Assessment of HPLC-FLD Method for Determination of Trastuzumab

Year 2019, , 517 - 526, 24.03.2019

Hasan Ertaş , Esra Engin Ercüment Karasulu

https://doi.org/10.18185/erzifbed.524200

Abstract

Trastuzumab (150kDa), insan
epidermal büyüme faktörü reseptörü-2'ye (HER2) karşı yönlendirilen ve
metastatik meme kanseri tedavisi gören hastalarda kullanılan bir monoklonal
antikordur (mAb). Bu biyobenzer ilaçların tedavide kullanılabilmesi için
biyoeşdeğerlik çalışmalarının yapılması gereklidir ve bu çalışmaların başarısı
da analitik yöntemin güvenilirliğine bağlıdır. Bu çalışmada, fluoresans
dedektörü (FLD) ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi
(HPLC) kullanarak toplam Trastuzumab analizi için bir biyoanalitik yöntem
tanımlanmıştır. Trastuzumab, protein G
kolonu kullanılarak sıçan serumundan izole edildikten sonra glisinle elüe
edilerek, elüent, uyarma ve emisyon dalga boylarının sırasıyla 278 ve 343 nm'ye
ayarlandığı HPLC sistemine enjekte edilmiştir. Akış hızı, kolon türü hareketli
faz türü ve bileşimi ve örnek hazırlama aşamasında kullanılan elüent gibi
deneysel parametreler, piklerin ayrılması ve geri kazanım yüzdeleri dikkate
alınarak optimize edilmiştir. Optimum koşullar altında kalibrasyon grafiği
oluşturulmuş ve belirtme alt sınırı 5.3 µg/mL olarak hesaplanmıştır. Bu
yöntemin farmakokinetik çalışmalar için uygulanabilirliği tartışılmıştır.

Keywords

Trastuzumab, Monoclonal antibody, HPLC

References

• Damen et al., 2009a. Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay for the quantification of trastuzumab in human serum and plasma, Damen, C.W.N., de Groot, E.R., Heij, M., Boss, D.S., Schellens, J.H.M., Rosing, H., Beijnen, J.H., Aarden, L.A., Analytical Biochemistry, 391, 114–120