Klorprifos-etil'in HEPG2 hücre dizilerinde hücre canlılığına etkisi ve melatoninin koruyucu etkisi

SüleymanDemirel Üniversitesi TIP FAKÜLTESİ DERGİSİ: 2003 Eylül; 10(3) Klorprifos-etil'in HEPG2 hücre dizilerinde hücre canlılığına etkisi ve melatoninin koruyucu etkisi Sultan Patat, Hakan Akça, Süleyman Kaleli, Inanç Karakoyun, Ahmet Koçak, Fatih Gültekin Özet Klorprifos-etil (KE), yaygın olarak kullanılan organofosfat insektisitlerden biridir. Bu çalışmada, KE'in insan karaciğer hücre dizisi HepG2 üzerine sitotoksik etkisini ve melatoninin koruyucu etkisini araştırdık. Çalışma grupları şu şekilde organize edildi: 1. Kontrol grubu (Diğer grupların canlılık oranları bu gruba göre değerlendirildi.) 2. KE grubu (Değişik dozlarda KE ile muamele edildi.) 3.Melatonin+ KE grubu (Değişik dozlarda KE'ye ek olarak melatonin eklendi.) Hücreler 96 well petri kaplarına her well'de 3x105 olacak şekilde ekildi. 24 saat sonra KE grubundaki hücreler 1080, 540, 270, 135, 67.5, 33.7, 16.8, 8.4, 4.2, 2.1, 1 ve 0.5 mikrogram/ml0 konsantrasyonlarında KE ile 72 saat 37 oC'de inkübe edildiler. Melatonin+KE grubundaki HepG2 hücreleri ise1 saat 10 mg/l konsantrasyonunda melatonin ile ön inkübasyona alındıktan sonra değişen KE konsantrasyonları ile 72 saat muamele edildiler. Daha sonra KE ve KE+M gruplarında hücre canlılığı belirlendi. KE verilen HepG2 hücrelerinin canlılığı kontrol grubundaki hücrelere oranla anlamlı olarak düşük bulunmuş- tur. KE'nin sitotoksisitesi uygulanan KE konsantrasyonuyla ilişkili bulunmuştur. KE konsantrasyonu düştükçe sitotoksisite de buna paralel olarak azalmıştır (Kruskal-Wallis Test p=0.024). Buna ek olarak çalış- mamızda melatoninle bir saat inkübe edilen HepG2 hücrelerine KE uygulaması melatonin uygulanmayan gruba oranla hücre canlılığını anlamlı olarak artmıştır (Mann Whitney U Test, p<0.05). Sonuç olarak KE'in insan karaciğer hücre dizisi HepG2 üzerine in vitro şartlarda uygulanmasıyla, bu hücrel- er üzerinde anlamlı olarak sitotoksik etki gösterdiği, melatonin uygulanması ise karaciğer hücre dizilerini klorprifos-etil sitoksisitesinden önemli derecede koruduğu sonucuna varılmıştır. Anahtar kelimeler: organofosfat, klorprifos, hücre kültürü, HepG2, melatonin. Abstract The effect of chlorpyrifos-ethyl on cell viability in HEPG2 cell lines and protective role of melatonin Chlorpyrifos-ethyl (CE) is one of the organophosphate insecticies which are commonly used . In this study, we investigated the cytotoxic effect of Chlorpyrifos-ethyl onto HepG2 liver cells and melatonin's protecting effect. The working groups were arranged as shown : 1. Control group (Other group's viability percentage were evaluated comparing to this group) 2. CE group (The treatment was made with different dosages of CE) 3. M+CE group (Melatonin was added to the different dosages of CE) HepG2 cells were seeded in 96-well plates (3x105 cells/well). Each of 3x105 cells were put into 96 well Petri cups. After 24 hours the cells in CE group were incubated with Chlorpyrifos-ethyl with the doses of 1080, 540, 270, 135, 67.5, 33.7, 16.8, 8.4, 4.2, 2.1, 1 and 0.5 microg/ml in 37°C for 72 hours. On the other hand, the HepG2 cells in the M+CE group were pre-incubated with melatonin with the dose of 10 mg/l for an hours and were handled with the chancing CE concentration for 72 hours. After that, the cell viability of CE and M+CE groups were established. The viability of HepG2 cells in CE treated group was found lower than the cels which were chosen to control.This was found related to the CE concentration. As the Chlorpyrifosethl concentration decreases the cytotoxic rate decreases (Kruskal-Wallis Test p=0.024). The viability of the HepG2 cells incubated with mela- tonin for one hour before the CE application found to increased (Mann Whitney U Test, p<0,05). As a result; it was concluded that when CE was superimposed onto HepG2 liver cell series in in vitro condi- tions, it showed significantly cytotoxical effect, and melatonin protected the liver cells from the cytotoxic effect of CE. Keywords: Organophosphate, chlorpyrifos, cell-culture, HepG2, melatonin