Isolation and Purification of Human Cutaneous Mast Cells

Abstract

Mast hücreleri erken ve geç tip allerjik reaksiyonlarda önemli rol oynamaktadır. Mast hücreleri hakkındaki bilgilerimizin çoğu, in vitro hayvan modelleriyle yapılan çalışmalara dayanmaktadır, fakat bu met odların birtakım mahzurları ve kısıtlılıkları bulunmaktadır. Bu çalışmada; insan deri mast hücrelerinin elde edilmesi ve saflaştırılması konusunda kullanışlı bir metod geliştirilmesi amaçlanmıştır. Yenidoğan sünnet derilerinin enzimatik bir işlemle parçalanmasıyla elde edilen mast hücreleri, Percoll yoğunluk farkına dayalı santrifügasyon yöntemiyle saflaştırıldı. Ham ve saflaştırılmış mast hücrelerinden, spontan ve kalsiyum iyonoforla uyarılma sonucu salgılanan histamin miktarları ELİSA yöntemiyle ölçüldü. Bu metod; insan deri mast hücrelerinin elde edilmesi, saflaştırılması ve stimülasyonu konusunda başarılı sonuçlar vermiştir. Elde edilen mast hücreleri sayı ve canlılık açısından yeterlidir. Bu makalede, bahsedilen metod ayrıntılı şekilde anlatılmıştır. Yeni geliştirilecek in vivo ve in vitro metodlarla mast hücreleri hakkındaki bilgilerimizin daha da artacağı umulmaktadır. [Turgut Özal Tıp Merkezi Dergisi 1996;3(3): 143-150] Anahtar Kelimeler': Kutanöz mast hücresi, enzimatik parçalama, saflaştırma, iyonofor

Keywords

• -

Kutanöz mast hücrelerinin elde edilmesi ve saflaştırılması

Öz

Mast cells play an important role in immediate and late type allergic reactions. Most of our knowledge on properties of mast cells was derived from animal models and these methods have some limitations. We aimed to describe a modified and improved in vitro method for isolation and purification of human skin mast cells. Human neonatal foreskins were digested and isolated by using an enzymatic dispersion procedure. Then they were purified by density centrifugation through Percoll gradients. Spontaneous and ionophore- induced histamine releases from both unpurified and purified mast cell preparations were assayed by enzyme-linked immunosorbent assay. This technique produced reproducible and satisfactory results for isolation, purification, and stimulation of human skin mast cells in a good yield with an excellent viability. In this article, this detailed in vitro method for studies on human skin mast cell was described. It is hoped that newly-developed in vitro and in vivo methods will increase the knowledge about the role of human skin mast cells. [Journal of Turgut Özal Medical Center 1996;3(3):143-150] Key Words: Human skin mast cell, digestion, purification, ionophore

Anahtar Kelimeler

• -