Türkiye’de Bir Yaban Domuzunda Akciğer Kıl Kurdu Metastrongylus pudentodectus’un (Metastrongylidae: Nematoda) DNA Barkodlaması ve Filogenetik Karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada Kastamonu’nun merkez ilçesinde bir yaban domuzunun nekropsi analizi sonucunda akciğerlerinde belirlenen ve morfolojik identifikasyonla Metastrongylus pudentodectus olarak teşhis edilen akciğer kıl kurtlarının mitokondrial DNA cytochrome oxidase subunit 1 (COX1) gen bölgesi moleküler olarak karakterize edilmiş ve filogenetik ilişkileri araştırılmıştır. DNA barkodlama analizlerine 10 adet M. pudontedectus izolatı dahil edilmiş olup genomik DNA izolasyonu sonrası COX1 gen bölgesi tasarlanan primerlerle çoğaltılmış ve sekans analizlerine tabii tutulmuştur. Sekans analizleri sonucu morfolojik tür konfirmasyonları sağlanmıştır. COX1 gen bölgesi sekans analizleri sonucunda aralarında %0.4 genetik farklılık belirlenen 2 haplotip belirlenmiştir. Filogenetik analizlerde her iki haplotipe ait izolatların GenBank veri tabanındaki referans ve çeşitli ülkelerden bildirilmiş M. pudendotectus izolatlarıyla birlikte monofiletik küme oluşturduğu belirlenmiştir. Metastrongylus pudendotectus izolatlarının ayrıca aynı soydaki M. apri ve M. salmi ile ortalama %10.8 ve %12.5, Dictyocaulus türleriyle ortalama %15.0 ve Syngamus trachea ile de %15.8 genetik farklılık gösterdiği tespit edilmiştir. Bu çalışma ile Türkiye’de yaban domuzlarında enfeksiyona yol açan akciğer kıl kurdu M. pudendotectus için ilk filogenetik karakterizasyon verileri sağlanmıştır. Elde edilen sonuçlar domuzlarda akciğer kıl kurtlarının moleküler epidemiyolojisine katkı sağlamıştır.

Keywords

• Akciğer kıl kurdu
• filogenetik karakterizasyon
• Metastrongylus pudendotectus
• Türkiye
• yaban domuzu

DNA Barcoding and Phylogenetic Characterization of the Lungworm Metastrongylus pudendotectus (Metastrongylidae: Nematoda) Detected in a Wild Boar in Turkey

Abstract

In this study, lungworms detected in the necropsy analyses of a wild boar in central district of Kastamonu and diagnosed as Metastrongylus pudendotectus by morphological identification were molecularly characterized using mitochondrial cytochrome oxidase subunit 1 (COX1) gene sequences and their phylogenetic relationships were investigated. Totally 10 M. pudendotectus isolates were included in DNA barcoding analyses. COX1 gene region was amplified with newly designed primers and subjected to the sequence analyses after genomic DNA isolations. Morphological species identifications were confirmed by sequence analyses results. Two haplotypes with 0.4% genetic difference were determined by sequence analyses of the COX1 gene region. In paleogenetic analyses, both haplotypes were placed into a monophyletic cluster with the reference and published isolates of M. pudendotectus from several countries in GenBank. Furthermore M. pudendotectus isolates showed genetic differences of 10.8% and 12.5% with M. apri and M. salmi in the same genus, 15.0% with Dictyocaulus species and 15.8% with Syngamus trachea. The first phylogenetic characterization data on the lungworm M. pudendotectus infecting wild boars in Turkey is provided with this study. The obtained results also contribute to molecular epidemiology of lungworms in boars.

Keywords

• Lungworm
• Metastrongylus pudendotectus
• mitochondrial DNA
• phylogenetic characterization
• Turkey
• wild boar

References

1. Aypak S, Aysul N, Bakırcı S, Karagenç T. Aydın ilinde avlanan yaban domuzlarında Trichinella sp. varlığının araştırılması. Animal Health Prod and Hyg 2013; 2(2): 203-5.
2. Barutzki D, Schoierer R, Gothe R. Helminth infections in wild boars in enclosures in southern Germany: species spectrum and infection frequency. Tierarztl Prax 1990; 18(5): 529-34.
3. Chabaud AG, Gretillat S. Metastrongylus madagascariensis, a 4th species of pulmonary strongyle infesting the domestic swine. Ann Parasitol Hum Comp 1956; 31(5-6): 572-7.
4. Conole JC, Chilton NB, Järvis T, Gasser RB. Intraspecific and interspecific variation in the second internal transcribed spacer sequence for Metastrongylus (Nematoda:Metastrongyloidea) detected by high resolution PCR-linked restriction fragment length polymorphism. Int J Parasitol 1999; 29(12): 1935-40.
5. da Silva D, Müller G. Parasites of the respiratory tract of Sus scrofa scrofa (wild boar) from commercial breeder in southern Brazil and its relationship with Ascaris suum. Parasitol Res 2013; 112(3): 1353-6.
6. Darabus G, Hora FS, Mederle N, Morariu S, Ilie M, Suici T, Imre M. Prevalence and intensity of digestive and pulmonary parasites in wild boars in Romania. J Zoo Wildl Med 2019; 50(1): 270-3.
7. de Sousa B, de Carvalho M, Fazendeiro I, Castro RF, Afonso-Roque M. Contribution for the knowledge of wild boar (Sus scrofa L.) helmintic fauna in Tapana Nacional de Mafra, an enclosure hountig area. Res Rev Parasitol 2004; 64: 3-7.
8. Dodangeh S, Azami D, Daryani A, Gholami S, Sharif M, Mobedi I, Sarvi S, Soleymani E, Rahimi MT, Pirestani M, Gohardehi S, Bastani R. Parasitic helminths in wild boars (Sus scrofa) in Mazandaran Province, Northern Iran. Iran J Parasitol 2018; 13(3): 416-22.

9. Fernandez-de-Mera IG, Gortazar C, Vicente J, Hofle U, Fierro Y. Wild boar helminths: risks in animal translocations. Vet Parasitol 2003; 115(4): 335-41.
10. Gasso D, Rossi L, Mentaberre G, Casas E, Velarde R, Nosal P, Serrano E, Segales J, Fernandez-Llario P, Feliu C. An identification key for the five most common species of Metastrongylus. Parasitol Res 2014; 113(9): 3495-500.
11. Guindon S, Gascuel O. A simple, fast, and accurate algorithm to estimate large phylogenies by maximum likelihood. Syst Biol 2003; 52(5): 696-704.
12. Humbert JF, Henry C. Studies on the prevalence and the transmission of lung and stomach nematodes of the wild boar (Sus scrofa) in France. J Wildl Dis 1989; 25(3): 335-41.
13. Kesik HK, Kilinc SG, Celik F, Simsek S, Ahmed H. A case-study of the molecular diagnosis of Echinococcus multilocularis in wild boar with comments on its public health significance in Turkey. J Parasitol 2020; 106(6): 730-4.
14. Kimura M. A simple method for estimating evolutionary rates of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences. J Mol Evol 1980; 16(2): 111-20.
15. Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets. Mol Biol Evol 2016; 33(7): 1870-4.
16. Leignel V, Humbert JF, Elard L. Study by ribosomal DNA ITS 2 sequencing and RAPD analysis on the systematics of four Metastrongylus species (Nematoda: Metastrongyloidea). J Parasitol 1997; 83(4): 606-11.
17. Li K, Luo H, Zhang H, Lan Y, Han Z, Shahzad M, Wang X, Qiu G, Huang S, Jiang W, Li J. First report of Metastrongylus pudendotectus by the genetic characterization of mitochondria genome of cox1 in pigs from Tibet, China. Vet Parasitol 2016; 223: 91-5.
18. Librado P, Rozas J. DnaSP v5: A software for comprehensive analysis of DNA polymorphism data. J Bioinform. 2009; 25(11): 1451-2.
19. Mansouri M, Sarkari B, Mowlavi GR. Helminth parasites of wild boars, Iran. J Parasitol 2016; 11(3): 377-82.
20. Marruchella G, Paoletti B, Speranza R, Di Guardo G. Fatal bronchopneumonia in a Metastrongylus elongatus and Porcine circovirus type 2 co-infected pig. Res Vet Sci 2012; 93(1): 310-2.
21. Merdivenci A. Son 30 yıl (1952-1982) içinde Türkiye’de varlığını ilk kez bildirdiğimiz parazitler. Turk Mikrobiyol Cem Derg 1983; 13: 23-37.
22. Merdivenci A. Türkiye’nin helmintolojik coğrafyası. Unat EK, Yaşarol Ş, Merdivenci A. eds. In: Türkiye’nin Parazitolojik Coğrafyası. İzmir; Ege Üniversitesi Matbaası, 1965; ss: 55-113.
23. Panayotova-Pencheva M, Dakova V. Studies on the gastrointestinal and lung parasite fauna of wild boars (Sus scrofa scrofa L.) from Bulgaria. Ann Parasitol 2018; 64(4): 379-84.
24. Poglayen G, Marchesi B, Dall'Oglio G, Barlozzari G, Galuppi R, Morandi B. Lung parasites of the genus Metastrongylus Molin, 1861 (Nematoda: Metastrongilidae) in wild boar (Sus scrofa L., 1758) in Central-Italy: An eco-epidemiological study. Vet Parasitol 2016; 217: 45-52.
25. Senlik B, Cirak VY, Girisgin O, Akyol CV. Helminth infections of wild boars (Sus scrofa) in the Bursa province of Turkey. J Helminthol 2011; 85(4): 404-8.
26. Spieler N, Schnyder M. Lungworms (Metastrongylus spp.) and intestinal parasitic stages of two separated Swiss wild boar populations north and south of the Alps: Similar parasite spectrum with regional idiosyncrasies. Int J Parasitol Parasites Wildl 2021; 14(2021): 202-10.