Kronik Myeloid Lösemi K–562 Hücre Hattında Siklofosfamidin Apoptoza Etkileri

Year 2008, Volume: 1 Issue: 2, 12 - 18, 01.06.2008

Ebru Derici Nurcan Aras Ateş Kansu Büyükafşar R. Nalân Tiftik

Abstract

Abstract The Effects of Cyclophosphamide on Apoptosis in Chronic Myeloid Leukemia K-562 Cell Lines Aim: In this study, we aimed to investigate apoptotic effects of cyclophosphamide, which is widely used in the treatment of numerous cancer types, on K-562 cell line, human chronic myeloid leukemia cells, in association with caspase 8. Method: In experiment groups to indicate cytotoxicity, spesific dose of cyclophosphamide for a certain time period was applied and analyzed by Tyripan Blue Exclusion test. After 24 and 48 hours, in experiment groups we carried out RNA isolation with E.Z.N.A total RNA kit and cDNA with first strand cDNA kit. Caspase-8 and housekeeping (glyceraldehydephosphate dehydrogenates GAPDH) gene expression levels were determined by Real-Time online revers transkriptaz RT-PCR. Crossing point (CP) in each groups compared GAPDH and determined expression relative rate (Efficiency). Primary and secondary apoptotic cell portions were determined by Annexin-V FITC kit with flow cytometry. Results: In K-562 cell lines, at the 24th hour the significant increase in caspase-8 expression level in cyclophosphamide 10-7 M and 10-6 M groups when compared with the negative control. At the 48th hour, increase in all groups were seen, but only 10-6 M group was significantly increased. Conclusion: This study indicates that cyclophosphamide is inducing apoptosis.

Keywords

K-562 cell line, apoptosis, cyclophosphamide, Real-Time PCR, flow cytometry

Kronik Myeloid Lösemi K–562 Hücre Hattında Siklofosfamidin Apoptoza Etkileri

Abstract

Türkçe Özet:Amaç: Bu çalışmada, insan kronik myeloid lösemi K–562 hücre hattında, çeşitli kanser türlerinde yaygın olarak kullanılan siklofosfamidin, kaspaz-8 ile ilişkili olarak apoptoz üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı. Yöntem: Deneysel gruplarda sitotoksisiteyi göstermek için belirli dozlarda siklofosfamid uygulandı ve tripan mavisi canlılık testi ile analiz edildi. Deney gruplarında 24. ve 48. Saat sonra E.Z.N.A. total RNA kiti ile RNA ve first strand cDNA kiti ile cDNA elde edildi. Kaspaz–8 ve gliseraldehidfosfat dehidrogenaz gen ekspresyonları, Real–Time online Revers Transkriptaz Real–Time PCR yöntemi ile belirlendi. Her grubun geçiş noktası değeri, gliseraldehidfosfat dehidrogenaz ile karşılaştırıldı ve ekspresyonların rölatif oranı saptandı. Erken ve geç apoptotik hücre sayıları Annexin–V FITC kiti ile akım sitometrede gösterildi. Bulgular: K–562 hücre hattında, 24. saatte siklofosfamitin 10-7 M ve 10-6 M gruplarında, kaspaz–8 geni için negatif kontrole göre kıyaslandığında ekspresyon düzeylerinde anlamlı bir artış saptandı. 48. saatte tüm gruplarda artış olmasına karşın, siklofosfamitin 10-6 M grubunda bu artış anlamlı bulunmuştur. Sonuç: Bu çalışma, siklofosfamitin apoptozu indüklediğini göstermektedir.

Keywords

K–562 hücre serisi, apoptoz, siklofosfamid, Real-Time PCR, flow sitometri

References

• Ulukaya E. Kanser, Apoptoz, Onkogram. Erişimzhttp://biyokimya.uludag.edu.tr/ dersnotlari.html Erişim Tarihi: 02.06.2008.
• Öztürk F. Apopitoz. İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi Dergisi 2002;9(2):143—8.
• Öniz H. Apoptoz: Ölmeye Yatmak. SSK Tepecik Hast Dergisi 2004;14(1):1—20.
• Erdoğan BB, Uzaslan EK. Apoptozis mekanizmaları: tümör gelişiminde Fas-FasL bağımlı apoptozis. Akciğer Arşivi 2003 ;4: 165—74.
• Türkiye’de Kanser İstatistikleri. Türk Kanser Araştırma ve Savaş Kurumu. Erişim: http://www.turkcancer.0rg/newsfîles/ 60turkiye_kanser_istatistikleri—2.pdf Erişim Tarihi: 02.08.2008
• Dubois RN. New paradigms for cancer prevention.
• ll. Fritz G, Kaina B. Rho GTPases: Promising cellular targets
• for novel anticancer drugs. Carr Cancer Drag Tar
• Liebermann DA, Hoffman B. Differentiation primary
• response genes and proto-oncogenes as positive and
• Callus BA, Vaux DL. Caspase inhibitors: viral, cellular and
• chemical. Cell Death DzŞ‘er 2007;14:73—8.
• Ujibe M, Kano S, Osanai Y, Koiwai K, Ohtake T, Kimura
• K, Uwai K, Takeshita M, Ishikawa M. Octylcaffeate
• Curtin, JF, Cotter TG. Apoptosis: Historical perspectives.
• Assays Biochem 2003;3911—10.
• Jaattela M. Multiple cell death patways as regulators of
• tumor initiation and progression. Oncogene
• Akyol H. Kemoterapinin temel ilkeleri. XIII. TPOG Ulusal
• Pediatrik Kanser Kongresi Özet Kitabı, Hemşire Programı,
• Ferreira CG, Span SW, Peters GJ, Kruyt FA, Giaccone G.
• Chemotherapy triggers apoptosis in a caspase—8-dependent
• Vrdoljak E, Bill CA, Stephens LC, van der Kogel AJ, Ang
• KK, Tofılon PJ. Radiation—induced apoptosis of
• Kerr JF, Winterford CM, Harmon BV. Apoptosis. Its
• significance in cancer and cancer therapy. Cancer l994;73(8):2013—26.
• Kumar S. Caspascs and their many biological functions. Cell Death Differ 2007;14:1—2.
• Timmer JC, Salvcsen GS. Caspase substrates. Cell Death Diğer 2007; 14:66—72.