Marek Hastalığına Karşı Cell-Associated Aşı Üretimi Üzerine Araştırmalar

Year 1995, Volume: 8 Issue: 1, 100 - 126, 01.12.1995

Ragıp Bayraktar Csab Dren Salih Çıçek Canan Tayhanı Fethiye Çöven

Abstract

Bu araştırmada CEF-Chicken Embryo Fibroblast doku kültürü hücrelerinde
cell-associated SB-1 ve HTV, FC-126 Marek aşı suşları ile aşı üretilip, kanatlıların
bu hastalığına karşı koruyucu olarak kullanılması amaçlanmıştır .
CEF hücreleri standart metodla ra göre 10-11 günlük SPF civciv
embriyolarından hazırlandı. Hücreler %4 yeni doğmuş buzağı serumu, %10
TPB, antibiyotik ve antimiketik ilaveli MEM mediumda üretildi.
Manolayer kültürler 24-48 saat rolling şişelerde in ku be edildi, daha sonra bu
1°CEF hücrelerin ikinci pasajı yapıldı , (2°CEF). Bu pasajın sonunda meydana
gelen manolayer kültürlerde SB-1 veya FC-126 Marek aşı suşlarından biri
tarafından enfekte edilip hücrelertekrar 1°CEF'te olduğu gibi tamamen sitopatik
efekt görülene kadar rolling inkubatörde (yaklaşık 48 saat) inkübe edildi. Virus
tarafından CPE-Cytopathic Effect tamamen meydana getirildikten sonra doku
kültürü mediumu atılıp , hücreler usulüne uygun olarak toplandı, toplanan hücreler
MEM ile %15 oranında hazırlanmış DMSO-Dimethyl sulphoxide içine alınıp
sayıldı , her ml' de 2x1 07 hücre olacak şekilde aynı solüsyonla süspansiyon yapılıp
ampullere konan aşılar -196°C'de sıvı nitrojen içinde saklanmakta ve sevk
edilmektedir. Her üretilen rekoltun sonunda virusun titresi tayin edilir ve sterilite
testleride yapılır

Keywords

Marek, Cell-Associated, Marek Aşı Suşu, Ragıp BAYRAKTAR, Csab DREN, Salih ÇİÇEK, Canan TAYHANİ, Fethiye ÇÖVEN, 1995, Etlik Veteriner Mİkrobiyoloji Dergisi

The study on cell-associoted vaccine production against to Marek's disease.

Abstract

The study on cell associated vaccine production against to Marek's disease.
In this research; Vaccine production against to MAREK disease had been
aimed by the serotype-2 SB-1 and serotype-3 THV, FC-126 Marek cell-associated
vaccine strains. Primary chicken embryo fibrablast tissue culture cellsCEF
is prepared from SPF eggs fumigated upon receipt at the laboratary and
incubated to 10-11 days by the standart method. The CEF is grown in Eagle's
minimum essential medium-MEM which is supplemented with 4% sterile new
born calf sera, 10% TPB, antibiotics and antimycotic. They are incubated at
37°C in rolling cultura system until the complete manolayer is developed. The
complete manolayer is infected with serotype-2 SB-1 or serotype-3 THV, FC-
126 Marek vaccine strains. CEF are incubated about 48 hours until diffuse
cytopathic effect-CPE develop. After second passage is done in the same position.
When the 15% DMSO-Dimethyl sulphoxide is added as a preservative
and they are distributed to ampules. Cells are frozen and stored in -196°C liquid
nitrogen. After a sample of the vaccnie is tested for sterility and virus content.

References

• BAXENDALE, B. 1971: Studies of Three Avian Pox Viruses and The Development of on lmproved Fowl Pox Vaccine. Vet.Rec. 88: 5-1 O.
• BUSCAGLIU, C., BANKOWSKI, R.A., MIERS, L. 1984: Cell Culture Virus neutralization Test and Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay for Evaluation of lmmunity in Chickens Against Fowlpox. Avian Dis. 29: 672-680.
• CUNNIGHAM, C.H. 1973: A Laboratory Guide in Virology, 7.th Ed. Burgess, Minneapolis. 80-82.
• DA MASSA, A.J. 1966: Extrinsic Transmission of Avian Poxviruses. Avi an Dis. 1 O: 57-66.
• DANNER, K., HERLYN, M., GERBERMANN, H., MAYR, A. 1975: Perorale lmmunisierung Gegen Pocken. Zbi.Vet.Med. 22: 274-284.
• EL-ZEINE, A., NEHME, S., GHORAIB, V., HASBANI, S .. TOTH, B. 1974: Preparation of Fowl Pox Vaccine on Chicken -Embryo- Dermis Cell Culture. Avian dis. 18: 495-506.
• GELENCZEI, E.F. and H.N. LASHLER. 1968: Propogation of Avian Poxvirus on Tisue Culture. Avian Dis. 12: 142-150.
• GÜRSOY, N. 1987: Tavukçulukta Temel Bilgiler ve önemli Hastalıklar. Difteri-Çiçek Hastalığı. 1.Baskı. 88-90.
• GÜVEN, S., SARISA YlN, F., NADAS, Ü.G., DEMiRÖZÜ, K. 1983: DifteriÇiçek Hastalığı. Kanatlı Hayvanların infekisyon Hastalıkları ve Laboratuvar Teşh i s Yöntemleri. Pendik Vet.Kont.Arş.Enst. Yayın No:7. 100-107.
• HOFSTAD, M., H. JOHN BARNERS, B. W. CALNEK and Et. Al. 1984: Fowl Pox Disease. Disease of Poultry, 8.th Edition. 524-534.
• JOHNSON, R.H., VAUGHAN, R. 1962: Production and Use of Fowl Pox Vaccine in Nigeria. Bu ll. Epiz. Dis. Afr. 10:441-450.
• MAYR, A.1963: Propogation of Avian Pox Virus on CEF. Beri. Muench Tieraerztl Wochenschr. 76: 316-324.
• MAYR, A., DANNER, K. 1975: Orallmmunization Against Pox. Studies on Fowl Pox asa Model. Develop. Biol. Standard ., 33:249-259.
• MENASCET, 1. , NARDELLI, L. 1964: A Comparative Method For Delermination of Virulence of Strains of Fowl Pox Virus. (Translation) Veterinaria ltalian. XV: 177-189.
• MOCKETT, A.P.A., SOUTHEE, D.J., TOMLEY, F.M., DEUTHER, A. 1987: Fowl Pox Virus: ıt's Structural Proteins and lmmunogens and the Detection of Viral Spesific Antibodies by ELI SA Avian Path. 16: 493-504. ·
• SICCARDI, F.J. 1974: The Addition of Fowl Pox and Pigeon Pox Vaccine to Marek's Vaccine For Broilers. Avian Dis. 19: 362-365.