General View on Gateway Cloning Technology Faster, Easier, More Accurate Cloning Method

Abstract

Esposito and Mike Brasch. This technology is an universal cloning method based on the site-specific recombination properties of bacteriophage lambda. The Gateway Cloning is performed in two steps. The first step, called BP recombination, the reaction between an attB-flanked DNA fragment and an attP-containing donor vector to generate an entry clone by BP clonase. The second step is called as LR Reaction. In this stage, attL-containing entry clone is transfered to attR-containing destination vector via LR clonase to generate an attB-expression clone. GCT have lots of advantages. Advanced cloning technology, provides a rapid and highly efficient way to move DNA sequences into multiple vector systems for functional analysis and protein expression. GCT easily accommodates the transfer of a large number of DNA sequences into multiple destination vectors and suitable for adaptation to high-throughput formats. GCT allows easy conversion of your favorite vector into a Gateway destination vector. It is a usefull system to be used in vaccine and drug development researches. As result, it is recommended that this technic would be preferred by scientists particulary on drug and vaccine development

Keywords

• Gateway cloning technology

Gateway Klonlama Teknolojisine Genel Bakış Daha Hızlı, Daha Kolay, Daha Etkin Bir Klonlama Yöntemi

Öz

Gateway Klonlama Teknolojisi GKT , James Hartley, Dominic Esposito ve Mike Brasch adlı araştırmacılar tarafından geliştirilmiştir. Bu teknoloji temel olarak, bakteriyofaj lambdanın spesifik rekombinasyon özelliklerine göre ayarlanabilen, evrensel bir klonlama yöntemidir. Gateway Klonlama iki aşamada gerçekleştirilmektedir. Amplifiye edilen ve attB içeren PCR ürününün, attP içeren uygun bir donör vektörle BP klonaz enzimi yardımıyla birleşerek attL içeren bir giriş klonu meydana getirdikleri aşama BP olarak adlandırılan birinci aşamadır. İkinci aşama ise LR aşaması olarak adlandırılmaktadır. Bu aşamada, BP aşaması ile elde edilen giriş klonu, attR içeren hedef vektöre LR klonaz enzimi yardımıyla transfer edilerek, attB içeren hedeflenen klon elde edilmektedir. GKT’nin birçok avantajı bulunmaktadır. Bu ileri klonlama teknolojisi, hızlı ve etkili bir şekilde DNA zincirinin çoklu vektör sistemine uygulanarak istenen proteinin elde edilmesini ve fonksiyonel analizinin yapılmasını olanaklı kılmaktadır. Ayrıca çok sayıda genetik DNA zincirinin çoklu sayıda hedeflenen vektörlere transferini sağlamaktadır. Çok sayıda örneklerin uygulanmasına uygun formatta adapte edilebilmektedir. İstenen vektör, hedeflenen gateway vektörüne kolaylıkla transfer edilebilmektedir. Sonuç olarak GKT’nin başarılı sonuçları ve avantajları nedeniyle; özellikle aşı ve ilaç geliştirme çalışmalarında ülkemiz bilim insanlarınca da tercih edilmesi önerilir

Anahtar Kelimeler

• Gateway klonlama teknolojisi

Kaynakça

1. Watt P. Screening for peptide drugs from the natural repertoire of biodiverse protein folds. Nat Biotechnol, 2006; 24 (2): 177-83.
2. Hartley JL, Temple GF, Brasch MA. DNA Cloning Using in vitro site-specific recombination. Genome Research, 2000; 10: 1788-95.
3. Landy A. Dynamic, Structural, and regulatory aspects of lambda site-specific recombination. Ann Rev Biochem, 1989; 89: 913-49.
4. Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA, Struhl K. Current Protocols in Molecular Biology. New York: Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience 1994.
5. Bernard P, Couturier M. Cell Killing by the F Plasmid CcdB Protein involves poisoning of DNA-topoisomerase II complexes. J Mol Biol, 1992: 226; 735-45.
6. Bernard P, Kezdy KE, Melderen LV, Steyaert J, Wyns L, Pato ML, Higgins PN, Couturier M. The F plasmid CcdB protein induces efficient ATP-dependent DNA cleavage by gyrase. J Mol Biol, 1993; 234: 534-41.
7. Kozak M, Landy A Gateway Technology A universal technology to clone DNA sequences for functional analysis and expression in multiple systems. Catalog nos. 12535-019. Version E. 22. 2003.
8. Calmels T, Parriche M, Burand H, Tiraby G. High efficiency transformation of Tolypocladium geodes conidiospores to phleomycin resistance. Curr Genet, 1991; 20: 309-14.

9. Drocourt D, Calmels TPG, Reynes JP, Baron M, Tiraby G. Cassettes of the Streptoalloteichus hindustanus ble Gene for transformation of lower and higher eukaryotes to phleomycin resistance. Nucleic Acids Res,1990; 20: 40-49.
10. Aaron J, Patton Gateway Cloning Technology Overview. http://www.lifetech.com/gateway Interview. Life Technologies 2009.
11. Gatignol A, Baron M, Tiraby G. Phleomycin Resistance Encoded by the ble Gene from Transposon Tn5 as a Dominant Selectable Marker in Saccharomyces cerevisiae. Mol Gen Genet, 1987; 2007: 342-8.
12. Kertbundit S, Greve H, Deboeck F, Montagu MV, Hernalsteens JP. In vivo Randomb-glucuronidase Gene Fusions in Arabidopsis thaliana. Proc Natl Acad Sci USA, 1991; 88: 5212-6.
13. Kozak M. An analysis of 5´-noncoding sequences from 699 vertebrate messenger RNAs. Nucleic Acids Res,1987; 15: 8125-48.