Konya Bölgesindeki Kör Farelerin Perifer Kan Lenfositleri Üzerine Enzim Histokimyasal Bir Çalışma

Abstract

Bu çalışmada Konya bölgesindeki kör farelerin (Nannospalax nehringi, 2n=60 kromozomal formu) perifer kan lenfosit oranları ile alfa-naftil asetat esteraz (ANAE) ve asit fosfataz (ACP-az) pozitif lenfosit oranlarının ışık mikroskobik düzeyde belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla beş ergin N. nehringi (2♀, Meram ve Selçuklu; 3♂, Selçuklu, Çumra ve Ilgın) örneğinden usulüne uygun olarak kan alınmış ve her örnekten altı adet froti hazırlanarak havada kurutulmuştur. Frotilerden ikisi lenfosit oranının tespit edilmesi için rutin May-Grünwald Giemsa yöntemiyle boyanmış ve lenfosit oranı %68.00±5.43 olarak belirlenmiştir. Diğer frotiler fosfat tamponlu gluteraldehit-asetonda (-10°C) 3 dakika tespit edilmiştir. Bu frotilerden ikisine ANAE demonstrasyonu, son ikisine de ACP-az demonstrasyonu uygulanmıştır. ANAE demonstrasyonu sonucunda lenfositlerin çoğunluğu pozitif sonuç verdiği halde, daha az orandaki lenfositlerin (%22.29±5.79) negatif sonuç verdiği gözlenmiştir. ANAE pozitif lenfositlerde iki tip granüler pozitivite tespit edilmiştir. Bu lenfositlerin çoğunda (%73.45±6.87) sayıları 1-5 arasında değişen kırmızı-kahverengi iri granüller (nokta tarzında pozitivite) gözlenirken, daha az orandaki lenfositlerde (%4.26±2.36) ise diffüz çok sayıda küçük granüller (ince granüler pozitivite) gözlenmiştir. Bunun yanı sıra monositler genellikle sitoplazmalarında güçlü ve yaygın tarzda pozitivite gösterirken, nötrofiller ise zayıf bir reaksiyon vermiştir. ACP-az demonstrasyonu sonucunda ise lenfositler çoğunlukla (%83.40±5.90) negatif reaksiyon verirken, daha az orandaki lenfositler (%16.60±5.90) sayıları 1-3 arasında değişen pembe-kırmızı granüler tarzda pozitivite göstermiştir.

Keywords

• Nanospalax nehringi, kör fare, lenfosit, alfa-naftil asetat esteraz, asit fosfataz

An Enzyme Histochemical Study on the Peripheral Blood Lymphocytes of Mole Rats in Konya Region

Abstract

The aim of this study was to determine peripheral blood lymphocyte (PBL), alpha-naphthyl acetate esterase (ANAE) and acid phosphatase (ACP-ase) positive PBL percentages of mole rats (Nannospalax nehringi (2n=60 chromosomal form); 2♀, Meram and Selçuklu; 3♂, Selçuklu, Çumra and Ilgın) in Konya region. For this purpose, six smears were prepared and air dried from each animal. Two of them were stained with May Grünwald-Giemsa for the determination of PBL percentages. The PBL percentage was 68.00±5.43%. Four smears were fixed in glutaraldehydeacetone solutions (pH 4.8) at -10°C for 3 minutes. Two of the smears were used for ANAE demonstration. The remaining two smears were used for ACP-ase demonstration. ANAE staining revealed that large majority of the PBLs were positive, whereas smaller proportion (22.29±5.79%) were negative. Positive PBLs showed two distinct granular positivity. While most of the ANAE positive cells (73.45±6.87%) had 1-5 large reddish-brown granules (dot-like granular positivity), 4.26±2.36% of positive cells had large quantity of diffusely arranged small granules (fine granular positivity). Besides, monocytes generally gave a diffuse and strong reaction while neutrophils displayed a weak positive reaction in their cytoplasms for ANAE. ACP-ase staining revealed that large majority of the PBLs (83.40±5.90%) were negative, whereas smaller proportion (16.60±5.90%) were positive. ACP-ase positive cells had 1-3 large pinkish-red granules.

Keywords

• Nannospalax nehringi, mole rat, lymphocyte, alpha-naphthyl acetate esterase, acid phosphatase

References

1. Mueller, J., Brundel G., Buerki, H., Keller, H.U., Hess, M.W. and Cottier, H. Nonspesific acid esterase activitiy: A criterion for differentiation of T and B lymphocytes in mouse lymph nodes. Eur. J. Immunol. 5: 270-274 (1975)
2. Higgy, K.E., Burns, G.F. and Hayhoe, F.G.J. Discrimination of B, T and Null lymphocytes by esterase cytochemistry. Scand. J. Haematol. 18: 437-448 (1977)
3. Knowles, D.M. and Holck, S. Tissue localization of T-lymphocytes by the histochemical demonstration of acid α-naphthyl acetate esterase. Lab. Invest. 39 (1): 70-76 (1978)
4. Knowles, D.M., Hoffman, H.T., Ferrarini, M. and Kunkel, H.G. The demonstration of acid α-naphthyl acetate esterase activity in human lymphocytes: Usefulness as a T-cell marker. Cell Immunol. 35: 112-123 (1978)
5. Pangalis, G.A., Waldman, S.R. and Rappaport, H. Cytochemical findings in human nonneoplastic blood and tonsillar B and T lymphocytes. Am. J. Clin. Pathol. 69: 314-318 (1978)
6. Ranki, A. Non-spesific esterase activity in human lymphocytes. Clin. Immunol. Immunopathol. 10: 47-58 (1978)
7. Knowles, D.M. and Halper, J.P. Human medullary and kortical thymocytes are distinguishable according to the presence or absence of cytochemically demonstrable acid α-naphthyl acetate esterase (ANAE) activity. J. Immunol. 125 (6): 2823-2825 (1980)
8. Zicca, A., Zeprini, A., Cadoni, A., Franzi, A.T., Ferrarini, M. and Grossi, C.E. Ultrastructural localization of alpha-naphthyl acetate acid esterase in human Tm lymphocytes. Am. J. Pathol. 105 (1): 40-46 (1981)

9. Pruthi, A.K., Gupta, R.K.P. and Sadana, J.R. Acid alpha naphthyl acetate esterase activity in peripheral blood lymphocytes and monocytes of chickens. J. Vet. Med. A. 34: 390-392 (1987)
10. Ramos, J.A., Ramis, A.J., Marco, A., Domingo, M., Rabanal, R. and Ferrer, L. Histochemical and immunohistochemical study of the mucosal lymphoid system in swine. Am. J. Vet. Res. 53 (8): 1418-1426 (1992)
11. Basso, G., Cocito, M.G., Semenzato, G., Pezzutto, A. and Zanesco, L. Cytochemical study of thymocytes and T lymphocytes. Brit. J. Haematol. 44: 577-582 (1980)
12. Çelik, İ., Aştı, R.N. ve Boyraz, M.Ü. Sığır fötal perifer kan lenfositlerinin alfa-naftil asetat esteraz aktivitesi üzerinde ışık mikroskobik çalışmalar. S.Ü. Vet. Fak. Derg. 8 (2): 41-44 (1992)
13. Li, C.Y., Yam, L.T. and Crosby, W.H. Histochemical characterization of cellular and structural elements of human spleen. J. Histochem. Cytochem. 20 (12): 1049-1058 (1972)
14. Çelik, İ., Aştı, R.N. ve Ergene, N. İnsan perifer kanındaki B, T ve Null lenfositlerinin esteraz sitokimyası ve yüzey immünoglobülinlerinin immünoenzimatik yöntemle boyanarak belirlenmesi. S.Ü. Tıp Fak. Derg. 7 (4): 497-503 (1991)
15. Yang, T.J., Jantzen, P.A. and Williams, L.F. Acid α-naphthyl acetate esterase: Presence of activity in bovine and human T- and B lymphocytes. Immunology 38: 85-93 (1979)
16. Kajikawa, O., Koyama, H., Yashikawa, T., Tsubaki, S. and Saito, H. Use of alpha-naphthyl acetate acid esterase staining to identify T lymphocytes in cattle. Am. J. Vet. Res. 44 (8): 1549-1552 (1983)
17. Maiti, N.K., Saini, S.S. and Sharma, S.N. Histochemical studies on chicken peripheral blood lymphocytes. Vet. Res. Commun. 14: 207-210 (1990)
18. Wulff, J.C., Sale, G.E. Deeg, H.J. and Storb, R. Nonspesific acid esterase activity as a marker for canine T-lymphocytes. Exp. Hematol. 9 (8): 850-870 (1981)
19. Catowsky, D. Leucocyte cytochemical and immunological techniques. In: Practical Haematology. Dacie, J.V. and Lewis, S.M. (eds.). Churchill Livingstone, 7th edition, pp. 143-174 (1981)
20. Yang, K., Bearman, R.M., Pangalis, G.A., Zelman, R.J. and Rappaport, H. Acid phosphatase and alpha-naphthyl acetate esterase in neoplastic and non-neoplastic lymphocytes. Am. J. Clin. Pathol. 78 (2): 141-149 (1982)
21. Wilson, E. and Reeder, M.D. Mammal species of the world, A taxonomic and geographic reference. 2nd edition, Smithsonion Institution Press, Washington and London, 2000 p. (2005)
22. Akan, Ş. Konya bölgesindeki Nannospalax (Mammalia:Rodentia) kromozomal formlarının (2n= 40, 58, 60) heterokromatin dağılımı ve nükleolar organizatör bölgeleri (NORs). S.Ü. Fen Bilimleri Enstitüsü, Yüksek Lisans Tezi, Konya, 74 s. (2009)
23. Candan, S. Normal ve U.V. ile ışınlanmış Spalax leucodon (Rodentia: Spalacidae)’da kan sayımı ve kan hücrelerinin ışık mikroskobuyla incelenmesi. G.Ü. Fen Bilimleri Enstitüsü, Yüksek Lisans Tezi, Ankara, 33 s. (1990)
24. Nikolic, Z., Blagojevic, Z., Vitorovic, D. and Mrvic, V. The morphology and the arteries of the ovary and the uterus in the molle rat (Spalax leucodon). Acta Vet. (Beograd) 44 (5-6): 365-370 (1994)
25. Shanas, U., Arensburg, B., Hammel, I., Hod, I. ve Terkel, J. Quantitative histomorphology of the blind mole rat harderian gland. J. Anat. 188: 341-347 (1996)
26. Türker, H., Güven, T. ve Yel, M. Kör fare (Spalax leucodon) tiroit bezi foliküler hücrelerinin ince yapısı. G.Ü. Fen Bilim. Derg. 13 (4): 895-904 (2000)
27. Yel, M. Kör fare (Spalax leucodon) epidermisinin stratum basale ve stratum spinosum kısımlarının ince yapısı. G.Ü. Fen Bilim. Derg. 13 (4): 1143-1154 (2000)
28. Yel, M. Kör fare (Spalax leucodon) epidermisinin stratum granulosum ve stratum corneum kısımlarının ince yapısı. G.Ü. Fen Bilim. Derg. 14 (1): 197-208 (2001)
29. Konuk, T. Pratik Fizyoloji. A.Ü. Vet. Fak. Yayınları, 378, A.Ü. Basımevi, Ankara (1981)
30. Sur, E., Celik, I., Oznurlu, Y., Aydin, M.F., Sen, I. and Ozparlak, H. Enzyme histochemistry and AgNOR numbers in the peripheral blood leukocytes of 6 month-old Kangal bred Anatolian shepherd dogs. Revue Med. Vet. 154 (10): 591-598 (2003)
31. Jain, N.C. Essentials of Veterinary Hematology. Lea&Febiger (1993)
32. Aydın, M.F., Öznurlu, Y., Çelik, İ., Telatar, T. ve Sur, E. Ankara tavşanı perifer kan lenfositlerinin alfa-naftil asetat esteraz (ANAE) ve bazı AgNOR parametreleri üzerinde ışık mikroskobik çalışmalar. Veterinarium 18: 3-9 (2007)
33. Pinkus, G.S., Hargreaves, H.K., McLeod, J.A., Madler, L.M., Rosenthal, D.S. and Said, J.V. α-naphthyl acetate esterase activity. A cytochemical marker for T-lymphocytes. Am. J. Pathol. 97: 17-42 (1979)
34. Nakase, Y. and Kobayashi, K. Cytochemical studies of leukocytes of some animal species III. Esterase stain. Bull. Azabu Univ. Vet. Med. 5 (1): 1-10 (1984)
35. Goldberk, A.F. and Barka, T. Acid phosphatase activity in human blood cells. Nature 21: 292 (1962)
36. Kaplow, L.S. and Burstone, M.S. Cytochemical demonstration of acid phosphatase in hematopoietic cells in health and various hematological disorders using azo dye techniques. J. Histochem. Cytochem. 12 (2): 805-812 (1964)
37. Tamaoki, N. and Essner, E. Distribution of acid phosphatase, β-glucuronidase and N-acetyl-β-glucosaminidase activities in lymphocytes of lymphatic tissues of man and rodents. J. Histochem. Cytochem. 17 (4): 238-243 (1969)
38. Seymour, G.J., Dockrell, H.M. and Greenspan, J.S. Enzyme differentiation of lymhocyte subpopulations in sections of human lymph nodes, tonsils and periodontal disease. Clin. Exp. Immunol. 32: 169-178 (1978)
39. Glick, B. Bursa of Fabricius: development, growth, modulation, and endocrine function. CRC Crit. Rev. Poultry Biol. 1 (2): 107-132 (198
40. Moriya, O. and Ichikawa, Y. Acid phosphatase in lymphoid tissues of developing chick embryos. Acta Histochem. 87 (2): 99-105 (1989)
41. Graczyk, S. The effect of anti-bursa serum (ABS) on the intesity of acid phosphatese reaction in bursa-dependent structures of the spleen and on the level of antibodies in the blood serum. Arch. Vet. Pol. 34 (1-2): 25-36 (1994)
42. Sur, E. and Celik, I. Effects of aflatoxin B1 on the development of the bursa of Fabricius and blood lymphocyte acid phosphatase of the chicken. Brit. Poultry Sci. 44 (4): 558-566 (2003)
43. Sandıkçı, M., Kum, Ş. ve Eren, Ü. Develerin (Camelus dromedarius) perifer kan lökositlerinde alfanaftil asetat esteraz aktivitesinin belirlenmesi. Ankara Üniv. Vet. Fak. Derg. 52: 13-16 (2005)
44. Telatar, T., Arslan, A., Sur, E., Öznurlu, Y. ve Özparlak H. Üç farklı yarasa türünün periferal kan lenfositleri üzerine enzim histokimyasal bir çalışma. S. Ü. Fen Ed. Fak. Fen Derg. 32: 1-7 (2008)
45. Sen, I., Turgut, K., Celik, I. and Kıran, M.M. The importance of lymphocyte enzyme profile, inclusion bodies in circulating leukocytes and conjunctival smear samples in the diagnosis on canine distemper virus infection. Indian Vet. J. 79: 213-217 (2002)
46. Sur, E. Farklı yaş gruplarındaki Türk merinosu erkek kuzularının perifer kan lenfositlerinin alfanaftil asetat esteraz (ANAE) ve asit fosfataz (ACP-az) enzimi aktivitelerinin belirlenmesi. Veterinarium 15 (1): 15-22 (2004)
47. Goldberk, E.D., Karpova, G.V., Melik-Gaikazyan and Pakhryaeva, G.N. Content of acid and alkaline phosphatases in lymphocytes of peripheral blood and hematopoietic organs of intact rats and mice. B. Exp. Biol. Med. 85 (2): 150-151 (1978)