Türkiyede izole edilen Brucella suşlarının İdantifikasyonları

Yıl 1961, Cilt: 1 Sayı: 3, 155 - 183, 01.06.1961

Mesadet Doğuer

Öz

1 - Laboratuvar kayıtlarımıza göre, son seneler içinde inek, koyun, keçi ve manda ceninleriyle, inek ve koyun sütlerinden olmakvüzere 94 adet Brucella suşu izole etmiş bulunuyoruz. Denemelerimize bunlardan 33'ünü dahil ettik. Kontrol suşu olarak da Br. abortus 544 (Weybridge), Br. melitensis 16 M (Beltsville), Br. suis 1330 (Minneapolis) ile Br. ovis (New Zealand- Buddle) suşlarını kullandık.
2 - İzolasyon tarihleri eski olan suşlar denemelere başlamadan evve Jiyoflize edilmiş olarak muhafaza edilmekteydiler. Kreması alınmış, steril süt içinde liyofilize edilmiş olan bu suşlar 5 sene müddetle canlıiıklarını muhafaza etmişlerdir. Müteakip seneler içinde de
canlılık kontrallarına devam edilecektir.
3 - (R) ve (S) kolonilerinin tefriki maksadiyle kullanılmış olan iki farklı (1/500, 1/1000) acriflavin solusyonu ile Thermo-aglutinasyon testlerinden aynı neticeler elde edilmiş, 33 suş'un yapılan kontrol' arında bu iki test tamamen birbirine tetabuk etmiştir.
4- 94 adet suşun İzolasyonları esrrasındaki müşahadelerimize göre ilk izole edildiklerinde Br. melitensis, Br. abortus'dan umumiyetle daha kısadır.
5 - Suşların CO₂e olan ihtiyaçları tabloda ( +) işaretiyle gösterilmiştir. Bu kontrollar ilk izole edildiklerinde yapılmıştır .
13 No. lu suş müstesna denemelerin yapıldığı . sırada üç kontrol suşuda dahil olmak üzere bütün suşlar CO₂e ihtiyaç göstermeden üremişlerdir. Br abortus 544 kontrol suşu .ise açıkta pek az üreyebilmiş desikatörde ise bol kültür elde edilmiştir.
6 - Eski tarihli Bruceila suşlarının H₂S kontrolları bu mesaiye başladığımız zamanda yapılmışsa da yeni tarihli suşlar bu bakımdan ilk izole edildiklerinde kontrol edilmişlerdir. Bu testin her gün yeni bir kağıt ilavesi şeklinde yapılmayıp teste tabi tutulacak suşdan 4 yatık jeloza pasaj edilip bunlara konan acetatlı kağıtların her gün birinden alınması, tüplerin açılıp kapanması esnasında H₂S gazının ziyanını önlemek bakımından daha uygun bulunmuştur.
7 - Kontrol suşları gibi yerli suşlar da boyalı vasatlarda yapılan denemelerde kendilerine has ohm karakter leri göstermişlersede Br. ovis her iki boyanın 1/25000 konsantrasyonunda inhibe olmamıştır. Thioninle yapılacak stok solusyonlarda boyanın havanda iyice ezilmesinden sonra distile su ilavesiyle Benmari şeklinde kaynatılmasından iyi neticeler alınmıştır . Boyalar tarafından inhibe edilen suşların hizasında (-) işareti vardır.
8 - Suşların Urease aktivite kontrollarından alınan neticeler tabloda dakika olarak gösterilmiştir. Bunlar bir deneme devresi (8 saat) içinde elde edilen reaksiyonlardır. Bu müddet içinde üreyi parçalayamıyanlar .(-) işaretiyle gösterilmiştir. Kontrol suşlarından, Br. abortus ve Br. melitensis bu denememizde kendilerine has karakterleri. hemen, hemen göstermişlerdir. 'Tabloda da görüleceği' üzere tipik, yerli Br. abortus suşlarının ürease aktiviteleri umumiyetle yavaş diğerlerinin ise mütehavvi!dir. Urease vasatının hazırlanmasında ve metodun tatbikinde yapılacak ufak bir hata neticeyi çok fazla inhiraf ettirebileceğinden bu teste büyük bir itina gösterilmesi icap etmektedir. Bu sebeple Bauer vasatma mikrobun muayyen kesafetteki suspansiyonundan yine muayyen miktarda ilavesinin ve boya inhibisyon testlerinde tabJet boyalarının kullanılasının,tedariki mümkün olmadığı taktirde, suşların muayyen kesafette suspansiyonları yapıldıktan sonra boyalı vasatlara çizgiler halinde sürülmesinin daha uygun olacağı neticesine varılmıştır.
9 - Tabloda görüleceği üzere, Bioşimik, kültürel, ve serolajik olarak karakterlerini tesbit ettiğimiz 33 yerli Brucella suşundan 16'sı tipik Br. abortus. 2'si a/m, diğer ikisi m/a olmak üzere 4 adet suş intermedier karakterde bulunmuştur. Bunlardan başka 13 suş ise atipik olarak vasıflandırılmıştır.
10 - Bugüne kaçlar Türkiye'de Brucella suis nev'ine dahil bir suş izole edildiği hususunda bir kayda rastlanmadığı gibi bu araştırmamızda da ne Br. suis ne de Br. ovis karakterinde bir suş tesbit edilmemiştir.

Anahtar Kelimeler

Brucella, Brucella suşlarının İdantifikasyonları

Teşekkür

Enstitümüzün ilmi terakkisi hususunda samimi gayretlerini heran müşahade etmekte olduğumuz Sayın Müdürüm Dr. Fikri Çizmen'e, bu mesainin devamı müddetince göstermiş olduğu müzaharetten dolayı çok minnettarım. Laboratuvarımızın günlük işleri arasına sığdırmağa çalıştığımız bu araştırmanın tamamlanması için bütün gayret ve hüsnüniyetleriyle bana yardımcı olan kıy­metli laboratuvar arkadaşlarıma da bu vesileyle teşekkür etmeği bir borç bilmekteyim. Bakterioloji enstitülerine intisap edecek genç meslektaşlarımıza örnek olacak bir feragatla çalışan Asistanımız Necati Ünlüleblebici'nin bu araştırma esnasında bir laboratuvar iritanı neticesi Bruceila enfeksiyonu geçirdiğini de bu arada teessürle bildiririm.

TYPE DIFFERENTIATION OF BRUCELLA STRAINS ISOLATED IN TURKEY

Öz

1. According to our laboratory entries of last years, a total of 94 Bruceila strains have been isolated from sheep, goat, water buffaloe, and cow foetuses as well as from cow and sheep milk. We have made use of 33 of these in our tests, and as checking control strains we have adopted Br. abortus 544 (Weybridge) and Br. melitensis 16 M (Beltsville), Br. suis 1330 (Minneapoİis) anci Br. ovis (New Zealand). This work had been done by us for the first time in Turkey.
2. Strains with old isolation dates were being kept in a lyophilized condition before the starting of tests. These strains which were kept in decreametized and sterilized milk kept their vitality for 5 consecutive years. Checks on their vitality will aslo continue in the years to come.
3. Similar results have been obtained by Thermo - aglutination tests with two different Acriflavin solutions, used for the purpose of separating (R) and (S) colonies, and at checks on 33
strains these two tests completely agreed with each other.
4. Acco,rding to our observations during the isolations of 94 strains, Br. melitensis is shorter than of Br. abortus when first isolated.
5. Needs for C02 of strains have been marked ( +) on the Table and controls have been carried out at the first dates of strains' isolations. With the exception of strain No. 13, all strains were
being subjected to growth without the need for C02. Although three of the dassic strains were growing Br. abortus 544 could rıot grow in the open, but gave a fine culture when put in jar
containing 10 % added co::?.
6. H2S tests of old- isolated strains were carried out at the time we were starting tests and checks, of the newly isolated strains for H₂S, were carried out when first isolated. It was deemed
proper in order not to waste H2S gas during the opening and dosing of the tubes- not to ·add a new paper every day, but to subculture to the four slope agars from the tube to be subjected
to test and take from one of these everyday the acetate papers which were to be added to these 4 slope agars.
7. Control and native strains have displayed their peculiar characteristics at tests in media containing dyes. Br. ovis could not be inhibited at 1/25000 eonentrations of both dyes. In stock
solutions formed by Tionine good results were obtained when the dye was Benmari boiled in added distilled water, after having been finely ground in a mortar. Strains inhibited by dyes
were marked (-).
8. Results .of urease activity controls of ·strains were indicated on the Table in minutes. These are reactions obtained within a test period of 8 hours. Those, who could not utilize the urea are
marked (-). Although Br. suis, Br. abortus, and Br. melitensis of tests strains have almost fully displayed their ·peculiar characteristics. As it is to be seen from the Table, urease activities of typ!cal or intermediary native Br. abortus strains are generally slow, whereas those of melitensis strains are variable. In fact, these result are characteristics of these species. Extreme care should be taken in the preparation of Bauer's medium as well as in the carrying out of this test, since even a smail mistake will change the result. Thus, it was found out that the safest method
would be to add to the Bauer.s medium a certain amount of the germs from its suspension at a certain concentration, and the use, for dye :nhibition tests, of tabJet dyes. 

9. As it is to be seen again from the Table, 16 of 33 native Bruceila strains, whose characters we have determined through cultura1, biochemical and serological tests, were found tpical
Br. abortus. ·we have also found 2 aj m, 2 m/ a intermedia and 13 Atypical strains 
10. In this research of ours : No report of either Br. suis or Br. ovis isolation in Turkey has been encountered w!th, and We did not come across any of these two strains in our tests.

Anahtar Kelimeler

Turkey, Brucella

Kaynakça

• Bendtsen, Herluf {1954).«On the differentiation of Brucella Bacteria» Statens Yeterinaere SerumLaboratorium 303 Copenhagen · Denmark.
• Bergey's Manual of Determinative Sacteriology {1948).
• Börger, K. and Karsten, F. (1960) .«Differentiation of Brııcella abortus and Br. melitensis by pathogenicity tests in pragnant go'ats.» The Vet. Büll. Vol, 30 No. 7 July, 1960.
• Cameron, H. S. ve ukadaşları (1952).<<Comparative metabolic studies on the genus Brucella». Jour. of Bact. Vol. 64 No. 5.
• Cameron, H. S. ve M'argaret E. Meyer (1954).<<Comparative metabolic studies on the genus Brucella». Journal of Bact. Volume. 67 No. 1.
• Cameron, H. S. ve Meyer, M. E. (1958).<<Metabolic studies on Brucella neotomae». Jour. Bact. 76, The Vet. Bull. Vol. 29, No. 6 June, 1959.
• Drimmelen, G. C. (i 960).<<Preliminary report on Bruceila types is~lated in South Africa.» Vet.Bull. Vol. 30, No. 8 August, 1960.
• Erdöl, Z. A. (1950).182<<Tiirkiye'de Brucelloz. Etlik Enstitüsünde son on beş yıllık teşhis çalışmaları. Etlik aglutinasyon testinin hazırlanma tekniği. Çeşitli teşhis taamülleri hakkında mütalaalar.» Türk Vet. Hek. Dern. Dergisi Sayı :49 · 50 Ekim· Kasım, 1950.
• Gaiger ve Davies Veterinari Pathology and Sacteriology (1955).
• Geissler, A. ·(1959).«İmportance of urease activity in Bı:ucella. » The Vet. Bül. Vol. 30 No. 4April, 1960.
• Huddleson, F. (1943).<<Brucellosis in man and animals.» Neu York.
• Karsten, F. (1960).«Brucella suis as a ınutant of Brucella melitensis.» The Vet. Bul!. Vol.30, No. 7 July, 1960.
• Kelser, R. A. and Schoening, H. W. (1948).Manual of . Veterinary Bacteriology.
• Kremery, V. (1959).<<Utilization ofperoxidase activity_ of Brucella for -quick typing of Brucella suis.» The Vet. Bull. Vol. 30, 6 June, 1960.
• Jones M. L. (1958).«Bacteriological methods used in the study of Brucellosis.» W. H. 0 ./Bruc/ 187, 24 April, 1958.
• Margaret", E. :Meyer and Cameron, H. S. (1959).«Comparative ınetabolisın of species and types of organisms within the genus Brucella.» Journal of Bacteriology Vol. 78 No. 1 July, 1959.
• Morgan, B. (1960).«Brucella Bacteriophage». Central Vet. Lab. Weybridge, England. Centos seminar on Brucellosis, Pendik - Istanbul.
• Newson's Sheep Diseases (1958) Annexe H, To, EC/ 9/ AG/ D3.
• Pickett, M. J. ve arkadaşları (1953).<<Speciation wi!\.hin the genus Brucella. Evulation of differential Dyc, J3iochchemical,and Serological Tests.» Journal of Bacteriology Voluıne . 66, No. 2 August, 1953.
• Pickett, M. J. ve Nelson, E. L. (1954).«Nitrate. eduction and Nitrite Toxicity tests» Journal -of Bacteriology volume. 68, No. 1.
• Renoux, G. (1958).<<La Notian D'Espace Dans, Le genı· e Brucella.» Extrait Des Annales cl2L'Institut Pasteur Febries 1958, _Tome. 94.
• Renoux, G. (1960).«New bacteriostatic tests foı; differentiating Brucella strains.» The Vet.Bull. Vol. 30, No. 9 September, 1960.
• Stablefortli, A. W. and Galloway, I.A. (1959).«lnfections Diseases of Animals. Diseases Due to Bacteria.» Volume. !Butterworths Scientific Publications - London.
• Stableforth, A. W. (1960).«Species of Brucella and their general distribution.» Central Vet. Lab.Weyhridge, England._ Cento serri-inar on Brucellosis, · Pendik- istanbul.
• Topley and Wilson's (1957).<<Principles of Bacter.iology and lınmunity :» Volume. I.
• Wundt, W. (1959).<<Antigenic structuı·e of ·..strains of intermedlate types of the. Brucell:group.». The Vet. Bull. Vol. 30, No. 8 August; 1960.
• Joint FAO/Who, Expert, -Committee on Brucellosis (1951, 1953! 1958) 37, 67, 148 numaralı üç rapor.