Kromatografiye Giriş, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi Kullanımında Basit İpuçları

Öz

Tıbbi Laboratuvardan ilaç sanayiine, gıdadan veterinerlik,

ziraate; kimyadan çeşitli sanayii dallarına kadar çok geniş bir

yelpazede kullanım alanı bulan kromatografi; ölçüm, ayrıştırma

ve saflaştırma gibi değişik amaçlar için kullanılmaktadır. Farklı

alanlarda ve çeşitli yöntemlerle kullanılan kromatografinin

en önemli, etkin ve yaygın kullanım alanına sahip olanı ise

Likit Kromatografi temeline dayanan yüksek performanslı sıvı

kromatografisi (HPLC) ve Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometri

(LC-MS/MS) cihazlarıdır.

Kromatografi bir karışım içerisindeki bileşikleri birbirinden

ayırmak ve maddeleri saflaştırmak için kullanılan bir yöntemdir

ve ana amacı hedeflediğimiz numunenin ayrımının yapılması ve

miktarının ölçülmesidir. Bu yöntem, çeşitli maddelerin, hareketli

bir faz yardımıyla, sabit bir faz üzerinde, değişik hızlarla hareket

etmeleri veya sürüklenmeleri esasına dayanır.

Bu derlemedeki amacımız kromatografiye giriş, kromatografik

yöntemlere genel bir bakış, ardından HPLC ve LC-MS/MS

cihazlarını tanıtmak ve kısa bir örnek ile metot geliştirme basamağı

hakkında bilgi vermek, HPLC ve LC-MS/MS cihazlarıyla çalışma

yaparken, metot geliştirirken araştırmacılara ve teknikerlere yol

göstermektir.

Anahtar Kelimeler

• Kromatografi,HPLC,LC-MS/MS

Introduction to Chromatography, Basic Working Tips for High Performance Liquid Chromatography

Öz

Chromatography that finds usage in a wide range of fields from

medical laboratories to the pharmaceutical industry, from food to

veterinary medicine, agriculture, chemistry to different industrial

branches; is used for various purposes such as measurement,

separation and purification. The most important, effective and

common use of chromatography by various methods for different

fields is liquid chromatography which is based on high performance

liquid chromatography (HPLC) and LC-MS/MS devices.

Chromatography is a method used to separate and purify the

compounds in a mixture. The main aim of chromatography is

separation and measurement of the amount of our target sample.

This method is based on the principle of moving or drifting the

various materials at different speeds on a stationary phase by a

mobile phase.

The purpose of this article is to introduce an overview of

chromatographic methods, followed by introduction of by

descending to the basics of HPLC and to give brief information

about a sample analysis and method development step. We hope

that this article will shed light for researchers and technicians

in developing methods and working at HPLC and LC-MS / MS

instruments.

Anahtar Kelimeler

• Chromatography,HPLC,LC-MS/MS

Kaynakça

1. 1. Yıldız A, Genç Ö, Bektaş S. Enstrümental Analiz Yöntemleri. Hacettepe Üniversitesi Yayınları. Ankara. 1997.
2. 2. Burtis CA, Ashwood RA, Çeviri Editörü: Prof.Dr.Diler Aslan. Tietz Klinik Kimyada Temel İlkeler, 5.Baskıdan Çeviri (Palme). 2007
3. 3. Skoog DA, Holler FJ, Nieman TA. Çeviri Editörleri:Kılıç E, Yılmaz H. Enstrümantal Analiz İlkeleri. 6. Baskıdan çeviri. Bilim yayıncılık, Ankara
4. 4. Pathy KS ,Murthy YLN, Sunithasarma, Ramaiah A. Basıc Skılls Traınıng Guıde – HPLC method development and validation – an overview
5. 5. Pathy KS. How to Start Analytıcal Method Development
6. 6. Fırat Üniversitesi Fen Fakültesi Kimya Bölümü. Enstrumental Analiz Laboratuvarı Deney Föyü. 2013
7. 7. Prof. Dr. Ulvi Reha Fidanci. Kromatografi. Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi. http://ulvireha.fidanci.org/kromatografi/
8. 8. İşlekel H. LC-Tandem MS-MRM Temel Araştırma ve Klinik Laboratuvarda Kullanım. Dokuz Eylül Üniversitesi Tıp Fakültesi. 2011 (http://www.turkbiyokimyadernegi.org.tr/ dosyalar/belgeler/kongre/huray-islekel.pdf)

9. 9. Biberoğlu G. Kütle Spektrometresi ve Tıp Alanında Kullanımı. T Klin Tıp Bilimleri 2003, 23:491-498
10. 10. Aguilar, M.I. (2004). HPLC of Peptides and Proteins Methods and Protocols. Totowa, New Jersey: Humana Press Inc.
11. 11. Snyder, L.R., Kirkland, J.J., Glajch, J.L. (2012). Practical HPLC Method Development (Second Edition). Canada: John Wiley & Sons, Inc.
12. 12. Boyer R. Biochemistry Laboratory: Modern Theory and Techniques. Benjamin Cummings, San Francisco, A.B.D. 2009
13. 13. Gault V. A. and McClenaghan, N. H. Understanding Bioanalytical Chemistry. Principles and Applications. Wiley-Blacwell, Fabulous Printers Pte. Ltd., Singapore, 2009
14. 14. Reed R., Holmes D., Weyers J., Jones A. Practical Skills in Biomolecular Sciences. Second Edition, Pearson Education, 2003.
15. 15. Boyer R. Concepts and Skills in the Biochemistry/Molecular Biology Lab. Biochemistry and Molecular Biology Education 31(2): 102–105, 2003
16. 16. Büyüköztürk, Ş., Kılıç Çakmak E., Akgün, Ö. E., Karadeniz, Ş., ve Demirel, F.. Bilimsel Araştırma Yöntemleri, Ankara, Pegem A Yayıncılık, 2008.
17. 17. Clark, I.M. (2001). Matrix Metalloproteinase Protocols. Totowa, New Jersey: Humana Press Inc.
18. 18. Clark, I.M. (2010). Matrix Metalloproteinase Protocols (Second Edition). London: Springer Science+Business Media, LLC, Humana Press Inc.
19. 19. Fernandez-Patron, C., Zouki, C., Whittal, R.M., Chan, J.S., Davidge, S.T., Filep, J. (2002). Methods for Analysis of Matrix Metalloproteinase Regulation of Neutrophil- Endothelial Cell Adhesion. Biol Proced Online, Oct 28;4:38-48.
20. 20. Kotnik P, Krajnc MK, Pahor A, Finšgar M, Knez Ž. HPLC-MS/MS method optimisation for matrix metalloproteinase 3 and matrix metalloproteinase 9 determination in human blood serum using target analysis. J Pharm Biomed Anal. 2018 Feb 20;150:137-143.
21. 21. Wang Y, Zagorevski DW, Lennartz MR, Loegering DJ, Stenken JA. Detection of in vivo Matrix Metalloproteinase Activity using Microdialysis Sampling and Liquid Chromatography-Mass Spectrometry. Anal Chem. 2009 Dec 15; 81(24): 9961–9971.