Kolşisinin Zorlanmış Koşullar Altında Bozunurluk Ürünlerinin Belirlenmesi İçin LC-MS/MS Metodunun Geliştirilmesi ve Validasyonu

Öz

Kolşisin antik Yunan döneminden beri bilinen antifibrotik, anti-inflamatuar, antihistaminik, membran stabilizasyonu ve lipid peroksidasyon inhibisyonu etkileri olan bitkisel kökenli bir ilaçtır. Tüm bu özellikler inflamatuar olayların ve hücre bölünmesinin ön planda olduğu hastalıklarda bu ilacın etkili olabileceği düşüncesini gündeme getirmektedir. Yıllardır gut artritinde kullanılan kolşisin, son 50 yıldır FMF, Behçet hastalığ , skleroderma, amiloidoz ve karaciğer sirozu için de başvurulan ilaç olmuştur (Dönmez M.). Ticari farmasötik formlar içinde bulunan ilaç moleküllerinin ve saflıklarının saptanması, toksikolojik ve farmakolojik bakımdan önemlidir. Farmasötik şekillerin hazırlanması sırasında saflık ve ilgili bozulma ürünlerinin izlenebilmesi için ileri metotlara ihtiyaç vardır (U.S. Food and Drug Administration 2003, 2006). Bu çalışmanın amacı farmasötik dozaj formlarında kolşisin ve bozunurluk ürünlerinin LC-MS/MS tekniği ile hızlı bir metot geliştirmektir. Ticari dozaj formlarındaki kolşisin ve bu preparatlarda zorlanmış koşullardaki bozunurluk ürünlerinin saptanması için bir LC-MS/MS metodu geliştirilmiştir (Liu et al. 2007). UPLC tekniği ile MS/MS analizleri için optimum koşullar belirlenmiş ve sistemin validasyonu yapılmıştır. Analizlerde ACE 5 C18 250*4,6 mm kolonu kullanılmıştır. Ayırma 60:40 (v/v) metanol-su ve %0,1 formik asit ortamında gerçekleştirilmiştir. ICH Klavuzuna uygun olarak Kolşisinin parçalanma ürünleri; asidik, bazik, oksidatif, termal, UV ışık, koşulları altındaki davranışı LC-MS/MS tekniği ile incelenerek belirlenmiştir (ICH guidelines 2003). Bu koşullar; 1 M HCI 100 ⁰C -30 dk, 1M NaOH 100 ⁰C -30 dk, %3-%30 H₂O₂ 100 ⁰C -30 dk, 6-24 saat 100 ⁰C termal bozunma, 6-24 saat 254 nm dalga boyunda-oda sıcaklığında UV ışık altında bozunma şartlarında; LC-MS/MS, EJS-ESI tekniği ve pozitif iyon modda bozunurluk ürünleri gözlemlenmiştir.

Anahtar Kelimeler

• Kolşisin;,UPLC;,Validasyon;,Bozunurluk;,LC-MS/MS

Kaynakça

1. DÖNMEZ M., 2008. Kolşisin’in Ratlarda Deneysel Olarak Oluşturulan İntraabdominal Adezyonların Gelişimi Üzerine Etkisi , Uzmanlık, Taksim Eğitim ve Araştırma Hastanesi, İstanbul, 45.
2. U.S. Food and Drug Administration; Guidance for Industry, Q3A Impurities in New Drug Substances 2003.
3. U.S. Food and Drug Administration; Guidance for Industry, Q3B Impurities in New Drug Products 2006
4. Liu DQ, Wu L, Sun M, MacGregor PA. On-line H/D exchange LCMS strategy for structural elucidation of pharmaceutical impurities. J Pharm Biomed Anal 2007; 44: 320-9.
5. ICH guidelines, Q1A (R2): Stability Testing of New Drug Substances and Products (revision 2), International Conference on Harmonization. Available from: 〈http://www.fda.gov/downloads/RegulatoryInformation/Guidances/ucm128204.pdf〉, 2003.
6. Wallace SL, Ertel NH. Plasma levels of colchicine after administiration of a single dose. Metabolism 1973;22:749-53.
7. Hunter AL, Klaassen CD. Biliary excretion of colcicine. J Pharmacol Exp Ther 1974;192:605-17.
8. Murray SS, Kramlinger KG, McMichan JC, Mohr DN. Acute toxicity after excessive ingestion of colchicine. Mayo Clin Proc 1983;58:528-32.

9. Bismuth C, Baud F, Dally S. Standardized prognosis evaluation in acute toxicology: Its benefit in colchicine, paraquat and digitalis poisonings. J Toxicol Clin Exp 1986:33-8
10. Weakley-Jones B, Gerber JE, Biggs G. Colchicine poisoning: Case report of two homicides. Am J Forensic Med Pathol 2001;22:203-6.
11. Jarvie D, Park J, Stewart MJ. Estimation of colchicine in a poisoned patient by using high performance liquid chromatography. Clin Toxicol 1979;14:375-81.
12. Gooneratne BWM. Massive generalized alopecia after poisoning by Gloriosa Superba. Br Med J 1966;1:1023-4.
13. Edgar C. Nicolas, Thomas H. Scholz. (1998). Active drug substance impurity profiling part II. LC-MS/MS fingerprinting, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 16 825-836