DNA Hasar Analizinde Tek Hücre Jel Elektroforezi (Komet Yöntemi)
Öz
Tek hücre jel elektroforezi" ya da diğer bir adıyla "Komet Yöntemi" ökaryotik hücrelerdeki DNA hasarını hücre bazında saptayabilen duyarlı, güvenilir ve hızlı bir yöntemdir. Komet yöntemi tüm canlı hücreler üzerinde yapılan çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır ve uygulama alanı her geçen gün biraz daha genişlemektedir. Günümüzde Komet yöntemi en çok genotoksik ve sitotoksik ajanların tespitinde, çevresel toksikoloji araştırmalarında, kanser araştırmalarında ve radyasyon biyolojisinde kullanılmaktadır. Komet Yönteminde ilk olarak hücreler 37oC'de %0,5'lik düşük erime noktasına sahip agaroz (LMA) ile süspanse edilip daha önceden üzeri %0,5'lik normal erime noktasına sahip agaroz (NMA) ile kaplanmış lam üzerine aktarılır. Katılaştıktan sonra 3. tabaka olarak üzerine yine %0,5'lik LMA ilave edilir. Bu üç tabakalı jel hazırlandıktan sonra hücreler lizis solüsyonu içerisinde en az 1 saat bekletilerek parçalanır. Daha sonra lam alkali ya da nötral bir tampon içeren elektroforez tankına yerleştirilip, DNA'nın açılması için bir süre beklendikten sonra elektroforez gerçekleştirilir. Elektroforez sonrasında lam, nötralizasyon tamponu ya da PBS ile yıkanıp florokrom bir boya ile boyandıktan sonra floresan mikroskop altında incelenir.
Anahtar Kelimeler
Kaynakça
- Singh NP, Lai H, Khan A. Ethanol-induced single strand DNA breaks in rat brain cells. Mutat Res, 1995; 345: 191-196.
- Singh NP, Stephens RE, Schneider EL. Modifications of alkaline microgel electrophoresis for sensitive detection of DNA damage. Int. J. Radiat. Biol, 1994; 66: 23- 8.
- Anderson D, Yu TW, Philips BJ, Schmezer P. The effect of various antioxidants and other modifying agents on oxygen-radical-generated DNA damage in human lymphocytes in the Comet assay. Mutat Res, 1994; 307: 261-271.
- Agarwal A, Erenpreiss J, Sharma R. Sperm chromatin assessment. In: Gardner DK, Weissman A, Howles CM, Shoham Z. Eds. Textbook of Assisted Reproductive Technologies. 3rd edition, India: Replika Pres Pvt. Ltd, 2009:67-84.
- Durmaz A. İnfertil erkeklerdeki sperm DNA hasarının COMET ASSAY ile tayini. Doktora Tezi,
- Çukurova Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Adana, 2010
