9,4) Escherichia coli, 10’undan (%8,5) Streptococcus spp., 8’inden (%6,8) Klebsiella pneumoniae, 6’sından (%5,1) Citrobacter spp. ve 3’ünden (%2,6) Bacillus spp. olmak üzere toplam 120 adet aerobik bakteri izole ve identifiye edildi.


SONUÇ: Subklinik mastitisli sığır sütlerinden en yüksek oranda S. aureus izole edildi.


References

  • 1. Savaşan S, Kaya O. Sığır mastitislerinde Gram-pozitif ve Gram-negatif bakterilerin filtrasyon-boyama yöntemi ile çabuk tanısı. Ankara Üniv. Vet. Fak. Derg. 2004; 51: 29–34.
  • 2. Halasa T, Huijps K, Østerås O, Hogeveen H. Economic effects of bovine mastitis and mastitis management: A review. Veterinary Quarterly. 2007; 29(1): 18–31.
  • 3. Akan M. Mastitis patojenlerinde antimikrobiyal direnç. Türkiye Klinikleri J Vet Sci. 2010; 1(1): 44–49.
  • 4. Gürbulak K, Canooğlu E, Abay M, Atabay Ö, Bekyürek T. İneklerde subklinik mastitisin farklı yöntemlerle saptanması. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2009; 15(5): 765–770.
  • 5. Baştan A, Kaymaz M, Fındık M, Erünal N. İneklerde subklinik mastitislerin elektriksel iletkenlik, somatik hücre sayısı ve california mastitis testi ile saptanması. Anakara Üniv Vet Fak Derg. 1997; 44: 1-6
  • 6. İlhan Z, Taşal İ, Sağcan S, Solmaz H. Subklinik mastitisli keçi sütlerinden aerobik bakterilerin izolasyonu. YYU Vet Fak Derg. 2011; 22(2): 89–91.
  • 7. Bradley AJ. Bovine mastitis: An evolving disease. The Vet J. 2002; 164: 116–128.
  • 8. Boynukara B, Gulhan T, Alisarli M, Gurturk K, Solmaz H. Classical enterotoxigenic characteristics of Staphylococcus aureus strains isolated from bovine subclinical mastitis in Van, Turkey. Int J Food Microbiol. 2008; 125: 209–211.
  • 9. Türkyılmaz S, Yıldız Ö, Oryaşın E, Kaynarca S, Bozdoğan B. Molecular identification of bacteria isolated from dairy herds with mastitis. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2010; 16(6): 1025–1032.
  • 10. Ünal N, Yıldırım M. İneklerin süt, meme başı derisi ve burun mukozalarından izole edilen stafilokok türlerinin antibiyotik direnç profilleri. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2010; 16(3): 389–396.
  • 11. Şeker E. Identification of Candida species isolated from bovine mastitic milk and their in vitro hemolytic activity in Western Turkey. Mycopathologia. 2010; 169: 303–308.
  • 12. International Dairy Federation. Laboratory methods for use in mastitis work. Brussels, Belgium. IDF Document 132, 1981.
  • 13. Chaiyotwittayakun A, Aiumlamai S, Chanlun A, Srisupa S. Alternative method for determination of milk somatic cell count in dairy cow. Proceedings, The 15th Congress of FAVA. P17-P18. 27-30 October 2008, Bangkok, Thailand.
  • 14. Quinn PJ, Carter ME, Markey BK, Carter GR (1994). Clinical veterinary microbiology. Spain, Wolfe Publishing. 1994.
  • 15. Koneman EM, Allen SD, Dovell VR, Sommers HM, Winn WC. Color atlas and textbook of diagnostic microbiology. 5th Edition. Philadelphia, JP Lippincott Company. 1997.
  • 16. T.C. Balıkesir Valiliği, Gıda Tarım ve Hayvancılık İl Müdürlüğü. Balıkesir hayvansal üretim.15 Eylül 2010. http://www.balikesirtarim.gov.tr/uretim/hayvansal-uretim.html
  • 17. T.C. Türkiye İstatistik Kurumu Başkanlığı. Süt ürünleri üretim istatistikleri, Nisan 2012. TÜİK Haber Bülteni. Sayı:10839, 12.06.2012. http://www.tuik.gov.tr/PreHaberBultenleri.do?id=10839
  • 18. Rişvanlı A, Kalkan C. Sütçü ineklerde yaş ve ırkın subklinik mastitisli memelerin sütlerindeki somatik hücre sayıları ile mikrobiyolojik izolasyon oranlarına etkisi. YYÜ. Vet Fak Derg. 2002; 13 (1–2): 84–87.
  • 19. Commission Regulation (EC) No: 1662/2006, of 6 November 2006, amending regulation (EC) No 853/2004 of the Europen Parliament and of the Council laying down specific hygiene rules for food of animal origin. Official Journal of the European Union. 18.11.2006; L 320/1–10 http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2006:320:0001:0010:EN:PDF
  • 20. Türk Gıda Kodeksi. Çiğ süt ve Isıl İşlem Görmüş İçme Sütleri Tebliği. (Tebliğ No: 2000/6). Resmi Gazete. 14 Şubat 2000; Sayı: 23964: 27–37. Başbakanlık Basımevi, Ankara.
  • 21. Tel OY, Keskin O, Zonturlu AK, Kaya NBA. Şanlıurfa yöresinde subklinik mastitislerin görülme oranı, aerobik bakteri izolasyonu ve duyarlı antibiyotiklerin belirlenmesi. F Ü Sağ Bil Vet Derg. 2009; 23 (2): 101-106.
  • 22. Muz A, Gülcü HB, Ertaş HB, Kalender H. Mastitisli inek sütlerinden izole edilen mikroorganizmaların identifikasyonları ve antibiyotiklere duyarlılıkları üzerinde bir araştırma. Fırat Univ Sağlık Bil Derg. 1992; 6: 113-121.
  • 23. Türütoğlu H, Ateşoğlu A, Salıkoğlu H, Öztürk M. Marmara bölgesi süt ineklerinde mastitise neden olan aerobik etkenler. Pendik Vet Mikrobiol Derg. 1995; 26: 125-137.
  • 24. Ak S. Trakya yöresinde sığır mastitisinden sorumlu bulaşıcı ve çevresel bakteriyel etkenler ve antibiyotiklere duyarlıkları. İstanbul Univ Vet Fak Derg. 2000; 26 (2): 353-365.
  • 25. Kuyucuoğlu Y, Uçar M. Afyon bölgesi süt ineklerinde subklinik ve klinik mastitislerin görülme oranları ve etkili antibiyotiklerin tespiti. Vet Hek Mikrobiol Derg. 2001; 1: 19-24.
  • 26. Beytut E, Aydın F, Özcan K, Genç O. Kars ili yöresinde mastitislerin patolojik ve bakteriyolojik olarak incelenmesi. Kafkas Univ Vet Fak Derg. 2002; 8(2): 111-122.
  • 27. Gülcü HB, Ertaş HB. Elazığ yöresinde mezbahada kesilen ineklerde mastitisli meme loblarının bakteriyolojik incelenmesi. Turk J Vet Anim Sci. 2004; 28: 91-94.
  • 28. Türütoğlu H, Mudut S, Pehlivanoğlu F. Antibiotic susceptibility and β-lactamase prevalence for staphylococci isolated from bovine mastitic milk samples. Acta Veterinaria (Beograd). 2002; 52 (5-6): 337-344.
  • 29. Abera M, Habte T, Aragaw K, Asmare K, Sheferaw D. Major causes of causes mastitis and associated risk factors in smallholder dairy farms in and around Hawassa, Southern Ethiopia. Trop Anim Health Prod. Published online: 10 January 2012. doi: 10.1007/s11250-011-0055-3.
  • 30. Persson Y, Nyman A-K J, Grönlund-Andersson U. Etiology and antimicrobial susceptibility of udder pathogens from cases of subclinical mastitis in dairy cows in Sweden. Acta Vet Scand. 2011; 53:36. doi: 10.1186/1751-0147-53-36.
  • 31. Fluit AC. Livestock-associated Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Infect. 2012; doi: 10.1111/j.1469-0691.2012.03846.x
  • 32. Saei HD, Ahmadi M, Mardani K, Batavani RA. Molecular typing of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis based on polymorphism of the coagulase gene in the north west of Iran. Vet Microbiol. 2009; 137: 202-206.
  • 33. Ünal N, İstanbulluoğlu E. İnsan ve sığır kökenli Staphylococcus aureus izolatlarının fenotipik ve genotipik özelliklerinin araştırılması. Ankara Vet Fak Derg. 2009; 56: 119-126.
  • 34. Matos JS, White DG, Harmon RJ, Langlois BE. Isolation of Staphylococcus aureus from sites other than the lactating mammary gland. J Dairy Sci. 1991; 74: 1544-1549.
  • 35. Hata E, Kobayashi H, Nakajima H, Shimizu Y, Eguchi M. Epidemiological analysis of Staphylococcus aureus isolated from cows and the environment of a dairy farm in Japan. J Vet Med Sci. 2010; 72(5): 647-652.
  • 36. Taponen S, Simojoki H, Haveri M, Larsen HD, Pyȍrȁlȁ S. Clinical characteristic and persistence of bovine mastitis caused by different species coagulase-negative staphylococci identifed with API or AFLP. Vet Microbiol. 2006; 115: 199-207.
  • 37. Kırkan Ş, Göksoy EÖ, Kaya O. Identification and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus and coagulase negative staphylococci from bovine mastitis in the Aydın region of Turkey. Turk J Vet Anim Sci. 2005; 29: 791-796.
  • 38. Ergün Y, Aslantaş Ö, Doğruer G, Cantekin Z. Hatay ilindeki aile tipi süt sığırcılığı işletmelerinde subklinik mastitislerin epidemiyolojisi. Vet Bil Derg. 2004; 20(4): 25-28.
  • 39. Hogan J, Smith KJ. Coliform mastitis. Vet Res. 2003; 34: 507-519.
There are 39 citations in total.

Details

Primary Language Turkish
Journal Section Articles
Authors

Yavuz Çokal

Ramazan Konuş This is me

Publication Date August 30, 2012
Submission Date June 2, 2012
Published in Issue Year 2012 Volume: 1 Issue: 2

Cite

APA Çokal, Y., & Konuş, R. (2012). SUBKLİNİK MASTİTİSLİ İNEKLERİN SÜTLERİNDEN AEROBİK BAKTERİLERİN İZOLASYONU. Balıkesir Sağlık Bilimleri Dergisi, 1(2), 65-69.

International Peer Reviewed Journal

The journal adopts Open Access Policy and does not request article proccessing charge (APC), article publishing charge or any other charges.

Creative Commons License

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.