Effects of calcitriol and prednisolone on steroidogenic function in TM3 leydig cells
Öz
Purpose: This study aimed to investigate the effects of prednisolone and calcitriol on metabolic activity, steroidogenesis, and apoptosis-related markers in TM3 Leydig cells under human chorionic gonadotropin (hCG)-stimulated conditions.
Materials and Methods: TM3 Leydig cells were divided into six groups: control, hCG, calcitriol, hCG + prednisolone, hCG + calcitriol, and hCG + prednisolone + calcitriol. CCK-8-based metabolic activity was evaluated using the CCK-8 assay. 3β-HSD and caspase-3 expression levels were examined immunocytochemically. Testosterone and INSL3 levels in the supernatant were measured by ELISA.
Results: CCK-8-based metabolic activity increased in the hCG-treated group compared with the control group (116.88 ± 5.54% vs. 100.00 ± 6.80%). In contrast, metabolic activity decreased to 60.12 ± 5.53% in the calcitriol group, 45.02 ± 7.23% in the hCG + prednisolone group, 50.52 ± 2.97% in the hCG + calcitriol group, and 38.17 ± 3.54% in the triple-combination group. Total caspase-3-positive area was highest in the calcitriol-treated group (5.35 ± 1.38%). Testosterone levels were highest in the hCG + calcitriol group (34.39 ± 0.64 ng/mL). INSL3 levels increased from 41.02 ± 0.38 pg/mL in the control group to 50.28 ± 3.97 pg/mL in the calcitriol group, whereas they decreased to 35.57 ± 0.81 pg/mL in the hCG group and 35.06 ± 0.86 pg/mL in the triple-combination group.
Conclusion: These findings suggest that the effects of calcitriol on Leydig cell responses may vary according to the conditions of administration, and that the suppressive effects of prednisolone may be modulated by accompanying stimuli.
Anahtar Kelimeler
TM3 Leydig cells, Calcitriol, Prednisolone, Human Chorionic Gonadotropin, Testosterone, INSL3, 3β-HSD, Apoptosis
TM3 leydig hücrelerinde kalsitriol ve prednizolonun steroidogenik fonksiyon üzerine etkileri
Öz
Amaç: Bu çalışmada, TM3 Leydig hücrelerinde hCG ile uyarılmış koşullarda prednizolon ve kalsitriolün metabolik aktivite, steroidogenez ve apopitozla ilişkili belirteçler üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı.
Gereç ve Yöntem: Çalışmada TM3 Leydig hücreleri; kontrol, hCG, kalsitriol, hCG + prednizolon, hCG + kalsitriol ve hCG + prednizolon + kalsitriol olmak üzere altı gruba ayrıldı. CCK-8 temelli metabolik aktivite CCK-8 yöntemiyle değerlendirildi. 3β-HSD ve Kaspaz-3 ekspresyonları immünositokimyasal olarak incelendi. Süpernatanda testosteron ve INSL3 düzeyleri ELISA ile ölçüldü.
Bulgular: hCG uygulanan grupta CCK-8 temelli metabolik aktivite kontrol grubuna göre artış gösterdi (116.88 ± 5.54% vs. 100.00 ± 6.80%). Buna karşılık metabolik aktivite kalsitriol grubunda 60.12 ± 5.53%, hCG + prednizolon grubunda 45.02 ± 7.23%, hCG + kalsitriol grubunda 50.52 ± 2.97% ve üçlü kombinasyon grubunda 38.17 ± 3.54% olarak azaldı. Total kaspaz-3-pozitif alan en yüksek kalsitriol grubunda izlendi (5.35 ± 1.38%). Testosteron düzeyi en yüksek hCG + kalsitriol grubunda saptandı (34.39 ± 0.64 ng/mL). INSL3 düzeyi kontrol grubunda 41.02 ± 0.38 pg/mL iken, kalsitriol grubunda 50.28 ± 3.97 pg/mL’ye yükseldi; hCG ve üçlü kombinasyon gruplarında ise sırasıyla 35.57 ± 0.81 pg/mL ve 35.06 ± 0.86 pg/mL’ye düştü.
Sonuç: Bulgular, kalsitriolün Leydig hücre yanıtları üzerindeki etkilerinin uygulama koşullarına göre değişebildiğini, prednizolonun baskılayıcı etkilerinin ise eşlik eden uyarılarla modüle edilebildiğini düşündürmektedir.
Anahtar Kelimeler
TM3 Leydig hücreleri, Kalsitriol, Prednizolon, İnsan Koryonik gonadotropin, Testosteron, INSL3, 3β-HSD, Apoptoz