Papatyadan (Matricaria chamomilla L.) Lipaz Enziminin Saflaştırılması ve Çeşitli Taşıyıcılara İmmobilize Edilmesi
Abstract
Bu çalışmada, Giresun İli ve çevresinde bol miktarda yetişen papatyadan (Matricaria chamomilla L.) lipaz enzimi ilk defa saflaştırıldı ve kinetik özellikleri incelendi. Lipaz esteraz aktivitesi gösteren homojenizatın % 70’lik (NH4)2SO4 kesiti elde edildi. Dializden sonra bu kesit DEAE-selüloz kolonlara uygulanarak lipaz enzimi 26 kat saflaştırıldı. Saflaştırma işlemlerinde protein miktarı Lowry ve E280/E260 Warburg yöntemlerine göre, lipaz esteraz aktivitesi ise Erlanson yöntemine göre tayin edildi. SDS-PAGE elektroforezi ile elde edilen saflaştırılmış enzimin molekül ağırlığının 30 kDa olduğu bulundu. Optimum pH ve sıcaklık değerleri belirlendi. Papatyadan saflaştırılan lipazın optimum pH’sının 9, optimum sıcaklığının 50 °C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendiğinde, lipazın ilgisinin en çok p-nitrofenil palmitatta olduğu ve bu substrata karşı Km ve Vmax değerlerinin sırasıyla 0,2899 mM ve 144,93 Ünite olduğu saptandı.Ayrıca, papatyadan saflaştırılan lipaz enzimi çeşitli taşıyıcılar üzerine adsorpsiyon, kovalent ve iyonik bağlama yöntemleri ile immobilize edildi. İmmobilize edilmiş papatya lipazının optimum pH, optimum sıcaklık gibi kinetik özellikleri de incelendi.
Keywords
Papatya (Matricaria chamomilla L.),Lipaz,Saflaştırma,İmmobilizasyon
References
- Abdou, M. A. (2003). Purification and partial characterization of psychrotrophiz Serratia marcescens lipase. Journal of Dairy Science, 86, 127-132.
- Abigor, D. R., Opute, F. I., Opoku, A. R., Osagie, A. U.(1985). Partial purification and some properties of the lipase present in oil palm (Elaeis guineensis) mesocarp. Journal of the Science of Food and Agriculture, 36, 599-606.
- Baytop A., 1996, Farmasötik Botanik Ders Kitabı, İstanbul Üniversitesi Eczacılık Fakültesi. Üniversite Yayın No:3637, Eczacılık Fakültesi Yayın No:58, 315s.
- Beisson, F., Gardies, A. M., Teissere, M., Ferte, N., Noat, G. (1997). An esterase neosynthesized in post-germinated sunflower seeds is related to a new family of lipolytic enzymes. Plant Physiology and Biochemistry, 35, 761-765.
- Bhardwaj, K., Raju, A., Rajasekharan, R. (2001). Identification, purification, and characterization of a thermally stable lipase from rice bran. A new member of the (phospho) lipase family. Plant Physiology, 127, 1728-1738.
- Bilgin Sökmen, B. (2005). Kayısı (Armeniaca vulgaris Lam.) tohumlarından lipazın saflaştırılması ve çeşitli taşıyıcılara immobilize edilmesi. Doktora Tezi, İstanbul Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, İstanbul.
- Dong, H., Gao, S., Han, S., Cao, S. (1999). Purification and characterization of a Pseudomonas sp. lipase and its properties in non-aqueous media. Biotechnology and Applied Biochemistry, 30, 251-256.
- Erlanson, C. (1970). p-Nitrophenyl acetate as a substrate for a carboxyl-ester hydrolase in pancreatic juice and intestinal content. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 5, 333-336.
- Fuciños, P., Abadin, C. M., Sanromán, A., Longo, M. A., Pastrana, L., Rúa, M. L. (2005). Identification of extracellular lipases/esterases produced by Thermus thermophilus HB27: Partial purification and preliminary biochemical characterization. Journal of Biotechnology, 117, 233-241.
- Hadi, M. R. H. S., Darz, M. T., Ghandehari, Z., Riazi, G. (2011). Effects of vermicompost and amino acids on the flower yield and essential oil production from Matricaria chamomile L. Journal of Medicinal Plants Research, 5(23), 5611-5617.
