EFFECT OF DİFFERENT AVULSED TOOTH STORAGE MEDİA ON İN VİTRO CELL VİABİLİTY OF HUMAN PERİODONTAL LİGAMENT FİBROBLASTS

Öz

Abstract Aim: An optimum storage medium is required to preserve the viability of the periodontal ligament cells of the avulsed tooth. Although it has been suggested by some researchers that it would be suitable to store the avulsed tooth in water or saliva, milk has been considered the most appropriate storage medium. Although milk has been shown to be more effective for long durations, short-term results are contradictory. Thus, the purpose of this study was to assess in vitro capacity of four storage media at room temperature with mitochondrial function analysis to maintain the viability of periodontal ligament fibroblasts over different time periods. Material and Methods: Periodontal ligament samples were isolated from second premolars for extracted orthodontic reasons. Pasteurized long-life milk, saliva, tap water, and distilled water were used to examine periodontal ligament cell viability. The exposure periods were for 60, 120, and 240 min and cell viability were evaluated using the XTT assay. Results: The count of living cells in milk was found to be significantly higher than in other storage media after 60, 120, and 240 minutes. The mean number of viable cells after 240 min in all storage media except distilled water was significantly lower than the average number of viable cells after 60 min (p<0.05, t-test). Conclusion: Although milk is considered to be a suitable storage medium for preserving avulsed teeth, the count of vital cells is adversely affected in long-term storage. Key words: cell viability, fibroblast, avulsed tooth, milk. Farklı avulse diş saklama ortamlarının in vitro ortamda insan periodontal ligament fibroblastlarının hücre canlılığı üzerine etkisinin değerlendirilmesi ÖZET Amaç: Avulse olan dişin periodontal ligament hücrelerinin canlılığının korunması için uygun bir saklama ortamı gerekmektedir. Bazı araştırıcılar tarafından avulse dişin suda ya da tükürükte saklanmasının uygun olacağı önerilse de süt en uygun saklama ortamı olarak kabul edilmiştir. Saklama ortamları arasında sütün diğer saklama ortamlarına göre uzun sürede daha etkili olduğu gösterilmiş olsa da kısa vadeli sonuçlar çelişkilidir. Bu çalışmanın amacı, farklı zaman dilimlerinde periodontal ligament fibroblastlarının canlılığını korumak için dört depolama ortamının in vitro kapasitesini oda sıcaklığında mitokondriyal fonksiyon analizi ile değerlendirmektir. Gereç ve yöntem: Periodontal ligament fibroblastları; ortodontik nedenlerle çekilen ikinci premolar dişlerden elde edilmiştir. Periodontal ligament hücrelerinin canlılığını incelemek için pastörize uzun ömürlü süt, tükürük, musluk suyu ve damıtılmış su kullanılmıştır. Dişin depolama ortamında bekleme süreleri 60, 120 ve 240 dakikadır ve hücre canlılığı XTT testi kullanılarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Sütteki canlı hücre sayısı 60, 120 ve 240 dakika sonra diğer depolama ortamlarına göre anlamlı derecede yüksek bulunmuştur. Canlı hücre sayısı damıtılmış su dışındaki tüm depolama ortamlarında 240 dakika sonra, 60 dakika sonraki tüm depolama ortamlarından anlamlı derecede düşük bulunmuştur (p<0.05, t-testi). Sonuç: Süt avulse dişin saklanması için uygun bir ortam olmasına rağmen, dişin uzun süreli saklanmasında canlı hücrelerin sayısı negatif etkilenmektedir. Anahtar kelimeler: hücre canlılığı, fibroblast, avulse diş, süt.

Anahtar Kelimeler

• cell viability
• fibroblast
• avulsed tooth
• milk

EFFECT OF DIFFERENT AVULSED TOOTH STORAGE MEDIA ON IN VITRO CELL VIABILITY OF HUMAN PERIODONTAL LIGAMENT FIBROBLASTS

Öz

Abstract Aim: An optimum storage medium is required to preserve the viability of the periodontal ligament cells of the avulsed tooth. Although it has been suggested by some researchers that it would be suitable to store the avulsed tooth in water or saliva, milk has been considered the most appropriate storage medium. Although milk has been shown to be more effective for long durations, short-term results are contradictory. Thus, the purpose of this study was to assess in vitro capacity of four storage media at room temperature with mitochondrial function analysis to maintain the viability of periodontal ligament fibroblasts over different time periods. Material and Methods: Periodontal ligament samples were isolated from second premolars for extracted orthodontic reasons. Pasteurized long-life milk, saliva, tap water, and distilled water were used to examine periodontal ligament cell viability. The exposure periods were for 60, 120, and 240 min and cell viability were evaluated using the XTT assay. Results: The count of living cells in milk was found to be significantly higher than in other storage media after 60, 120, and 240 minutes. The mean number of viable cells after 240 min in all storage media except distilled water was significantly lower than the average number of viable cells after 60 min (p<0.05, t-test). Conclusion: Although milk is considered to be a suitable storage medium for preserving avulsed teeth, the count of vital cells is adversely affected in long-term storage. Key words: cell viability, fibroblast, avulsed tooth, milk. Farklı avulse diş saklama ortamlarının in vitro ortamda insan periodontal ligament fibroblastlarının hücre canlılığı üzerine etkisinin değerlendirilmesi Amaç: Avulse olan dişin periodontal ligament hücrelerinin canlılığının korunması için uygun bir saklama ortamı gerekmektedir. Bazı araştırıcılar tarafından avulse dişin suda ya da tükürükte saklanmasının uygun olacağı önerilse de süt en uygun saklama ortamı olarak kabul edilmiştir. Saklama ortamları arasında sütün diğer saklama ortamlarına göre uzun sürede daha etkili olduğu gösterilmiş olsa da kısa vadeli sonuçlar çelişkilidir. Bu çalışmanın amacı, farklı zaman dilimlerinde periodontal ligament fibroblastlarının canlılığını korumak için dört depolama ortamının in vitro kapasitesini oda sıcaklığında mitokondriyal fonksiyon analizi ile değerlendirmektir. Gereç ve yöntem: Periodontal ligament fibroblastları; ortodontik nedenlerle çekilen ikinci premolar dişlerden elde edilmiştir. Periodontal ligament hücrelerinin canlılığını incelemek için pastörize uzun ömürlü süt, tükürük, musluk suyu ve damıtılmış su kullanılmıştır. Dişin depolama ortamında bekleme süreleri 60, 120 ve 240 dakikadır ve hücre canlılığı XTT testi kullanılarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Sütteki canlı hücre sayısı 60, 120 ve 240 dakika sonra diğer depolama ortamlarına göre anlamlı derecede yüksek bulunmuştur. Canlı hücre sayısı damıtılmış su dışındaki tüm depolama ortamlarında 240 dakika sonra, 60 dakika sonraki tüm depolama ortamlarından anlamlı derecede düşük bulunmuştur (p<0.05, t-testi). Sonuç: Süt avulse dişin saklanması için uygun bir ortam olmasına rağmen, dişin uzun süreli saklanmasında canlı hücrelerin sayısı negatif etkilenmektedir. Anahtar kelimeler: hücre canlılığı, fibroblast, avulse diş, süt

Anahtar Kelimeler

• cell viability,
• fibroblast,
• avulsed tooth,
• milk.

Kaynakça

1. Lou Q, Zhu Y, Wang X. Fourteen Years After Delayed Replantation of an Avulsed Permanent Tooth: Clinical Features and Outcomes. J Craniofac Surg 2019;30:692-4.
2. 2. Souza BDM, Dutra KL, Kuntze MM, Bortoluzzi EA, Flores-Mir C, Reyes-Carmona J, et al. Incidence of root resorption after the replantation of avulsed teeth: a meta-analysis. J Endod 2018;44:1216-27.
3. 3. Kaya S, Keskin Ö, Bodrumlu E. Storage solutions of avulsed teeth. J Dent Fac Atatürk Uni 2013;Suppl 7:96-101.
4. 4. Khinda VI, Kaur G, Brar GS, Kallar S, Khurana H. Clinical and practical implications of storage media used for tooth avulsion. Int J Clin Pediatr Dent 2017;10:158.
5. 5. Dharmani CKK, Singh N, Dharmani UK. Storage Media for Avulsed Teeth: An Overview. J Dent Med Sci 2017;16:142.
6. 6. Adnan S, Lone MM, Khan FR, Hussain SM, Nagi SE. Which is the most recommended medium for the storage and transport of avulsed teeth? A systematic review. Dent Traumatol 2018;34:59-70.
7. 7. Martin MP, Pileggi R. A quantitative analysis of Propolis: a promising new storage media following avulsion. Dent Traumatol 2004;20:85-9.
8. 8. Kokkali V, Bendgude V, Sharangpani G. Comparative evaluation of post-traumatic periodontal ligament cell viability using three storage media. Eur Arch Paediatr Dent 2017;18:209-14.

9. 9. D’Costa VF, Bangera MK, Kini S, Kutty SM, Ragher M. An In vitro comparison of coconut water, milk, and saline in maintaining periodontal ligament cell viability. J Pharm Bioallied Sci 2017;9:107-11.
10. 10. Côvre LM, Caliente EA, Sonoda CK, Brandini DA, Poi WR. The effect of soy and whole milk as a means to store avulsed teeth: A histometric study. Dent Traumatol 2020;00:1-9.
11. 11. Oikarinen KS, Seppā ST. Effect of preservation media on proliferation and collagen biosynthesis of periodontal ligament fibroblasts. Dent Traumatol 1987;3:95-9.
12. 12. Souza BDMd, Alves AMH, Santos LGPd, Simões CMdO, Felippe WT, Felippe MCS. Fibroblast Viability after Storage at 20° C in Milk, Hank's Balanced Salt Solution and Coconut Water. Braz Dent J 2016;27:404-7.
13. 13. Goswami M, Chaitra T, Chaudhary S, Manuja N, Sinha A. Strategies for periodontal ligament cell viability: An overview. J Conserv Dent 2011;14:215-20.
14. 14. Malhotra N. Current developments in interim transport (storage) media in dentistry: an update. Br Dent J 2011;211:29-33.
15. 15. De Souza BDM, Bortoluzzi EA, Da Silveira Teixeira C, Felippe WT, Simões CMO, Felippe MCS. Effect of HBSS storage time on human periodontal ligament fibroblast viability. Dent Traumatol 2010;26:481-3.
16. 16. Souza BDM, Lückemeyer DD, Felippe WT, Simões CMO, Felippe MCS. Effect of temperature and storage media on human periodontal ligament fibroblast viability. Dent Traumatol 2010;26:271-5.
17. 17. Blomlof L. Milk and saliva as possible storage media for traumatically exarticulated teeth perior to replantation. Swed Dent J 1981:1-26.
18. 18. Cvikl B, Lussi A, Moritz A, Sawada K, Gruber R. Differential inflammatory response of dental pulp explants and fibroblasts to saliva. Int Endod J 2016;49:655-62.
19. 19. Müller H-D, Cvikl B, Lussi A, Gruber R. Chemokine expression of oral fibroblasts and epithelial cells in response to artificial saliva. Clin Oral Investig 2016;20:1035-42.
20. 20. de Souza BD, Lückemeyer DD, Felippe WT, Alves AM, Simões CM, Felippe MC. Effect of milk renewal on human periodontal ligament fibroblast viability in vitro. Dent Traumatol 2012;28:214-6.
21. 21. Lee HS, Lim YS. Comparative study on survival rate of human gingival fibroblasts stored in different storage media. J Korean Soc Dent Hyg 2012;12:733-9.
22. 22. Moazami F, Mirhadi H, Geramizadeh B, Sahebi S. Comparison of soymilk, powdered milk, Hank’s balanced salt solution and tap water on periodontal ligament cell survival. Dent Traumatol 2012;28:132-5.
23. 23. de Souza BDM, Bortoluzzi EA, Reyes‐Carmona J, dos Santos LGP, Simões CMdO, Felippe WT, et al. Effect of temperature and seven storage media on human periodontal ligament fibroblast viability. Dent Traumatol 2017;33:100-5.
24. 24. Chen F, Qi S, Lu L, Xu Y. Effect of storage temperature on the viability of human periodontal ligament fibroblasts. Dent traumatol 2015;31:24-8.
25. 25. Nowak E, Kammerer S, Küpper J-H. ATP-based cell viability assay is superior to trypan blue exclusion and XTT assay in measuring cytotoxicity of anticancer drugs Taxol and Imatinib, and proteasome inhibitor MG-132 on human hepatoma cell line HepG2. Clin Hemorheol Microcirc 2018;69:327-36.
26. 26. Wang S, Yu H, Wickliffe JK. Limitation of the MTT and XTT assays for measuring cell viability due to superoxide formation induced by nano-scale TiO2. Toxicol In Vitro 2011;25:2147-51.