Aşılı Asma Çeliklerinin Histolojik İncelenmesinde Farklı Fiksasyon ve Boyama Yöntemlerinin Etkileri

Öz

Aşılı asma üretiminde aşı kaynaşması ve diğer aşı özelliklerinin incelenmesi amacıyla, histolojik çalışmalar yürütülmektedir. Histolojik inceleme için, aşı örnekleri bir fiksasyon çözeltisinde muhafaza edilmekte ve sonrasında bu aşı örneklerinden alınan aşı kesitleri bazı histolojik boyama yöntemleri ile boyanmaktadır. Asma aşı örneklerinin histolojik incelemesinde daha once uygulanmamış bir fiksasyon yönteminin ve farklı boyama yöntemlerinin çalışılmış olması, bu çalışmanın önemini ortaya koymaktadır. Asma aşı örneklerinin fiksasyonunda genel olarak %70 etil alkol ve FAA (formaldehit: glasiyel asetik asit: alkol) fiksatifleri kullanılmaktadır. Fakat bir diğer fiksatif çözelti, gliserin: alkol:su lignoselülozik doku fiksasyonunda kullanılmaktadır. Bu çalışmada bu fiksasyon yöntemlerinin asma aşı örneklerinin fiksasyonundaki farklı etkilerinin saptanması amaçlanmıştır. Sonuç olarak gliserin:alkol:su fiksasyon metodunun asma aşı örneklerinin fiksasyonu için önerilebilir bulunmuştur. Ayrıca toluidin mavisi, safranin + hematoksilen ikili boyama ve safranin + Lugol ikili boyama gibi farklı histolojik boyama yöntemleri karşılaştırılmıştır; toluidin mavisi en başarılısı olmuş ve bunu safranin + Lugol ikili boyama yöntemi izlemiştir. Aşı özelliklerinin (anaç ve kalem arasındaki kambiyal bağlantı ve vasküler farklılaşma gibi) daha net boyanmasından dolayı, aşı kesitlerinin boyanmasında toluidin mavisi önerilebilir bulunmuştur.

Anahtar Kelimeler

• Toluidin mavisi
• safranin
• lugol
• hematoksilen
• gliserin

The Effects of Fixation and Staining Methods in Histological Investigation on the

Öz

For purpose of investigation of graft union and other graft properites in grafted grapevine production, the histological studies are conducted. For this, graft samples are stored in a fixation solution and later sections are stained by using some histological staining methods. Being examined of previously unapplied a fixation method and different staining methods has constituted the importance of this study, in histological investigation of grapevine graft samples. In grapevine graft samples fixation, 70% ethyl alcohol and formaldehyde: glacial acetic acid: alcohol (FAA) fixatives have been used in general. But also, another fixative solution, glycerin: alcohol: water solution is used for lignocellulosic tissue fixation. In this study, observing dissimilar effects between these fixation methods in grapevine graft samples fixation was aimed. As a result, it’s thought that, glycerin: alcohol: water fixation method may be suggestible for grapevine graft samples fixatiation. Furthermore, different histological staining methods as toluidine blue, safranin + hematoxylin dual staining and safranin + Lugol’s solution dual staining were compared; toluidine blue was forefront and safranin + Lugol’s solution was second. And it's seen that, because of staining graft properties (continuity of cambium and vascular differentiation etc.) clearer, toluidine blue is suggestible for graft section staining.

Anahtar Kelimeler

• Toluidine blue
• safranin
• lugol
• hematoxylin
• glycerin

Kaynakça

1. Ada S (2008). Kestanenin (Castanea sativa Mill.) Meşe (Quercus sp.) Üzerine Aşılanabilirliği ve Aşı Kaynaşmasının Anatomik Gelişimi ile Toplam Flavan İçeriklerinin Mevsimsel Değişimi. T.C. Adnan Menderes Üniversitesi Fen Bilimler Enstitüsü Bahçe Bitkileri Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi, 69 s., Aydın.
2. Alerico GC, Vignoli-Silva M and Lando V (2016). Morphoanatomical characterization and chemical study of the internal portion of the stem bark of Sambucus australis Cham. & Schltdl. Rev. Bras. Pl. Med., Campinas, 18 (1): 223-229.
3. Arık C (2013). Aşılı Asma Fidanı Üretiminde İndol Butirik Asit (IBA) Uygulamasının Aşı Kaynaşması Üzerine Etkileri. T.C. Süleyman Demirel Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Bahçe Bitkileri Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi, 92 s., Isparta.
4. Azimi M, Özkaya MT, Çölgeçen H, Büyükkartal HN (2016). Analysis of phenolic compounds for determination of cambium differentiation and tracheal elements in olive graft combinations. Journal of Experimental Biology and Agricultural Sciences, 4 (6): 714-720.
5. Baar J, Tippner J, Gryc V (2013). The relation of fibre length and ray dimensions to sound propagation velocity in wood of selected tropical hardwoods. IAWA Journal, 34 (1): 49-60.
6. Bayram S (2013). Bazı Avokado Çeşitlerinin Anaçlık Özelliklerinin ve Üzerine Aşılı Çeşitlerle Uyuşma Durumlarının İncelenmesi. T.C. Süleyman Demirel Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Bahçe Bitkileri Anabilim Dalı, Doktora Tezi, 146 s., Isparta.
7. Begum S, Nakaba S, Oribe Y, Kubo T, Funada R (2010). Cambial sensitivity to rising temperatures by natural condition and artificial heating from late winter to early spring in the evergreen conifer Cryptomeria japonica. Trees, 24: 43–52.
8. Bozkurt Y (1973). Odunsu materyalin mikroskop yardımı ile incelenme tekniği. İstanbul Üniversitesi Orman Fakültesi Dergisi, 1(23): 75-94.

9. Braga ZV, Dos Santos RF, Amorim L, Appezzato-da-Glória B (2019). Histopathology of infection and colonisation of Elsinoë ampelina on grapevine leaves. European Journal of Plant Pathology, 1-11.
10. Brandes AFN, Lisi CS, Barros CF (2011). Dendrochronology of lianas of the Leguminosae family from the Atlantic Forest, Brazil. Trees, 25: 133–144.
11. Cangi R (1996). Aşılı Asma Fidanı Üretimi ve Aşı Kaynaşmasının Anatomik, Histolojik ve Biyokimyasal Olarak İncelenmesi. T.C. Yüzüncü Yıl Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Bahçe Bitkileri Anabilim Dalı, Doktora Tezi, 111s., Van.
12. Cangi R, Balta F, Doğan A (2000). Aşılı asma fidanı üretiminde kullanılan katlama ortamlarının fidan randıman ve kalitesi üzerine etkilerinin anatomik ve histolojik olarak incelenmesi. Turk J Agric For, 24: 393–398.
13. Chartier MP, Giantomasi MA, Renison D, Roig FA (2016). Exposed roots as indicators of geomorphic processes: A case-study from Polylepis mountain woodlands of Central Argentina. Dendrochronologia, 37: 57-63.
14. Chong SP, Abdul-Rahim K, Awang MR (2014). Histology study of Aquilaria malaccensis and the agarwood resin formation under light microscope. J. Agrobiotech., 5: 77-83.
15. Coşkun AD (2012). Bazı Klon Anaçlarına Aşılı Kayısı Çeşitlerinde Aşı Kaynaşmasının Anatomik- Histolojik Olarak İncelenmesi ve Fidan Gelişimlerinin Belirlenmesi. T.C. Adnan Menderes Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Bahçe Bitkileri Anabilim Dalı, Doktora Tezi, 183 s., Aydın.
16. Dolgun O, Ulas SS, Teker T (2016). Determination of graft success of grape cultivars grafted on two different roostocks. Acta Sci. Pol. Hortorum Cultus, 15 (4): 135-145.
17. Ermel FF, Poëssel JL, Faurobert M, Catesson AM (1997). Early scion/stock junction in compatible and incompatible pear/pear and pear/quince grafts: a histo-cytological study. Ann. Bot., 79: 505-515.
18. Estay C, Cautín R, Neaman A, Castro M (2016). Clonal propagation of the avocado: effects of the rooting step on graft union formation and development. Ciencia e Investigación Agraria, 43 (2): 233-241.
19. Falchi R, Petrussa E, Zancani M, Casolo V, Beraldo P, Nardini A, Sivilotti P, Calderan A, Herrera JC, Peterlunger E, Braidot E (2019). Summer drought stress: differential effects on cane anatomy and non-structural carbohydrate content in overwintering Cabernet Sauvignon and Syrah vines. BIO Web of Conferences, DOI: https://doi.org/10.1051/bioconf/20191303007 (Date of access: 24.05.2021)
20. Hanaoka S, Ohiro M, Matsushita M, Kariuki J (2016). Optimizing the size of root cutting in Melia volkensii Gürke for improving clonal propagation and production of quality planting stock. African Journal of Biotechnology, 15 (29): 1551-1558.
21. Harrison N, Harrison RJ, Barber-Perez N, Cascant-Lopez E, Cobo-Medina M, Lipska M, Conde-Ruíz R, Brain P, Gregory PJ, Fernández-Fernández F (2016). A new three-locus model for rootstock-induced dwarfing in apple revealed by genetic mapping of root bark percentage, Journal of Experimental Botany, 67 (6): 1871-1881.
22. Henderson F (2013). Leaf anatomy of the genus Leopoldinia (Arecaceae). The Journal of the Torrey Botanical Society, 140 (3): 369-372.
23. Hernández-Ledesma P, Terrazas T, Flores-Olvera H (2011). Comparative stem anatomy of Mirabilis (Nyctaginaceae). Plant Syst Evol, 292: 117-132.
24. Khotcharat N, Sdoodee S, Meesawat U (2016). Growth performance of clonal rubber rootstocks and combining ability test with the scion of clone RRIM 600. Agriculture and Natural Resources, 50: 98-103.
25. Kurt H (2000). Fıstık Çamında (Pinus pinea L.) Aşı Kaynaşması ve Çelik Köklenmesinin Anatomik ve Histolojik Olarak İncelenmesi Üzerine Bir Araştırma. T.C. Yüzüncü Yıl Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Bahçe Bitkileri Anabilim Dalı, Doktora Tezi, 52 s., Van.
26. Lima LKS, Soares TL, de Souza EH (2017). Initial vegetative growth and graft region anatomy of yellow passionfruit on Passiflora spp. rootstocks. Scientia Horticulturae, 215: 134-141.
27. Ljubojević M, Zorić L, Maksimović I, Dulić J, Miodragović M, Barać G, Ognjanov V (2017). Anatomically assisted cherry rootstock selection: Scientia Horticulturae 217: 197-208.
28. Martins AR, Soares MKM, Redher VLG, Bajay MM, Villela PMS, Zucchi MI, Appezato-da-Glória B (2014). Use of anatomical, chemical, and molecular genetic characteristics in the quality control of medicinal species: a case study of sarsaparilla (Smilax spp.). Economic Botany, 68 (4): 410-425.
29. Nalini MS, Shilpa KE, Basavarajappa S (2015). Stem gall of Michelia champaca L. (Magnoliaceae) induced by Podothrips sp.: Identification, histochemical and phytochemical studies. Tropical Plant Research, 2 (2): 90-100.
30. Navarro BL, Marques JPR, Appezzato-da- Glória B, Spósito MB (2019). Histopathology of Phakopsora euvitis on Vitis vinifera. European Journal of Plant Pathology, 1-9.
31. Olmstead MA, Lang NS, Ewers FW, Owens SA (2006). Xylem vessel anatomy of sweet cherries grafted onto dwarfing and nondwarfing rootstocks. J.Amer.Soc.Hort.Sci., 131 (5): 577-585.
32. Öztürk Çalı İ, Candan F (2011). Bitki Anatomisi Uygulamaları Kitabı, Nobel Yayınları, 112 s., Ankara. Plavcová L, Hoch G, Morris H, Ghiasi S, Jansen S (2016). The amount of parenchyma and living fibers affects storage of nonstructural carbohydrates in young stems and roots of temperate trees, American Journal of Botany, 103 (4): 603-612.
33. Polat M, Dolgun O, Yildirim A, Aşkın MA, Gökbayrak Z (2010). Graft union formation of spur apple varieties grafted on different rootstocks. Journal of Food, Agriculture & Environment, 8 (2): 490-493.
34. Pouzoulet J, Pivovaroff AL, Santiago LS, Rolshausen P (2014). Can vessel dimension explain tolerance toward fungal vascular wilt diseases in woody plants? Lessons from Dutch elm disease and esca disease in grapevine. Frontiers in Plant Science- Plant Physiology, 5 (253): 1-11.
35. Shtein I, Hayat Y, Munitz S, Harcavi E, Akerman M, Drori E, Schwartz A, Netzer Y (2017). From structural constraints to hydraulic function in three Vitis rootstocks. Trees, 31: 851-861.
36. Siebers T, Catarino B, Agusti J (2017). Identification and expression analyses of new potential regulators of xylem development and cambium activity in cassava (Manihot esculenta). Planta, 245: 539-548.
37. Song W, Yi J, Kurniadinata OF, Wang H, Huang X (2018). Linking fruit Ca uptake capacity to fruit growth and pedicel anatomy, a cross-species study, Front. Plant Sci., 9 (575) DOI: https://doi.org/10.3389/fpls.2018.00575 (Date of access: 24.05.2021)
38. Tekintaş FE (1991). Farklı anaçlar üzerine aşılanan turunçgil tür ve çeşitlerinde kaynaşmanın anatomik ve histolojik olarak incelenmesi üzerinde araştırmalar. YYÜZF Dergisi, 1(2): 68-81.
39. Tordable MC, Lax P, Magunacelaya JC, Doucet M (2012). Histopathological analysis of roots of Vitis vinifera cultivar Cabernet Sauvignon infected with Meloidogyne ethiopica. Nematropica, 42: 276-280.
40. Uma E, Muthukumar T (2014). Comparative root morphological anatomy of Zingiberaceae. Systematics and Biodiversity, 12 (2): 195-209.
41. Zwart L, Berger DK, Novungayo Moleleki L, Merwe NA, Myburg AA, Naidoo S (2017). Evidence for salicylic acid signalling and histological changes in the defence response of Eucalyptus grandis to Chrysoporthe austroafricana. Scientific Reports 7, https://www.nature.com/articles/srep45402 (Date of access: 24.05.2021)