Temperature-Dependent Thermotaxis and Its Impact on Motility, Viability, and Concentration in Canine (American Bully) Sperm

Öz

Sperm transfer through the reproductive tract is crucial for successful fertilization in most of mammals. After ejaculation, spermatozoa need to go through a complex physiological barrier and environments in the reproductive tract. Also, sperm must respond to many environmental conditions, including temperature. The present study aims to investigate the thermotactic response of sperms collected from American Bully dogs and its impact on motility, viability, membrane integrity, and concentration at different temperatures. Evaluated semen samples, collected from mature dogs incubated at 34°C, 38°C, and 40°C for 60 minutes in a custom-designed thermotaxis model. Some sperm parameters were assessed using computer-assisted sperm analysis (iSperm CASA), Nigrosin-Eosin staining, and the Hypo-Osmotic Swelling Test (HOST). Results showed that sperm motility and concentration were increased at 34°C and 38°C, while exposure to 40°C resulted in a significant decline in motility, progressive motility, and concentration. Slightly higher curvilinear velocity (VCL) and straight-line velocity (VSL) at 38°C suggests optimal motility at this temperature. Membrane integrity (HOST-positive sperm) was significantly compromised at 40°C, with a corresponding decrease in viability, as confirmed by Nigrosin-Eosin staining. Sperm direction towards to different temperature for the sample was also affected, with the highest sperm concentration observed at 34°C, followed by 38°C, and the lowest at 40°C, indicating that higher temperatures (likely due to increased oxidative stress and metabolic exhaustion) are not favourable for canine sperm. As conclusion, the results showed that canine spermatozoa exhibit temperature-dependent survival patterns, with an optimal range between 34°C and 38°C. The thermotaxis for spermatozoa may play a role in natural sperm selection, influencing fertilization efficiency. Future studies should be set up to investigate the molecular mechanisms underlying thermotaxis and its potential use in sperm selection for improved fertility outcomes.

Anahtar Kelimeler

• Termotaxis
• canine sperm
• sperm kinetics
• viability

Sıcaklığa Bağlı Termotaksis ve Bunun Köpek (American Bully) Spermlerinde Motilite, Canlılık ve Konsantrasyon Üzerine Etkisi

Öz

Memelilerin çoğunda başarılı döllenme için sperm taşınımı, üreme kanalında kritik bir süreçtir. Ejakülasyondan sonra spermatozoonlar, üreme kanalındaki karmaşık fizyolojik bariyerleri ve farklı çevresel koşulları aşmak zorundadır. Ayrıca, spermatozoonların sıcaklık da dahil olmak üzere birçok çevresel faktöre yanıt vermesi gerekmektedir. Bu çalışma, American Bully ırkı köpeklerden toplanan spermatozoonların termotaktik tepkisini incelemeyi ve farklı sıcaklıklarda (32°C, 38°C ve 40°C) inkübasyonun motilite, canlılık, membran bütünlüğü ve konsantrasyon üzerindeki etkisini değerlendirmeyi amaçlamaktadır. Değerlendirilen semen örnekleri, olgun erkek köpeklerden toplanmış ve özel olarak tasarlanmış bir termotaksis modeli içinde 60 dakika boyunca inkübe edilmiştir. Çeşitli sperm parametreleri, bilgisayar destekli sperm analiz sistemi (iSperm CASA), Nigrosin-Eosin boyama ve Hipo-Ozmotik Şişme Testi (HOST) kullanılarak değerlendirilmiştir. Sonuçlar, 32°C ve 38°C sıcaklıklarında sperm motilitesi ve konsantrasyonunda artış olduğunu, ancak 40°C'ye maruz kalmanın motilite, progresif motilite ve konsantrasyonda önemli bir düşüşe yol açtığını göstermiştir. 38°C’de gözlemlenen daha yüksek eğrisel hız (VCL) ve düz çizgi hızı (VSL), bu sıcaklığın optimal motiliteyi desteklediğini göstermektedir. Membran bütünlüğü (HOST-pozitif sperm oranı), 40°C’de önemli ölçüde bozulmuş ve bu durum Nigrosin-Eosin boyaması ile doğrulanan canlılık azalması ile paralellik göstermiştir. Örneklerde sperm yönelimi de sıcaklığa bağlı olarak değişmiş, en yüksek sperm konsantrasyonu 32°C’de, ardından 38°C’de gözlenirken, en düşük konsantrasyon 40°C’de tespit edilmiştir. Bu durum, yüksek sıcaklıkların artan oksidatif stres ve metabolik tükenme nedeniyle köpek spermatozoonları için elverişli olmadığını düşündürmektedir. Sonuç olarak, bu çalışma köpek spermatozoonlarının sıcaklığa bağlı olarak hayatta kalma modelleri sergilediğini ve optimal sıcaklık aralığının 32°C ile 38°C arasında olduğunu göstermektedir. Spermatozoonların termotaksisi, doğal sperm seçiliminde önemli bir rol oynayabilir ve döllenme başarısını etkileyebilir. Gelecekteki çalışmalar, termotaksisin moleküler mekanizmalarını araştırarak, bu olgunun fertiliteyi artırmaya yönelik sperm seçiminde nasıl kullanılabileceğini belirlemeye odaklanmalıdır.

Anahtar Kelimeler

• Termotaxi
• köpek sperm
• sperm kinetik

Kaynakça

1. Ali, M. A., Wang, Y., Qin, Z., Yuan, X., Zhang, Y., Zeng, C. (2021). Odorant and Taste Receptors in Sperm Chemotaxis and Cryopreservation: Roles and Implications in Sperm Capacitation, Motility and Fertility. Genes, 12, 488
2. Bahat A, Eisenbach M. (2006) Sperm thermotaxis. Mol Cell Endocrinol.; 252(1-2):115-9
3. Hwang, B., Lee, D., Hwang, S. J., Baek, J. H., Kim, B. (2019). Rheotaxis-based high-throughput motile sperm sorting device. International Journal of Precision Engineering and Manufacturing. 20 (6), 1037-1045
4. Kang, H., An, T., Lee, D., Kim, B., (2019). Gravity and rheotaxis-based sperm sorting device employing a cam-actuated pipette mechanism. Rev. Sci. Instrum. 90 (8): 084101.
5. Khodamoradi, M., Rafizadeh Tafti, S., Mousavi Shaegh, S.A.; Aflatoonian, B.; Azimzadeh, M.; Khashayar, P. (2021) Recent Microfluidic Innovations for Sperm Sorting. Chemosensors, 9, 126.
6. Perez-Cerezales S, Boryshpolets S, Eisenbach M. (2015). Behavioral mechanisms of mammalian sperm guidance. Asian J Androl.;17(4):628-32.
7. Pérez-Cerezales S, Laguna-Barraza R, de Castro AC, Sánchez-Calabuig MJ, Cano-Oliva E, de Castro-Pita FJ, Montoro-Buils L, Pericuesta E, Fernández-González R, Gutiérrez-Adán A (2018). Sperm selection by thermotaxis improves ICSI outcome in mice. Sci Rep; 8(1):2902.
8. Plessis SS, Agarwal A, Mohanty G, van der Linde M. (2015). Oxidative phosphorylation versus glycolysis: what fuel do spermatozoa use? Asian J Androl.,17(2):230-5.

9. Söderquist L, Madrid-Bury N, Rodriguez-Martinez H. (1997). Assessment of ram sperm membrane integrity following different thawing procedures. Theriogenology.48 (7):1115-25.
10. Suarez, S. S., Pacey, A. A. (2006). Sperm transport in the female reproductive tract, Human Reproduction Update, 12 (1) 23–37
11. Turner, R. M. (2005). Moving to the beat: a review of mammalian sperm motility regulation. Reproduction, Fertility and Development 18(2) 25-38.
12. Van de Hoek M, Rickard JP, de Graaf SP. Motility Assessment of Ram Spermatozoa. Biology. 2022; 11(12):1715