Culturability of osteoblast cells extracted from mature and fetal BALB/c mice calvaria

Abstract

Objectives: The primary cell culture, as a model system, is the multiplication of a replica of the resource tissue under in vitro conditions. This study was designed to standardize the culture technique of two groups of osteoblast cells extracted from the calvaria of mature and fetal BALB/c mice, to examine the cultured cells histomorphologically, to define cellular elements through histochemical techniques, and to determine the rate of culturability. Methods: Calvaria from 10 young mature mice and 6 to 9 fetal calvaria from each of the eight pregnant mice were obtained. A mechanical separation was conducted in sterile environment with a laminar air flow. The cells from four mature calvaria and all fetal calvaria were cultured in DME-F12 medium, while those of the remaining six mature calvaria were planted in RPMI-1640 medium. Cell confluence was monitored at every 24 hours. Successful specimens were stained with picro-thionin and photographed with invert photo-microscope. Results: Of the young mature calvaria cultivated in RPMI-1640, four were unsuccessful, whereas, of the six mature calvaria in DME-F12, two were partially successful and four were successful. In DME-F12, successful, partially successful, and unsuccessful results were obtained in six, one, and one fetal calvaria, respectively. Conclusion: Our results suggest that embryonic tissues can be cultivated at a higher rate than mature tissues and that the quality of the cultivation medium has a significant role in the cultivation process.

Keywords

• -

Ergin ve fetal BALB/c cinsi farelerin kalvaryum kemiklerinden elde edilen osteoblastların kültüre edilebilirliği

Öz

Amaç: Primer hücre kültürü bir model sistem olarak, kaynak doku benzerinin in vitro şartlarda çoğaltılmasıdır. Bu çalışmada, kaynak olarak kullanılan BALB/c soyu ergin fare ve fetal fare kalvaryumundan sağlanan iki grup osteoblast hücrelerinin kültür tekniğini standart hale getirmek, çoğaltılan kemik hücrelerini histomorfolojik olarak incelemek, histokimyasal tekniklerle hücresel elemanları tanımlamak ve kültüre edilebilirlik oranlarını belirlemek amaçlandı. Çalışma planı: On adet genç erişkin, sekiz adet gebe farenin 6-9 arası değişen fetal kalvaryumu kullanıldı. Hava akımlı steril ortam içinde mekanik ayırma yapılarak fetal ve dört ergin kalvaryum için DME-F12 , diğer 6 ergin kalvaryum için de RPMI-1640 medyum kullanılarak flasklara ekildi. Yirmi dört saatte bir, mikroskop altında hücrelerin yapışma özellikleri gözlemlendi. Başarılı kültürler picro-thionin boyama tekniği ile tespit edilip boyanarak fotoğraf ataçmanlı mikroskop ile incelendi ve fotoğraflandırıldı. Sonuçlar: Genç ergin kalvaryumların RPMI-1640 medyumunda kültüre edilen 4’ü başarısız olarak değerlendirildi. Buna karşılık DME-F12 medyumunda kültür edilen altı ergin kalvaryumdan ikisi kısmen, dördü başarılı olarak değerlendirildi. Fetal kalvaryumların ise aynı medyumda bir tanesi başarısız, biri kısmen, altısı ise tam başarılı bulundu. Çıkarımlar: Sonuçlarımız, embriyonik dokuların daha yüksek oranlarda kültüre edilebildiğini ve kültür ortamlarının kemik hücre kültürlerinin başarısında önemli rol oynadığını göstermektedir.

Anahtar Kelimeler

• Animal;bone marrow/cytology; bone marrow/physiology;cell differentiation/physiology;cells;cultured;culture media/pharmacology;osteoblasts/metabolism;osteoblasts/physiology;mice;skull