Preparatif HPLC Yöntemiyle Yüksek Saflıkta Alfa Amanitin Saflaştırılması

Abstract

Amaç: Alfa amanitin mevcut yöntemlerle ancak %90 civarında saflık oranında saflaştırılabilmektedir. Bu araştırmada yüksek saflıkta alfa amanitin elde etmek için preparatif HPLC kullanılarak uygulanan yöntemin tanımlanması amaçlanmıştır. Metod: Amanita phalloides mantarları toplandı, ekstrakte edildi, 2 defa preparatif HPLC ile saflaştırma işlemi uygulandı. Toksinin doğrulaması analitik HPLC’ deki tutulma zamanı ve ultraviyole spektrumu karşılaştırılması yöntemleriyle yapıldı. Bulgular: 1. saflaştırma işlemi sonrasında elde edilen alfa amanitin saflık oranı %93 (±1,24) olarak bulundu. 2. saflaştırma işlemi sonrasında elde edilen alfa amanitin saflık oranı %99,8 (±0,26) olarak bulundu. Elde edilen toksin ile standardın UV spektrumlarında her ikisinde de 303 nm’de maksimum, 263 nm’de minimum absorbans verdiği ve spektrum yapısının aynı olduğu görüldü. Sonuç: Tanımladığımız bu yöntemle, >%99 saflıkta alfa amanitinin uygun maliyetle elde edilmesi mümkündür

Keywords

• Alfa amanitin, Preparatif HPLC, Saflaştırma

References

1. Bresinsky A, Besl H. A Colour Atlas of Poisonous Fungi. London: Wolf Publishing, 1990; 24-9.
2. Mat A. Türkiye’de mantar zehirlenmeleri ve zehirli mantarlar. İstanbul: Nobel Yayınları, 2000; 15-63.
3. Işıloğlu M, Gücin F, Mat A. Kasım 1994’te İstanbul’da meydana gelen mantar zehirlenmeleri. Ekoloji- Çevre Dergisi 1995;14(4):22-8.
4. Vetter J. Toxins of Amanita Phalloides. Toxicon 1998;36(1):13-24.
5. Wieland T. [Structure and mode of action of the amatoxins]. [Article in German]. Naturwissenschaften. 1972;59(6):225-31.
6. Gong XQ, Nedialkov YA, Burton ZF. Alpha-amanitin blocks translocation by human RNA polymerase II. J Biol Chem 2004;279(26):27422-7.
7. Faulstich H, Talas A, Wellhöner HH. Toxicokinetics of labeled amatoxins in the dog. Arch Toxicol 1985;56(3):190-4.
8. Buku A, Campadelli-Fiume G, Fiume L, Wieland T. Inhibitory effect of naturally occurring and chemically modified amatoxins on RNA polymerase of rat liver nuclei. FEBS Lett 1971;14(1):42-4.

9. Zhao J, Cao M, Zhang J, Sun Q, Chen Q, Yang ZR. Pathological effects of the mushroom toxin alpha- amanitin on BALB/c mice. Peptides 2006;27(12):3047-52.
10. Wieland T, Wieland O. Chemistry and toxicology of the toxins of Amanita phalloides: Pharmacol Rev 1959;11(1):87-107.
11. Mcknight TA, Mcknight KB, Skeels MC. Amatoxin and phallotoxin concentration in amanita bisporigera spores. Mycologia 2010;102(4):763-5.
12. Zhang P, Chen Z, Hu J, Wei B, Zhang Z, Hu W. Production and characterization of Amanitin toxins from a pure culture of Amanita exitialis. FEMS Microbiol Lett 2005;252(2):223-8. Epub 2005 Sep 15.
13. Brüggemann O, Meder M, Freitag R. Analysis of amatoxins alpha-amanitin and beta-amanitin in toadstool extracts and body fluids by capillary zone electrophoresis with photodiode array detection. J Chromatogr A 1996;744(1-2):167-76.