Riskli hastalarda metisiline dirençli Staphylococcus aureus taşıyıcılığının belirlenmesinde hızlı tanı testlerinin değerlendirilmesi

Öz

Amaç: Metisilin dirençli Staphylococcus aureus MRSA tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de mortalitesi yüksek hastane kökenli enfeksiyonlara yol açan bir bakteridir. Hastanelerde MRSA kaynağı sıklıkla MRSA ile kolonize veya enfekte hastalar ve MRSA taşıyıcısı sağlık çalışanlarıdır. Günümüzde MRSA taraması amacı ile kullanılan klasik kültür yöntemlerinin geç sonuç vermesi nedeniyle, taşıyıcıların saptanmasında hızlı ve güvenilir tanı yöntemlerine giderek daha fazla ihtiyaç duyulmaktadır. Bu araştırmada riskli hastalarda MRSA taşıyıcılığının belirlenmesinde CHROMagar’ın ve moleküler yöntemlerden GeneOhm MRSA gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonunun PZR kullanılabilirliği değerlendirilmiştir. Yöntem: Celal Bayar Üniversitesi Hastanesi Yoğun Bakım Üniteleri’nde tedavi edilmekte olan ve MRSA enfeksiyonu için risk taşıyan 131 hasta ve bu hastalar ile temas eden 46 sağlık personeli olmak üzere toplam 177 kişiden burun sürüntüsü örneği alınmıştır. Kültür yöntemi olarak koyun kanlı agara ve CHROMagar’a doğrudan ekim yöntemi ve triptik soy broth’da zenginleştirme aktarma ekimi kullanılmıştır. PZR yöntemi üretici firmanın önerilerine uygun olarak Smart Cycler II hızlı DNA amplifikasyon sistemi ile çalışılmıştır. Bulgular: Geleneksel kültür yöntemi olan koyun kanlı agara ekilen örneklerin %15,3’ünde, kromojenik agara yapılan ekimlerin %18,6’sında, zenginleştirilmiş besiyerinde bekletildikten sonra kromojenik agara ekilen örneklerin %20,3’ünde MRSA ürediği görülmüştür. Araştırmada en duyarlı %97,3 ve özgül %100 kültür yöntemi olarak triptik soy broth’un kullanıldığı zenginleştirme yöntemi bulunmuştur. En hızlı kültür yöntemi olan kromojenik agara doğrudan ekim yönteminin duyarlılığı %89,2, özgüllüğü %100 olarak değerlendirilmiştir. GeneOhm MRSA PZR’nin duyarlılığı %97,3 ve özgüllüğü %100 ise zenginleştirme yöntemi ile benzer bulunmuştur. Sonuç: Testlerin sonuçları ve maliyetleri göz önüne alınarak, riskli hastaların aktif sürveyans taramalarında ön zenginleştirme de triptik soy broth kullanılarak veya doğrudan ekim yapılarak kromojenik agarın kullanılabileceği düşünülmüştür

Anahtar Kelimeler

• MRSA, taşıyıcılık, kültür, kromojenik agar, polimeraz zincir reaksiyonu

Evaluation of rapid tests for determination of methicillin resistant Staphylococcus aureus carriage in high risk patients

Öz

Objective: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus MRSA is a bacterium that causes hospitalacquired infections with high mortality in our country as well as all over the world. Source of MRSA in hospitals are often patients who are colonized or infected with MRSA and health care employees who are carriers of MRSA. Nowadays, because of the delayed screening results of conventional culture methods used for detecting MRSA carriers, it is more and more needed to have fast and reliable diagnostic methods. This study evaluated the usability of GeneOhm MRSA real-time polymerase chain reaction PCR , a molecular method, and CHROMAgar in the determination of MRSA carriage among the patients at risk of MRSA carriage. Method: Nasal swap samples were taken from a total of 177 subjects, 131 patients who were undergoing treatment in the Intensive Care Units of Celal Bayar University Hospital at high risk for MRSA infection and 46 medical personnel in contact with these patients. With regard to culture, direct inoculation to sheep blood agar, direct inoculation to CHROMAgar and inoculation to CHROMAgar after enrichment in trypticase soy broth were used. The PCR method was performed with the Smart Cycler II rapid DNA amplification system in accordance with the manufacturer’s recommendations.Results: It was determined that MRSA grew in 15.3% of the specimen inoculated to sheep blood agar, the classical culture method, and in 18.6% of the specimen inoculated to chromogenic agar while it grew in 20.3% of the specimens inoculated to chromogenic agar after enrichment. Results showed that enrichment trypticase soy broth yielded the highest sensitivity 97.3% and specificity 100% . It was evaluated that the fastest method was the method of direct inoculation to chromogenic agar with sensitivity and specificity of 89.2% and 100%, respectively. With 97.3% sensitivity and 100% specificity, GeneOhm MRSA PCR was comparable to enrichment method. Conclusion: Taking into account the test results and costs, it would be suggested that the chromogenic agar with direct incubation or pre-enrichment in tryptic soy broth can be used for the surveillance screening of the patients at high risk

Anahtar Kelimeler

• MRSA, carrier, culture, chromogenic agar, polymerase chain reaction

Kaynakça

1. 1. Kocagöz S, Öztop AY. Methicillin resistant Staphylococcus aureus in Turkey. Lancet Infect Dis, 2005; 5(10): 659-60.
2. 2. Dokuzoğuz B. Metisiline dirençli Staphylococcus aureus'a bağlı hastane infeksiyonlarının epidemiyolojisi ve kontrolü. In: Ulusoy S, Usluer G, Ünal S eds. Önemli ve Sorunlu Gram Pozitif Bakteri İnfeksiyonları. Birinci Baskı. Ankara: Bilimsel Tıp Yayınevi, 2004: 55-71.
3. 3. Wertheim HFL, Meles DC, vas MC, van Leeuwen W, van Belkum A, Nouwen JL. The role of nasal carriage in Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis, 2005; 5(12): 751-62.
4. 4. Kluytmans J. Control of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and the value of rapid tests. J Hosp Infect, 2007; 65 (S2): 100-4
5. 5. Struelens MJ. Rapid identification of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and patient management. Clin Microbiol Infect, 2006; 12 (suppl 9): 23-6.
6. 6. Paule SM, Hacek DM, Kufner B et al. Performance of the BD GeneOhm methicillin resistant Staphylococcus aureus test before and during highvolume clinical use. J Clin Microbiol, 2007; 45(9): 2993-8.
7. 7. Diekema DJ, Edmond MB. Look before you leap: active surveillance for multidrug-resistant microorganisms. Clin Infect Dis, 2007; 44(8): 1101-7.
8. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute, Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: Eighteenth Informational Supplement, Volume 28, Number 1, CLSI document M100-S18, 2008, Wayne, PA.

9. 9. Gülay Z. Çoklu dirençli hastane infeksiyonu kontrolünde hızlı tanı testleri. ANKEM Derg, 2009; 23 (Ek 2): 193-200.
10. 10. Tacconelli E, De Angelis G, de Waure C, Cataldo MA, La Torre G, Cauda R. Rapid screening tests for methicillin-resistant Staphylococcus aureus at hospital admission: systematic review and metaanalysis. Lancet Infect Dis, 2009; 9(9): 546-54.
11. 11. French GL. Methods for screening for methicillin resistant Staphylococcus aureus carriage. Clin Microbiol Infect, 2009; 15 Suppl 7: 10-6.
12. 12. Nonhoff C, Denis O, Brenner A, Buidin P, Legros N, Thiroux C, et al. Comparison of three chromogenic media and enrichment broth media for the detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus from mucocutaneous screening specimens. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2009; 28(4): 363-9.
13. 13. Brown DF, Edwards DI, Hawkey PM, Morrison D, Ridgway GL; Towner KJ, et al. Guidelines for the laboratory diagnosis and susceptibility testing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). J Antimicrob Chemother, 2005; 56(6): 1000-18.
14. 14. Wolk DM, Marx JL, Dominguez L, Driscoll D, Schifman RB. Comparison of MRSASelect Agar, CHROMagar methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Medium, and Xpert MRSA PCR for detection of MRSA in nares: Diagnostic accuracy for surveillance samples with various bacterial densities. J Clin Microbiol, 2009; 47(12): 3933-6.
15. 15. Ben Nsira S, Dupuis M, Leclercq R. Evaluation of MRSA Select, a new chromogenic medium for the detection of nasal carriage of methicillin resistant Staphylococcus aureus. Int J Antimicrob Agents, 2006; 27(6): 561-4.
16. 16. Flayhart D, Hindler JF, Bruckner DA, Hall G, Shrestha RK, Vogel SA, et al. Multicenter evaluation of BBL CHROMagar MRSA medium for direct detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus from surveillance cultures of the anterior nares. J Clin Microbiol, 2005; 43(11): 5536-40.
17. 17. Louie L, Soares D, Meaney H, Vearncombe M, Simor AE. Evaluation of a new chromogenic medium, MRSA Select, for detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol, 2006; 44(12): 4561-3.
18. 18. Uçkay I, Sax H, Iten A, Camus V, Renzi G, Schrenzel J, et al. Effect of screening for methicillin resistant Staphylococcus aureus carriage by polymerase chain reaction on the duration of unnecessary preemptive contact isolation. Infect Control Hosp Epidemiol, 2008; 29(11): 1077-9.
19. 19. Çay M. Metisiline dirençli Staphylococcus aureus‘un polimeraz zincir reaksiyonu ile hızlı tanısı. Yüksek Lisans Tezi, Gazi Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Farmasötik Mikrobiyoloji AD, 2007.
20. 20. Farley JE, Stamper PD, Ross T, Cai M, Speser S, Carroll KC. Comparison of the BD GeneOhm methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) PCR assay to culture by use of BBL CHROMAgar MRSA for detection of MRSA in nasal surveillance cultures from an at risk community population. J Clin Microbiol, 2008; 46(2): 743-6.
21. 21. DeSan N, Denis O, Gasasira MF, De Mondenca R, Nonhoff C, Struelens M. Controlled evaluation of the IDI-MRSA assay for detection of colonization by methicillin-resistant Staphylococcus aureus in diverse mucocutaneous specimens. J Clin Microbiol, 2007; 45(4): 1098-1101.