HBA mutations detected by MLPA in a- thalassemia patients

Öz

Thalassemia syndromes are the most common monogenic disorders in humans and b-thalassemia major is one of the most important public health problems in Turkey. Many genetic factors play roles in modifying the disease severity such as mutations in the alpha globin gene (HBA), UGT1 gene (bilirubin metabolism) or HFE gene (iron metabolism). Deletions or duplications in HBA gene determine the accumulation of a chain in b-thalassemia major patients. The human alpha globin gene cluster is located on chromosome 16 and deletions or duplications are the most important mutations. Multiple ligation dependent probe amplification (MLPA) technique is a simple and rapid technique and used in many genetic disorders in which deletions and duplications are common. In this study we used a commercial MLPA kit for detecting alpha globin gene mutations. The kit contains 24 different probes in the HBA region. In this study we aimed to investigate the incidence of alpha globin gene mutations using MLPA technique in 19 b-thalassemia major patients which were diagnosed in our departmentAlpha globin gene deletions were detected in 2 out of 19 (10.5%) b-thalassemia major patients. In one of the patients the deletion was located between the HBA2 gene and HBA1P gene. The deletion detected in the other patient was located between the HBA1 gene and HBA2 gene. This result suggests that alpha globin gene mutations in b-thalassemia major patients are not rare. MLPA technique is suitable to investigate the mutations in this complex gene cluster.

Anahtar Kelimeler

• -

b-talasemi hastalarında MLPA yöntemi ile HBA mutasyonlarının saptanması

Öz

Talasemi sendromları insanlarda en sık gözlenen monogenik hastalıklardır b-talasemi major ülkemizde gözlenen en önemli halk sağlığı problemlerinden birisidir. HBA (alfa globin), UGT1 (bilirübin metabolizması), HFE (demir metabolizması) genlerindeki mutasyonlar gibi genetik düzenleyici faktörler hastalığın ağırlığının belirlenmesinde önemli role sahiptir. HBA genindeki delesyon ya da duplikasyonlar b-talasemi major hastalarındaki a-zincir birikiminin miktarını belirlemektedir. HBA geni 16. Kromozom üzerinde lokalizedir ve gende gözlenen mutasyonları büyük oranda delesyon ve duplikasyonlar oluşturmaktadır. Multiple ligation dependent probe amplification (MLPA) tekniği, delesyon ve duplikasyonların sık olarak gözlendiği genetik hastalıkların tanısında kullanılabilen yeni, basit ve hızlı bir yöntemdir. Bu çalışmada 24 adet prob ile HBA genindeki delesyon ya da duplikasyonları saptayabilen ticari bir kit kullanılmıştır. Bu çalışmada bölümümüzde b-talasemi major hastalığı tanısı almış 19 hastada HBA genindeki mutasyonlar MLPA yöntemi ile araştırılmıştır. On dokuz hastanın 2' sinde (%10.5) HBA geninde delesyon saptanmıştır. Hastaların bir tanesinde delesyon HBA2 geni HBAİP arasında, diğerinde HBA1 ile HBA2 genleri arasında saptanmıştır. Bü sonuç b-talasemi major hastaları arasında HBA gen mutasyonların nadir olmadığını göstermektedir. Ayrıca MLPA tekniğinin bu kompleks gen dizisindeki mutasyonların araştırılmasında uygun bir teknik olduğu da görülmüştür.

Anahtar Kelimeler

• b-talasemi, MLPA, HBA

Kaynakça

1. 1. Leung WC, Leung KY, Lau ET, Tang MH, Chan V, Alpha- thalassaemia. Semin Fetal Neonatal Med. 2008;13:215-222
2. 2. Puehringer H, Najmabadi H, Law HY, Krugluger W, Viprakasit V, Pissard S, et al. Validation of a reverse- hybridization StripAssay for the simultaneous analysis of common alpha-thalassemia point mutations and deletions
3. Clin Chem Lab Med. 2007;45(5):605-10
4. 3. Apak H. Hemoglobinopatiler ve Talasemiler. Anemiler Sempozyumu, 19-20 Nisan 2001, Istanbul, s. 149-162 4. Harteveld CL, Voskamp A, Phylipsen M, Akkermans N, den Dunnen JT, White SJ, et al. Nine unknown rearrangements in 16pl3.3 and Ilpl5.4 causing alpha and beta-thalassaemia characterised by high resolution multiplex ligation-dependent probe amplification. J Med Genet. 2005;42:922-931
5. 5.Thein SL. Genetic modifiers of the b-haemoglobinopathies. Br J Haematol. 2008; 141:357-366
6. 6. Menzel S, Garner C, Gut I, Matsuda F, Yamaguchi M, Heath S, et al. A QTL influencing F cell production maps to a gene encoding a zihc-finger protein on chromosome 2pl5. Nat Genet. 2007;39:1197-1199
7. 7. Han J, Zeng R, Hu B, The prevalence of beta- thalassemia heterozygotes compound alpha-thalassemia in Guangdong district. Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi
8. 2001;22;514-516

9. 8. Cai YL, Zheng YM, Tang MZ, Li J, Li SW, Molecular detection and haematological analysis of heterozygotes in beta-thalassemia combining deletional alpha- thalassemia. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi
10. 2007;15(l): 195-197
11. 9. Kanavakis E, Traeger-Synodinos J, Lafioniatis S, Lazaropoulou C, Liakopoulou T, Paleologos G, et al. A rare example that coinheritance of a severe form of beta- thalassemia and alpha-thalassemia interact in a "synergistic" manner to balance the phenotype of classic thalassemic syndromes. Blood Cells Mol Dis. 2004;32:319-324