Çiğ sütlerden izole edilen bazı Pseudomonas bakterilerinin proteolitik, lipolitik aktivitelerinin ve antibiyotik duyarlılıklarının araştırılması

Öz

Amaç: Pseudomonas bakterileri proteaz ve lipaz gibi yüksek sıcaklıklarda kararlı ekstraselüler enzimleri sentezlerler. Bu nedenle Pseudomonas türleri çiğ veya pastörize sütte bozulmadan sorumlu en yaygın organizmalardır. Bu çalışmanın amacı, çiğ sütlerden izole edilen 15 adet Pseudomonas suşunun antibiyotik duyarlılığı, proteolitik ve lipolitik aktivitelerini belirlemektir.Yöntem: Bu çalışmada incelenen 15 adet Pseudomonas spp. suşu Türkiye’de Kayseri ve Niğde illerinden toplanan 50 adet çiğ süt örneğinden izole edilmiştir. Örnekler, laboratuvara transfer edilene kadar düşük sıcaklıkta muhafaza edilmiş ve 24 saat içerisinde analize alınmıştır. İzole edilen suşlar Analitik Profil İndeks API 20 NE kullanılarak tanımlanmıştır.proteolitik ve lipolitik aktiviteleri Skim Milk Agar SMA ve Tribütirin Agar TA besiyerlerinde test edilmiştir. Bir gecelik kültürlerden besiyerlerine nokta ekim yapılmıştır. İnkübasyondan sonra SMA ve TA besiyerlerinde oluşan zonlar kumpas ile ölçülmüştür. Aynı zamanda, suşların yedi antibiyotiğe karşı duyarlılıkları test edilmiştir. Pseudomonas spp suşlarının antibiyotiklere karşı duyarlılığı ampisilin 10 μg , amikasin 30 μg , gentamisin 10 μg , oflaksasin 5 μg , tetrasiklin 30 μg , kloramfenikol 30 μg ve sefuroksim 30 μg antibiyotikler için disk difüzyon yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. Sonuçlar CLSI standartlarına göre yorumlanmıştır.Bulgular: Proteolitik aktiviteye sahip olduğu saptanan 14 Pseudomonas suşunun bu aktivitelerinin 14,2 ve 55,0 mm zon çapları arasında olduğu bulunmuştur. Lipolitik aktivite gösteren 13 suşun aktivitelerinin 5,3 ve 29,3 mm zon çapları arasında olduğu bulunmuştur. Test edilen Pseudomonas antibiyotiklere karşı duyarlı, %35’inin dirençli ve %8’sinin orta duyarlı olduğu belirlenmiştir.suşlarının %57’sinin Sonuç: Çalışmamız ilaç sanayi ve diğer sektörlerde kullanılan ve ekonomik faydalarına yönelik konulara ışık tutacaktır.mikrobiyal enzimlerin saflaştırılması

Anahtar Kelimeler

• Pseudomonas spp., tanımlama, antibiyotik duyarlılığı, proteolitik aktivite, lipolitikaktivite

Investigation of proteolytic, lipolytic activities and antibiotics susceptibility of some Pseudomonas bacteria isolated from raw milks

Öz

Objective:Pseudomonas bacteria secrete extracellular enzymes, extremely stable to high temperatures such as protease and lipase. Accordingly, Pseudomonas species are the most common organisms in raw or pasteurized milk at the time of spoilage. The aim of this study was to determine antibiotic sensitivity, proteolitic and lipolytic activity of fifteen Pseudomonas spp. strains isolated from raw milk samples.Method: In the study, 15 Pseudomonas spp. strains were isolated from 50 raw milk samples collected from Kayseri and Nigde provinces in Turkey. The samples were maintained at low temperature during transfer to the laboratory and analyzed within 24 hrs. Isolated strains were identified by using Analytical Profile Indeks API 20 NE . Proteolytic activities and lipolytic activities of Pseudomonas strains were tested in Skim Milk Agar SMA medium and in Tributyrin Agar TA medium. Overnight cultures were spot inoculated onto media. After incubation, the transparent zones of bacteria on the SMA and TA media were measured by calper rule. Also, the Pseudomonas spp. strains were tested for their susceptibility to seven antibiotics. Antibiotic susceptibility tests of Pseudomonas spp. strains to ampicillin 10 μg , amikacin 30 μg , gentamicin 10 μg , oflaxacin 5 μg , tetracyclin 30 μg , chloramphenicol 30 μg , cefuroxime 30 μg were determined by using the disc diffusion method. The results were described according to CLSI standards. Bulgular: Proteolitik aktiviteye sahip olduğu saptanan 14 Pseudomonas suşunun bu aktivitelerinin 14,2 ve 55,0 mm zon çapları arasında olduğu bulunmuştur. Lipolitik aktivite gösteren 13 suşun aktivitelerinin 5,3 ve 29,3 mm zon çapları arasında olduğu bulunmuştur. Test edilen Pseudomonas antibiyotiklere karşı duyarlı, %35’inin dirençli ve %8’sinin orta duyarlı olduğu belirlenmiştir.suşlarının %57’sinin Sonuç: Çalışmamız ilaç sanayi ve diğer sektörlerde kullanılan ve ekonomik faydalarına yönelik konulara ışık tutacaktır.mikrobiyal enzimlerin saflaştırılması

Anahtar Kelimeler

• Pseudomonas spp., identification, antibiotic susceptibility, proteolytic activity, lipolytic activity

Kaynakça

1. 1. Cousin MA. Presence and activity of psychrotrophic microorganisms in milk and dairy products: a review. J Food Prot, 1982; 45: 172–207.
2. 2. Sorhauge T, Stepaniak L. Psychrotrophs and their enzymes in milk and dairy products: quality aspects. Trends Food Sci Technol, 1997; 8: 35-41.
3. 3. Braun P, Fehlhaber K. Combined effect of temperature, aw and pH on enzymatic activity of spoilage causing bacteria. Milchwissenschaft, 2002; 57: 134-6.
4. 4. Ma YD, Barbano M, Santos M. Effect of CO2 addition to raw milk on proteolysis and lipolysis at 4°C. J Dairy Sci, 2003; 86: 1616-31.
5. 5. Vyletělová M, Hanuš O. Effect of contamination by Pseudomonas fluorescens on principal components and technological parameters of pasteurized milk during storage. Czech J Food Sci, 2000; 18: 224–34.
6. 6. Nwosu VC. Antibiotic resistance with particular reference to soil microorganisms. Res Microbiol, 2001; 152: 421–30.
7. 7. Alatossava PM, Alatossava T. Antibiotic resistance of raw-milk associated psychrotrophic bacteria. Microbiol Res, 2007; 162: 115-23.
8. 8. Beena AK, Ranjini AR, Riya TG. Isolation of psychrotrophic multiple drug resistant Pseudomonas from pasteurised milk. Veterinary World, 2011; 4(8): 349-52.

9. 9. Uraz G, Çıtak S. An investigation about the distribution and isolation of Pseudomonas from raw milk samples obtained from different areas. Turk J Agric For, 1998; 22: 469–74.
10. 10. Rajmohan S, Dodd CER, Waites WM. Enzymes from isolates of Pseudomonas fluorescens involved in food spoilage. J Appl Microbiol, 2002; 93: 205-13.
11. 11. Palleroni NJ. Pseudomonas classification. Anton. Leeuw, 1993; 64: 231-51.
12. 12. Erskine RJ, Unflat JG, Eberhart RJ, Hutchinson LJ, Hicks CR, Spencer SB. Pseudomonas mastitis: Difficulties in detection and elimination from contaminated wash-water systems. J Am Vet Med Assoc, 1987; 191 (7): 811-5.
13. 13. Jay JM. Taxonomy, Role, and Significance of Microorganisms in Food. In: Modern Food Microbiology. Gaithersburg MD, Aspen Publishers, 2000; p. 13.
14. 14. Vachée A, Mossel DAA, Leclerc A. Antimicrobial activity among Pseudomonas and related strains of mineral water origin. J Appl Microbiol, 1997; 83: 652-8.
15. 15. Wiedmann M, Weilmeier D, Dineen SS, Ralyea R, Boor KJ. Molecular and phenotypic characterization of Pseudomonas isolated from milk. Appl Environ Microb, 2000; 66(5): 2085-95.
16. 16. Palleroni NJ. Human and Animal Pathogenic Pseudomonas. The Prokaryotes- A Handbook on the Biology of Bacteria, Volume: 6, Springer-Verlag, New York, 1992; p. 1194.
17. 17. Riesenfeld CS, Goodman RM, Handelsman J. Uncultured soil bacteria are a reservoir of new antibiotic resistance genes. Environ Microbiol, 2004; 6: 981-90.
18. 18. Abad P, Villafafila A, Frias JD, Rodriguez-Fernandez C. Extracellular lipolytic activity from Pseudomonas fluorescence biovar1 (Pseudomonas fluorescencs Ncl). Milchwissenschaft, 1993; 48 (12): 680-3.
19. 19. Malik RK, Prasad R, Mathur DK. Effect of some nutritional and environmental factors on extracellular protease production by Pseudomonas sp. B-25. Lait, 1985; 65: 169-83.
20. 20. Matselis E, Roussis IG. Proteinase and lipase production by Pseudomonas fluorescens. Proteolysis and lipolysis in thermized ewe's milk. Food Control, 1998; 9: 251-9.
21. 21. Sorhauge T, Stepaniak L. Microbial Enzymes in the Spoilage of Milk and Dairy Products, In: Food Enzymology Vol. I (P.F., Fox, ed.), Elsevier Applied Sci., London, 1991; p. 169-218.
22. 22. Vyletělová M, Hanuš O, Urabanova E, Kopuenecz P. Occurrence and identification of proteolytic and lipolytic and psychotropic bacteria in bulk cow milk. Veterinar. St Vi, 1999; 49(11): 480-2.
23. 23. Craven H, Macauley BJ. Microorganisms in pasteurised milk after refrigerated storage 1. identification of types. Aust J Dairy Tech, 1992; 42: 38-45.
24. 24. Craven H, Macauley BJ, Microorganisms in pasteurised milk after refrigerated storage 3. effect of milk processor. Aust J Dairy Tech, 1992; 42: 50-5.
25. 25. Stewart DB, Murray JG, Neill SD. Lipolytic activity of organisms isolated from refrigerated bulk milk. Annual Bulletin, Int. Dairy Fed, 1975; 86: 38-50.
26. 26. Al-Ashmawy MA, Al-Shimaa El-Dyasety A. Lipolytic and proteolytic activities of Psedomonas spp. isolated from table butter. Mansoura Vet Med J, 2008; 10 (1): 73-8