Hemoglobin Varyantlarının Ölçümünde Interlab-G26 Elektroforezi ve Primus Ultra2 HPLC Yöntemlerinin Karşılaştırılması

Year 2016, Volume: 7 Issue: 26, 0 - 0, 27.07.2016

Oğuzhan Özcan Zafer Yönden Özgür Yıldırım Kurtgöz Ahmet Burak Gürpınar Sedat Motor

https://doi.org/10.17944/mkutfd.46647

Abstract

Amaç: Herediter hemoglobinopatiler genetik olarak sık görülen hastalıklar olup dünyada ve Türkiye’de önemli bir sağlık sorunudur. Hemoglobin varyantlarının tespitinde tarama amaçlı olarak hemoglobin elektroforezi ile yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) sistemleri kullanılır. Bu çalışmada HbA, HbA₂ ve HbS varyantlarının ölçümünde HPLC (Primus Ultra²) ile hemoglobin elektroforez yöntemleri (Interlab-G26) arasındaki uyumun karşılaştırılması amaçlanmıştır.

Gereç ve Yöntem: Hemoglobinopati taraması istenen 122 hasta çalışmaya dahil edildi. EDTA’lı tüplere 2 ml hacimde alınan örnekler soğuk zincirde laboratuvara transfer edildi. Tüm örneklerin Hb A, Hb A₂, ve Hb S düzeyleri kromotografik yöntem ile çalışan Primus Ultra II HPLC cihazı ve elektroforez yöntemi ile çalışan Interlab G26 elektroforez cihazları ile ölçüldü. Hematolojik parametreler Mindray BC 6800 tam kan cihazı ile ölçüldü. Her iki yöntemi karşılaştırmak için Korelasyon analizi, Passing-Bablok Regresyon Analizi ve Bland-Altman Uyum Grafiği kullanıldı.

Bulgular: Her iki cihaz için Hb A, Hb S ve Hb A₂ parametrelerine ait değerler arasında pozitif korelasyon mevcuttu. Passing-Bablok regresyon analizinde, Hb A ve Hb S parametreleri için yöntemler birbiri ile uyumlu idi. P-B regresyon denklemine göre lineariteden sapma yoktu (CUSUM testi p değerleri sırasıyla 0.12 ve 0.94). Hb A₂ parametresinde ise lineariteden sapma mevcut olup yöntemler arasında uyumsuzluk tespit edildi (p<0.01). Bland-Altman Grafiğinde Hb S parametresi için her iki yöntem arasında uyumluluk mevcut iken, Hb A ve Hb A₂ parametreleri açısından iki yöntem arasında uyumsuzluk tespit edildi.

Sonuç: Beta talasemi taşıyıcıları ve orak hücre bozukluğu olan hastalarda elektroforez yöntemi, Hb A₂’nin tespitinde daha düşük sonuçlar vermiş ve HPLC yöntemi ile uyumsuzluk göstermiştir.

Anahtar kelimeler: Hemoglobinopati, Bland-Altman, Orak hücre hastalığı, Kromotografi, Elektroforez

References

• Oktay G, Acıpayam C, İlhan G, Karal Y, Sakallı G, Yılmazoglu N, et al. The results of hemoglobinopathy screening in Hatay, the southern part of Turkey. JCAM 2014 DOI: 10.4328/JCAM.2427.
• Saraf SL, Molokie RE, Nouraie M, Sable CA, Luchtman-Jones L, Ensing GJ, et al. Differences in the clinical and genotypic presentation of sickle cell disease around the world. 2014;15:4-12.
• Weatherall DJ. The inherited diseases of hemoglobin are an emerging global health burden. Blood 2010;115:4331–6.
• Rees DC, Williams TN, Gladwin MT. Sickle-cell disease. Lancet 2010;376:2018–31.
• Kleinert PK, Schmidt K, Speer O, Schmugge M, Roschitzki B, Durka SS, et al. Mass spectrometry: a tool for enhanced detection of haemoglobin variants. Clin Chem 2008;54:69–76.
• Joutovsky A, Hadzi-Nesic J, Nardi MA. HPLC retention time as a diagnostic tool for hemoglobin variants and hemoglobinopathies: a study of 60000 samples in a clinical diagnostic laboratory. Clin Chem 2004;50:1736–47.
• Ou CN, Rognerud CL. Diagnosis of hemoglobinopathies: electrophoresisvs HPLC. Clin Chem Acta 2001;313:187–94.
• Anagnostopoulos K, Tentes I, Kalleas C, et al. Effect of HbS in the determination of HbA2 with the Menarini HA-8160 analyser and comparison with other instruments. Int J Lab Hematol 2009;31:665–72.
• Papadea C, Cate JC. Identification and quantification of hemoglobins A, F, S, and C by automated chromatography. Clin Chem 1996;42:57–63.
• Dogaru M, Daniel C, Trefor H. Comparison of two analytical methods (electrophoresis and HPLC) to detect thalassemias and hemoglobinopathies. Revista Rev Romana Med Lab 2007;9:39-48.
• White JM, Christie BS, Nam D, Daar S, Higgs DR. Frequency and clinical significance of erythrocyte genetic abnormalities in Omanis. J Med Genet 1993;30:396–400.
• Suh DD, Kruss JS, Bures K. Influence of hemoglobin S adducts on hemoglobin A2 quantification by HPLC. Clin Chem 1996;42:113–4.
• Campbell M, Joan S, Davies H. Evaluation of cation-exchange HPLC compared with isoelectric focusing for neonatal hemoglobinopathy screening. Clin Chem 1999;45:969-75.
• Lafferty J. College of American Pathologists hemoglobinopathy survey HG-B. Chicago, IL: College of American Pathologists, 1999.
• Clarke GM and Higgins TN. Laboratory investigation of hemoglobinopathies and thalassemias: Review and Update. Clin Chem 2000;46:1284–90.